抗人铁蛋白单克隆抗体的制备及其在肝癌病人血清铁蛋白测定中的应用

铁蛋白是一种肿瘤相关蛋白质。我们从人肝癌组织中分离纯化了铁蛋白,并筛选到一株抗该铁蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株（６Ｄ６）,它针对铁蛋白上的构象决定簇,并对人源铁蛋白高度专一。然后我们用此单抗建立了测定铁蛋白浓度的夹心ＥＬＩＳＡ法,并对方法的灵敏度,就确度及特异性作了研究。本法用于测定不同血清标本的结果表明：肝癌病人血清中的铁蛋白浓度明显高于正常人,这可能对临床诊断会有使用价值。     

抗人铁蛋白单克隆抗体的制备及其在肝癌病人血清铁蛋…

铁蛋白是一种肿瘤相关蛋白质,我们从人肝癌组织中分离纯化了铁蛋白,并筛选到一株抗该铁蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株（６Ｄ６）,它针对铁蛋白上的构象决定簇,并对人源铁蛋白高度专一。然后我们用此单抗建立了测定铁蛋白浓度的夹心ＥＬＩＳＡ法,并对方法的灵敏度,精确度及特异性作了研究。本法用于测定不同血清标本的结果表明：肝癌病人血清中的铁蛋白浓度明显高于正常人,这可能对临床诊断会有使用价值。     

无胶筛分毛细管电泳在分析苹果发育时期转变蛋白质变化规律中的应用

对无胶筛分毛细管电泳体系的筛分介质浓度、缓冲体系的离子强度、分离电压、进样量及温度等条件进行了优化, 最终确定最佳分离条件为7.5% Dextran, 7.5%丙三醇, 0.15 mol.L-1 TB, 0.1% SDS, 分离电压23.5 kV, 进样量1.5 ps i×90秒, 温度25°C。应用此方法对金冠×红玉苹果杂种后代韧皮部蛋白质进行测定, 得到了多个与阶段转变相关的蛋白质, 在韧皮部50节上, 有分子量为5.0 kDa的特异蛋白质出现, 分子量为24.5 kDa的蛋白质含量在阶段转变过程中明显升高。     

超高分辨率毛细管等电聚焦—电喷雾质谱联用方法观察蛋白质亚型

在线的毛细管等电聚焦 电喷雾质谱联用 ,作为一种二维的分离系统 ,对毛细管等电聚焦过程中形成的蛋白质亚型进行了分析。这种分析系统通过使用中性的涂层毛细管 (80cm长 )、动态的毛细管位置调整方法和鞘流液接口得以建立。蛋白质首先在毛细管等电聚焦过程中根据它们等电点的差异得到分离 ,然后被电喷雾质谱鉴定。已聚焦好的蛋白质区带通过结合阴极移动和重力移动的方法从毛细管中流出而进入质谱仪。由于在此特定情况下这种方法具有极高的分辨率 ,有三种血红蛋白A和镰刀型血红蛋白的亚型 (具有几乎相同的电荷分布和分子质量 ,但它们的等电点差异在 0 .0 4到 0 .0 8之间 )和两种乳球蛋白A的亚型 (等电点差异为 0 .6 )被检测到。这些蛋白质亚型的等电点、相对含量和分子质量都通过毛细管等电聚焦 电喷雾质谱联用方法同时得到了确定。     

测定血中亚硝酸盐的荧光分光光度法

目的:建立检测血中亚硝酸盐的荧光分光光度法.方法:采用硫酸-磷钨酸去蛋白预处理的方法排除血红蛋白等对测定的干扰,以2,3-二氨基萘与亚硝酸盐反应生成荧光化合物,用荧光分光光度法测定.结果:血标本以硫酸-磷钨酸去蛋白预处理2次,2,3-二氨基萘浓度为0.63 mmol·L-1,反应液和终止反应后pH值各为1.60和1.70,20℃水浴15 min是较适测定条件.检出限24.27 nmol·L-1.健康人血清亚硝酸盐含量为(10.91±2.38)μmol·L-1,95%分布范围为(6.24～15.57)μmol·L-1.结论:本法较为敏感、特异、简便,对一氧化氮的研究有一定价值.     

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)可溶性蛋白毛细管电泳分离

目的建立毛细管电泳技术分离分析盐生杜氏藻(Dunaliella salina)可溶性蛋白的方法.方法河北永年石英毛细管柱57cm i.d×75μm o.d;有效长度50cm.运行缓冲液50 mmol*L-1 pH7.2磷酸缓冲液;分离电压20KV;运行温度20°C;分离时间20min;检测波长280nm;压力进样,5MPa×10s.结果所建立的毛细管分离分析方法将10多种盐生杜氏藻可溶性蛋白有效分离,迁移时间及峰高重现性分别小于2%及10%.结论所建立的毛细管分离分析方法简单、方便价廉和快速.     

