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相似文献
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1.
【目的】优化绿盲蝽Apolygus lucorum体内植物DNA提取方法,为绿盲蝽寄主利用习性研究发展DNA分子追踪技术。【方法】首先分别利用CTAB法、两种试剂盒法提取绿盲蝽中肠内DNA样本,比较分析其中的棉花DNA检出率。其次,利用1%~1.5%的次氯酸钠溶液漂洗绿盲蝽成虫,比较不同漂洗处理对绿盲蝽体表植物DNA的清除效率以及对体内棉花DNA检出率。【结果】不同提取方法对绿盲蝽中肠内棉花DNA检出率存在显著影响,其中CTAB法提取的中肠样本中棉花DNA的检出率最高。将绿盲蝽成虫在1%~1.5%次氯酸钠中漂洗5 s,可清除成虫体表的植物DNA污染,且不破坏体内的棉花DNA;漂洗30 s后,体内棉花DNA检出率明显降低。【结论】本研究证实了利用整头绿盲蝽成虫代替其中肠提取的绿盲蝽DNA样本的可行性,并明确了成虫体内植物DNA高效提取的方法,为进一步利用DNA分子追踪技术研究绿盲蝽田间寄主选择与取食行为奠定了重要基础。  相似文献   

2.
为筛选和建立风沙土中总DNA的提取和纯化方法,选取了5种直接提取法、1种间接提取法和2种纯化法分别对风沙土中总DNA进行了提取和纯化,并对其质量和产量进行了比较.结果表明:6种方法均可从风沙土中提取到大小为23 kb左右的总DNA,其中改进后的高盐提取法(用40%聚乙二醇8000和4 mol·L-1 NaCl沉淀DNA)效果最好,纯化后总DNA的纯度最高,可进行16S rDNA的PCR扩增,且产量仅稍低于试剂盒提取法;电泳加柱回收纯化法的纯化效果较好,经该方法纯化后的总DNA大部分可进行PCR扩增,可满足后续分子操作对DNA纯度的要求.    相似文献   

3.
针对蓝猪耳(Torenia fournieri L.)叶片中多糖、色素等物质严重干扰总DNA提取质量的问题,以蓝猪耳叶片为试验材料,分别采用高盐低pH值法、SDS法、CTAB法提取总DNA,并从样品电泳图谱、纯度、得率等方面对三种方法进行评价。结果表明,CTAB法提取总DNA的产率较高、纯度最好,是蓝猪耳总DNA提取的最佳方法。  相似文献   

4.
目的比较不同方法提取鸡肠道菌群总DNA的差异,为分子方法分析肠道菌群组成提供质量较高的DNA模板。方法采用反复冻融法、酶裂解法和试剂盒法(E.N.Z.A Stool DNA Kit)来提取鸡肠道菌群的总DNA,并根据DNA浓度及纯度、16S DNA扩增产物和ERIC-PCR产物所反映的片段多态性4个指标,对这3种方法提取的DNA质量进行比较。结果3种方法均能提取DNA,所得DNA都可以用于16S DNA的扩增,但后2种方法所得DNA的ERIC-PCR结果能反映出更高的菌群多样性。结论试剂盒法和酶裂解法所提取的DNA质量好,适合用于肠道菌群的分子生态研究。  相似文献   

5.
红豆杉属植物三种不同总DNA提取方法的分析比较   总被引:3,自引:0,他引:3  
刘杰  高连明 《广西植物》2011,31(2):244-249
红豆杉属植物均为濒危物种,也是国家一级保护植物.以红豆杉属植物叶片为材料,利用三种不同的DNA提取方法提取总DNA,用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳方法检测所得总DNA的得率和纯度,用PCR扩增的方法检测所得总DNA的质量,并对三种不同提取方法的结果进行了比较分析.结果表明:CTAB法提取的DNA纯度和得率均较高,可直接用...  相似文献   

6.
以短序大功劳嫩叶为材料,采用CTAB法、CTAB改良法1、CTAB改良法2、SDS法和试剂盒法五种方法提取短序十大功劳基因组总DNA,用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳方法检测所得总DNA的纯度和得率,用ISSR-PCR扩增的方法检测所得总DNA的质量。结果表明,五种方法均能从短序大功劳叶片中提取到基因组DNA,但不同方法提取得的基因组DNA的纯度、浓度和得率存在明显的差异。CTAB改良法2和试剂盒法提取的DNA纯度高,可直接用于下游分子生物学实验,CTAB法、CTAB改良法1和SDS法提取的总DNA质量较差,不利于下游的分子生物学实验;五种方法提取的总DNA的得率在10.836~451.709μg/g之间,呈CTAB法>SDS法>CTAB改良法1>CTAB改良法2>试剂盒法的现象。此实验获得的结果可以为短序十大功劳分子生物学研究提供基础。  相似文献   

