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相似文献
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1.
重组人白细胞介素-2(rhIL-2)基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过菌体发酵和收集、超声破菌、包涵体抽提、稀释透析初步复性、反相高压液相色谱纯化,终产物纯度大于99%。反相高压液相色谱不仅可以纯化rhIL-2,且使产物的总活性提高7.9-9倍,比活性提高14 ̄18倍,达到1.5×10^7u/mg蛋白质,蛋白得率为50% ̄56%。结果表明,反相高压液相色谱具有纯化和显提高rhH  相似文献   

2.
通过整体实验观察国产重组白介素3(IL-3)对射线和环磷酰胺所致小鼠造血功能低下的疗效;以体外实验分析其疗效机理。实验结果表明:(1)rhIL-3腹腔或皮下连续5天注射能全面提高7Gy照射小鼠9天时股骨骨髓CFU-E、BFU-E、CFU-Mix和CFU-GM的产率和数量,其效果强弱与注射途径和用药剂量有关。rhIL-3对小鼠股骨骨髓有核细胞总数和内源性脾结节数的改善影响小。(2)rhIL-3对环磷酰胺所致小鼠造血功能低下亦有改善效果,并与起用时间和剂量有关。(3)rhIL-3对人骨髓细胞和CFU-GM集落形成有明显的增强作用。小鼠骨髓细胞对rhIL-3缺乏反应;对rmIL-3有增殖分化加强的反应。rmIL-3体外共育能提高正常及照射2Gy小鼠骨髓细胞体外培养后CFU-GM的产率和数量。文中讨论了IL-3的应用前景及合理方案问题。  相似文献   

3.
应用疏水层析对大肠杆菌表达的人重组白细胞介素-4(rhIL-4)进行了纯化,含有rhIL-4的包涵体,经洗涤、变性、复性后,以Butyl-Sepharose层析,得到了高纯度的rhIL-4.纯度达97%;回收率为32%;比活性为2×10~7U/mg,讨论了rhIL-4疏水层析的条件,并对不同的方法纯化白细胞介素-4进行了比较.  相似文献   

4.
重组人白细胞介素-6的纯化   总被引:1,自引:0,他引:1  
重组人白细胞介素-6(rhIL-6)在工程菌pBV220/rhIL-6/DH5a中以包涵体形式高效表达。rhIL-6经过工程菌体破碎、包涵体分离及抽提、复性、色谱分离后得到高度纯化。纯化产物纯度95%,具有良好的生物学活性  相似文献   

5.
孔祥文  丘文 《生物技术》1997,7(6):13-15
为解决8mol/L脲中rhIL-3的定量问题,以卵清蛋白作内标,进行常规SDS_PAGE后,作激光灰度扫描,并计算rhIL-3和卵清蛋白的峰面积,发现两种蛋白峰面积的比值与rhIL-3浓度在0.2-1.0mg/ml间呈良好线性关系。查标准曲线可以计算出8mol/L脲中rhIL-3的含量。重复性测定表明该方法具有较好的重现性。  相似文献   

6.
白细胞介素对大鼠海马培养神经元膜电特性的影响   总被引:1,自引:1,他引:0  
用细胞内微电极记录方法研究了重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)和重组人白细胞介素-2(rhiL-2)对分散培养的新生大鼠海马神经元膜电性质的影响。采用压力脉冲微量给药技术将白介素施加于所记录的细胞表面。结果发现:100U/ml浓度的rhIL-1β使受作用的海马神经元超极化4.20±1.86mV;100U/ml浓度的rhIL-2使50%受作用的海马神经元去极化11.12±3.71mV,并伴有强烈的自发放电反应,而1000U/ml浓度的rhIL-2使100%受作用的神经元超极化3.25±0.63mV,这些神经元的膜阻抗均无明显变化。本实验结果提示rhIL-1β和rhIL-2可显著影响体外培养海马神经元的膜兴奋性。  相似文献   

7.
重组人白细胞介素2(rhIL2)基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过菌体发酵和收集、超声破菌、包涵体抽提、稀释透析初步复性、反相高压液相色谱纯化,终产物纯度大于99%。反相高压液相色谱不仅可以纯化rhIL2,且使产物的总活性提高79~9倍,比活性提高14~18倍,达到15×107u/mg蛋白质,蛋白得率为50%~56%。结果表明,反相高压液相色谱具有纯化和显著提高rhIL2折叠效率的双重功效,为非SDS变复性法生产rhIL2提供了简便有效的方法  相似文献   