HPLC-MS/MS法快速测定人血浆中美利曲辛及生物等效性研究

目的:建立测定人血浆中关利曲辛浓度的高效液相串联质谱法(HPLC-MS/MS),用于氟哌噻吨美利曲辛片的生物等效性研究.方法:以Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6mm× 150mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈(含1%甲酸):0.02mo·L-1甲酸铵水溶液(80∶20,V∶),流速:0.8mL·min-1;柱温:40℃,以醋酸乙酯:二氯甲烷(4∶1,V∶V)为提取剂.样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM)对美利曲辛(m/z 292.2→232.2)和阿米替林(m/z 278.1-91.0)进行测定.结果:美利曲辛的高(50μg·L-1)、中(20μg·L-1)、低(0.5μg·L-1)3个浓度的平均回收率分别为97.53%、104.03%和106.87%,日内(n=5)、日间(n=3)RSD均小于15%;分析方法的最低定量限为0.2μg·L-1.线性范围为:0.2～60μg·L-1,回归方程为:F=1.8691ρ+0.0555,r=0.9986(n=9),权重为1/ρ2.结论:该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血浓监测和药动学研究.     

基于IgG检测为模型的玻璃介质定量蛋白质芯片的研制及评价

为研制高通量定量检测的蛋白质芯片,以人血清IgG为研究模型,选择戊二醛基修饰的玻片为载体,蛋白质样品溶解于20%甘油的PBS,由机械手将浓度为0.5g/L人IgG单克隆抗体点样在玻片上,人血清白蛋白为阴性对照,以1%的BSA为封闭液对蛋白质芯片进行封闭,并经相应处理,构建用于定量检测人血清IgG蛋白质芯片.先以不同浓度IgG标准品为待测样品,建立蛋白质芯片方法和ELISA方法的标准曲线,两条标准曲线的R2值分别为0.996和0.994(P<0.01).两种方法的检测人IgG结果有很好的相关性(R2=0.9937,P<0.01),其敏感性均在15.625μg/L.用两种方法分别检测10例人血清IgG,结果显示两种方法的检测的IgG浓度有很好的一致性,以玻片为载体的蛋白质芯片可用于微量生物样品的定量检测.     

表面活性剂增敏--牛血清白蛋白荧光猝灭法测定槐花中芦丁含量

目的:应用牛血清白蛋白荧光猝灭法建立一种测定槐花中芦丁含量的新方法。方法:牛血清白蛋白(BSA)具有很强的内源荧光性,而芦丁溶液本身不产生荧光。当芦丁与BSA结合后,会导致其荧光强度下降,表面活性剂吐温-80(T-80)对体系有促进荧光猝灭作用。BSA在λex=338nm处的荧光猝灭程度与芦丁的量在一定浓度范围内呈良好的线性关系,据此建立测定槐花中芦丁含量的新方法。结果:该结合物的最大发射波长为λmax=338nm,与芦丁摩尔浓度在6×10-7~3.0×10-5mol.L-1范围内线性关系良好。其线性回归方程为ΔF=136.36CRu(×10-5mol.L-1)-0.5454,相关系数r=0.9976,检出限为1.58×10-7mol.L-1,RSD为2.8%~4.3%,加标回收率为97.6%~101.2%。结论:本方法操作简便、快速,用于实际样本的测定,结果满意。     

樟树林生态系统水文学过程中多环芳烃的迁移与转化机理

依据3a定位研究数据,采用气相色谱法对樟树林生态系统水文过程中PAHs的迁移转化机理进行了研究,结果表明:大气降水中携带的PAHs有10种,总含量为288.662μg.L-1;林内穿透水中PAHs有6种,总含量为101.901μg.L-1;树干茎流水中有5种,总含量为82.069μg.L-1;灌木层和草本层穿透水中只有4种,总含量分别为49.049μg.L-1和74.938μg.L-1。大气降水中的PAHs经过树冠、树干、灌木和草本层的吸收、淋溶和淋洗作用后,有的种类表现为完全被吸收而消失,有的种类浓度大幅度降低,而有的种类则浓度增大。随地表径流迁移水中PAHs有5种,总含量为36.866μg.L-1,与大气降水相比,PAHs种类减少50%,浓度降低87%。同时阐述了水文学过程中PAHs迁移转化机理和樟树林具有较高的净化效能。该项研究为城市森林的铲污机制提供了理论依据。