7.
鸢尾属药用植物总DNA提取方法的比较研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
以鸢尾属(Iris L.)药用植物鸢尾Iris tectorum Maxim.叶片为材料,分别采用CTAB法、高盐低pH法、SDS法和试剂盒法四种方法提取植物总DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、ISSR和RAPD四种方法对所提取的DNA样品进行检测。结果表明,用SDS—I法提取的植物总DNA纯度、浓度和完整性都很高,从经济角度考虑优于用试剂盒提取,从提取效果考虑不亚于用CTAB法和高盐低pH法提取,是比较适合鸢尾属植物总DNA提取的方法。  相似文献   

8.
高温环境样品总DNA直接和间接提取方法的比较   总被引:6,自引:0,他引:6  
分别采用两种环境总DNA直接提取法和一种间接提取法从6种温泉菌席样品中提取总DNA,以DNA粗产物的纯度、能否用于后续PCR扩增及PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)所反映的微生物多样性为评价指标对两类方法进行比较和评价。研究发现,虽然间接提取法效率低下,但对于高温极端环境中生物量较小的样品,间接法能得到有研究价值的、纯度较高的环境样品总DNA,而直接法得到的DNA量小且不适于PCR扩增操作。在使用这2类方法都能得到可用于研究操作的DNA的情况下,间接提取法能更好的体现环境样品中微生物的多样性。  相似文献   

9.
两种提取肠道微生物总DNA方法的比较   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的比较肠道微生物总DNA两种提取方法的优缺点。方法采用苯酚-氯仿抽提法和试剂盒法提取肠道微生物总DNA,比较其作为模板扩增细菌16S DNA的优缺点。结果两种方法提取的细菌DNA均能用于后续PCR扩增的模板。酚-氯仿抽提法经济可靠,但提取的DNA量及纯度较低试;剂盒法提取方便,操作简单,质量稳定,易标准化,但成本高。结论两种方法各具优缺点,应根据实验室条件和实验要求进行选择。  相似文献   

10.
四种小鼠肠道微生物DNA提取方法比较   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
采用异硫氰酸胍(guandine thiocyanate,GITC)法、Tiangen DNA提取试剂盒、Omega DNA提取试剂盒和广泛应用的十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法提取小鼠粪便微生物总DNA,通过比较所提取DNA的浓度和纯度,发现粪便DNA提取试剂盒提取的DNA纯度最高但浓度最低;CTAB法所得的DNA浓度最高但纯度最低;GITC法所得DNA的浓度高于粪便DNA提取试剂盒,纯度高于CTAB法。通过变性梯度凝胶电泳(16S r DNA-PCR-DGGE)指纹图谱分析技术进一步比较了各种提取方法所代表微生物群落的丰富度和多样性。结果表明,GITC法提取得到的DNA所代表细菌的丰富度和多样性显著高于其他3种方法。本实验所建立的GITC法可更全面地反映肠道微生物的多样性和群落结构,是一种较为理想的粪便微生物DNA提取方法。  相似文献   

11.
工业化废水处理反应器污泥总DNA提取方法   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
根据工业化废水处理反应器污泥特性,对常规的溶菌酶-SDS-酚/氯仿环境样品总DNA提取方法进行改进,增强样品预处理,强化细胞裂解,提高杂质去除效率,获得了一种工业化污泥总DNA提取的通用方法,并采用该方法对石家庄若干实际运行的工业化厌氧、好氧反应器的污泥样品进行了总DNA提取研究.结果表明,该方法对所选污泥样品均有效,具有普适性.提取的污泥总DNA杂质含量少,纯度高,A260/A280在1.8左右;提取效率较高.总DNA产率都在0.7 mg/g以上,最大产率可达0.85 mg/g.所提取的污泥总DNA可以直接作为模板进行PCR反应,PCR产物直接进行变性梯度凝胶电泳(DGGE),能够得到较好的DGGE谱图,表明该方法提取的污泥总DNA样品可满足后续分析研究的要求.  相似文献   

12.
通过比较4种小鼠粪便细菌总DNA提取方法对基于PCR-DGGE检测的肠道菌群多样性分析的影响,旨在建立适于PCR—DGGE的小鼠肠道微生物宏基因组提取的稳定、经济、快捷的方法。采用SDS裂解法、某国产市售粪便DNA提取试剂盒、改进的化学裂解法、改进的溶菌酶法4种方法提取小鼠粪便细菌总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、细菌16S rRNAV3区PCR扩增结合DGGE对提取结果进行比较分析。SDS裂解法和国产市售试剂盒2种方法提取粪便细菌总DNA均未得到理想结果,另2种方法均能够检测到粪便中20种左右的细菌。改进的化学裂解法和改进的溶菌酶提取法的建立为基于PCR—DGGE进行肠道菌群结构的定量及定性分析提供了可靠的前提基础和实验保障。  相似文献   