8.
白介素-2(IL-2)广泛用于治疗恶性肿瘤,由于大剂量可引起严重的低血压且机制不明,限制了其大剂量的使用。本研究用国产重组人白介素-2(rhIL-2)复制大鼠低血压模型并探讨其机制。24只wistar大鼠随机分成3组(每组n=8):正常对照组,IL-2实验组(rhIL-2)和氨基胍(AG)治疗组。结果显示:(1)IL-2可使大鼠提睾肌微动脉扩张及MAP下降,肺、肾、肝组织Evan′sBlue含量明显增加。(2)AG可使rhIL-2引起的低血压回升及微动脉缩小,肺组织Evan′sBlue含量明显下降。提示:rhIL-2引起低血压,可能与IL-2诱导NO产生,使血管扩张及通透性增加有关。  相似文献   

9.
目的和方法:采用免疫组化方法,观察缺氧对体外培养大鼠海马神经元Bcl-2表达及人重组白细胞介素-6的影响。结果:经rhIL-6孵育的海马神经元缺氧后神经元活存 数、Bcl-2表达阳性神经元数和Bcl-2表达阳性神经元的平均光密度均明显高于对照组。结论:rhIL-6能增强缺氧神经元Bcl-2的表达,抑制缺氧后神经元的死亡,提示rhIL-6参与脑缺氧损伤的调控。  相似文献   

10.
采用免疫组化方法,观察了体外培养大鼠海马细胞对人重组白细胞介素1β(rhIL-1β)抗血清的免疫反应以及缺氧的影响。结果可见,体外培养的大鼠海马神经元和神经胶质细胞对抗rhIL-1β抗血清均呈弱阳性免疫染色反应,缺氧后免疫染色反应明显增强。经图像分析表明,缺氧后神经元和神经胶质细胞的平均光密度均较缺氧前增加,尤以缺氧2h时增加最明显,继续缺氧4─12h,神经元和神经胶质细胞的平均光密度又逐渐减弱。以上结果表明,大鼠海马脑区存在抗rhIL-1β抗血清的免疫反应细胞;缺氧使对抗rhIL-1β抗血清的免疫染色反应增强,提示IL-1β与脑缺氧损伤的调控有关。  相似文献   

11.
毕赤酵母表达重组人白细胞介素11的纯化与鉴定   总被引:8,自引:1,他引:7  
报道了毕赤酵母表达人白细胞介素11的下游工艺研究,并对其产物进行了分析鉴定。所用工艺流程为离心收集上清、超滤浓缩脱盐、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤。所得产物经SDSPAGE电泳、RPHPLC分析、N端和C端序列分析、质谱、等电点分析和生物学活性分析,结果表明:产品纯度大于97%,结构和性质与E.coli融合表达的Neumega完全一致。  相似文献   

12.
苦瓜籽核糖体失活蛋白的理化性质及生物活性   总被引:13,自引:0,他引:13  
采用硫酸铵分级分离,假配基亲和层析和SephacrylS-100分子筛层析等方法,从苦瓜籽中获得核糖体失活蛋白(RIP).经SDS-PAGE、PAGE、IEF和PAS方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带.根据SDS-PAGE和Sephadex G-150分子筛层析结果计算其相对分子质量为3.0×104,经IEF-PAGE结果计算其pI为8.9~9.0.对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显,其IC50为5.3×10- 10 m ol/L左右.体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞、Vero、SP2/0、3T3、Kb、Navana 等肿瘤细胞株均表现有不同程度的抑制作用.而对完整细胞人胚肺二倍体细胞却毒性极小.因此,上述实验结果为该RIP的进一步深入研究和有可能开发成免疫毒素的高效弹头药物提供了一定的工作基础.  相似文献   

13.
将构建好的可表达GST融合蛋白的重组病毒AcMNPV-OCC^--GST-6xHis-Etp28感染Sf9细胞,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行SDS-PAGE分析,结果显示53kDa的融合蛋白(GST-6xHis-Etp28)呈不溶状态。在原有裂解液的基础上,加固体十二烷基肌氨酸钠致终浓度1.5%,并将Triton X-100的比例由1%提高到2%。SDS-PAGE结果显示至少有1/  相似文献   