13.
A new improved method that reproducibly measures small perturbations of mitochondrial DNA in populations of cells has been developed. It is based on first obtaining a cell count and then analyzing three aliquots of cells: one for total DNA per cell by fluorometry, one for total protein per cell and one for the amount of mitochondrial DNA per microgram of total cell DNA. To quantitate mitochondrial DNA, 0, 1, 2, and 3 nanograms of mouse mtDNA purified from a plasmid are added as internal standard DNA to four 1.0-microgram samples of purified total cell DNA containing an unknown amount of mitochondrial DNA (a sample set). Three sample sets are electrophoresed in an agarose gel devoid of ethidium bromide. Following Southern transfer to nitrocellulose and hybridization to purified 32P-labeled mouse mitochondrial DNA, an autoradiogram is prepared for use as a template to locate the mitochondrial DNA bands. These bands are cut out of the nitrocellulose filters, and their 32P-content is determined using a liquid scintillation counter. For each sample set, the counts per minute is plotted against the amount of mitochondrial DNA added. The plot is linear and the negative average of the values for the three intercepts on the x-axis yields the amount of nanograms of mitochondrial DNA per microgram of total cell DNA. The method is highly reproducible with a standard deviation of approximately 9 percent. The advantages of using this method over others that have been reported are discussed.  相似文献   

14.
野老鹳草DNA的提取方法及RAPD分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:以野老鹳草(Geranium carolinianum L.)的茎、叶为材料,研究野老鹳草DNA的提取方法及RAPD的分析。方法:采用CATB法、高盐低pH法和SDS法分别提取野老鹳草的基因纽DNA,并对3种方法进行了一些改进。通过RAPD分析所提取的DNA,比较所用的提取方法。结果:比较DNA产量、质量等,确定了高盐低pH法较佳。结论:干燥的材料和新鲜的材料均可提取得到DNA,高盐低pH法提取的效果优于CTAB和SDS法。  相似文献   

15.
目的:建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法,以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度、得率、耗费时间,并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率最高,异丙醇沉淀法最低;而纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减;在耗时上鼠耳煮沸法最短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本最低,快速、基因型鉴定结果可靠,可用于规模化的基因型鉴定实验中。  相似文献   

16.
For the determination of the residual DNA amount after acid hydrolysis of Feulgen's method, a high salt-fluorochrome assay for DNA (5 microM Hoechst 33258 with 1 M NaCl) was effectively applied. At an optimal time length of acid hydrolysis for Feulgen reaction, the ratio of the residual DNA of non-hydrolysis to total DNA is 10% or more in hepatocyte or lymphocyte nuclei. A lot of residual DNA seems not to be negligible in Feulgen's method. A more accurate determination of DNA can be made by correcting the loss ratio of the residual DNA value to Feulgen DNA value. Thus, the combination assay of Feulgen's method with the present fluorometry is enough to measure separately both the amounts of Feulgen DNA and its residual DNA and successfully determines more accurately the total DNA per nucleus by summing both the amounts. The residual DNA, a resistant portion of the chromatin DNA against acid hydrolysis, is a possible constituent as the physiological component of nuclear structures.  相似文献   

17.
We investigated whether a combination of recently introduced methods, total demineralization and ion‐exchange columns, would increase DNA recovery from old bone. Ten bone samples taken after a burial period of ∼60 years were used in this study. Bone powder was digested using total or incomplete demineralization. DNA was extracted by the standard organic method. The DNA extract was purified with ion‐exchange columns or QIAquick® spin columns. The efficiency of different DNA extraction methods was compared in terms of DNA concentration, inhibitors generated by real‐time PCR, and conventional STR typing results. The mean DNA concentration using the total demineralization method is ∼3 times higher than that using the incomplete demineralization method. For DNA purification, the method using QIAquick® spin columns appeared to yield approximately double the DNA than the method using ion‐exchange columns. Furthermore, 2 out of 10 samples showed higher levels of inhibition with CT values of IPC ≥30 cycles when using only ion‐exchange columns. In STR results, total demineralization yielded more locus profiles by 4.2 loci than incomplete demineralization, and QIAquick® spin columns also yielded more locus profiles by 3.5 loci than ion‐exchange columns. Total demineralization of bone powder significantly increased DNA yield and improved STR typing results. However, the use of ion‐exchange columns was not efficient when compared with the method using QIAquick® spin columns. It is suggested that the combination of total demineralization and QIAquick® spin columns lead to greatly improved STR typing results. Am J Phys Anthropol 2010. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.  相似文献   

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