14.
枯草芽孢杆菌中性β-甘露聚糖酶的纯化及性质研究   总被引:8,自引:0,他引:8  
经硫酸铵分级沉淀、超滤浓缩、阴离子交换层析和凝胶过滤层析,由枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)BM9602培养滤液得到了常规凝胶电泳一条带的中性β-甘露聚糖酶.该酶具有与其它已知同类酶相类似的性质,但用SDS-PAGE测得该酶分子量为37kD;用聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测得等电点pI为4.9.  相似文献   

15.
L-阿拉伯糖异构酶是生物法生产新型功能性因子D-塔格糖最为有效的酶。本文获得了一种新型耐热L-阿拉伯糖异构酶的编码基因araA,来源于Bacillus stearothermophilis IAM 11001,经NCBI Blastn分析,与GenBank中Thermus sp. IM6501 araA序列的同源性为95%,并将该新基因提交到GenBank,获得登陆号:EU394214。以pET-22b(+)为载体质粒,E. coli BL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重组菌,IPTG可诱导目的蛋白的过量表达;经亲和层析纯化的重组蛋白样品进行SDS-PAGE电泳分析,约在59 kDa处出现显著的特征蛋白条带;同时对重组L-AI的活性进行了初步研究,全细胞反应24小时D-塔格糖的转化率为39.8%。  相似文献   

16.
青霉素酰化酶(PGA)在医药工业起着重要的作用,它能够水解青霉素G产生6-氨基青霉烷酸(6-APA)和苯乙酸,6-APA是半合成青霉素的关键中间体.该酶广泛存在于各种微生物中如真菌和细菌中.国际上对E.coli、Arthrobacterviscosu...  相似文献   

17.
利用阴离子交换层析、凝胶过滤及阳离子交换层析三步方法, 从皖南尖吻蝮蛇毒中分离纯化到一个新的抗凝血因子ACFII(anticoagulation factorII) 。纯化的ACFII在PAGE、SDSPAGE和IEFPAGE图谱上均呈单一区带。ACFII由两条分子量为14.6 kD 的肽链通过二硫键连接在一起, 其等电点为7.0。ACFII具有显著的抗凝血活性, 在体外延长PPT 时间的最终浓度为0 .4 mg/L。ACFII不具有类凝血酶活性、磷脂酶A2 活性和纤溶活性,也没有出血活性和毒性, 是一种潜在的高效抗凝药物。  相似文献   

18.
红桂木凝集素的纯化与性质研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
红桂木(Artocarpuslingnanensis)、俗名胭脂,属桑科桂木属,为亚热带、热带植物.红桂木种子含丰富的红桂木凝集素(Artocarpuslingnanensislectin,ALL),但迄今国内外均未见关于它的报道.我们采用Gal-S...  相似文献   

19.
采用壳聚糖固定酶作用的特定底物(菌体细胞),并用戊二醛交联制备成酶的亲和吸附剂。采用该吸附剂纯化溶葡球菌的研究表明,经一步纯化可提高纯度4倍,酶活性回收大于70%。SDS-PAGE的电泳结果显示,产品基本上达到了标准酶的纯度。同时表明该吸附剂没有非特异性吸附。由载体壳聚糖替代Sepharose 4B制备的吸附剂具有简单、快速、较高收得率和操作安全等优点,适用于特定酶或基因工程产品的分离纯化。  相似文献   

20.
Immunoblotting, after polyacrylamide gel electrophoresis with sodium dodecyl sulfate (SDS‐PAGE), is a technique commonly used to detect specific proteins. SDS‐PAGE often results in the visualization of protein band(s) in addition to the one expected based on the theoretical molecular mass (TMM) of the protein of interest. To determine the likelihood of additional band(s) being nonspecific, we used liquid chromatography – mass spectrometry to identify proteins that were extracted from bands with the apparent molecular mass (MM) of 40 and 26 kD, originating from protein extracts derived from non‐malignant HEK293 and cancerous MDA‐MB231 (MB231) cells separated using SDS‐PAGE. In total, approximately 57% and 21% of the MS/MS spectra were annotated as peptides in the two cell samples, respectively. Moreover, approximately 24% and 36.2% of the identified proteins from HEK293 and MB231 cells matched their TMMs. Of the identified proteins, 8% from HEK293 and 26% from MB231 had apparent MMs that were larger than predicted, and 67% from HEK293 and 37% from MB231 exhibited smaller MM values than predicted. These revelations suggest that interpretation of the positive bands of immunoblots should be conducted with caution. This study also shows that protein identification performed by mass spectrometry on bands excised from SDS‐PAGE gels could make valuable contributions to the identification of cancer biomarkers, and to cancer‐therapy studies.  相似文献   

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