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相似文献
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1.
FANG Qin  {  }  XIAO Tiao-yi    LI Lu    ZOU Gui-ping    ZHANG Huai-yun    WANG Ya-pin   《Virologica Sinica》2002,17(2):182-184
本文首次对低温保存的三株草鱼呼肠孤病毒GCRV873 、GCRV875、GCRV876与新分离的GCRV991毒株进行了细胞培养与病毒感染特性等比较研究。结果表明 ,GCRV873 、GCRV875、GCRV876在 - 30℃保存 10年后仍然具有一定的感染性 ,其滴度均在 10 2 TCID50 /mL以上 ,略低于从病鱼组织分离的GCRV991毒株的滴价。经传代培养后 ,四株GCRV的毒力逐渐升高 ,并趋于稳定 ;当感染复数 (MOI)为 0 .0 5PFU/cell时 ,测定四株GCRV的滴度均高于 10 8TCID50 /mL ,但略有差异。GCRV873 的滴度最高 ,可达到 6 .4× 10 11TCID50 /mL。连续传代的GCRV毒株在不同温度 (2 8℃、31℃、34℃、37℃、41℃ )条件下 ,均可感染CIK细胞 ;在 2 8℃时 ,感染效价最高 ,随着温度的升高 ,其感染效价逐渐降低  相似文献   

2.
四株草鱼呼肠孤病毒毒株的细胞感染特性比较研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
本文首次对低温保存的三株草鱼呼肠孤病毒GCRV873、GCRV875、GCRV876与新分离的GCRV991毒株进行了细胞培养与病毒感染特性等比较研究.结果表明,GCRV873、GCRV875、GCRV876在-30℃保存10年后仍然具有一定的感染性,其滴度均在102TCID50/mL以上,略低于从病鱼组织分离的GCRV991毒株的滴价.经传代培养后,四株GCRV的毒力逐渐升高,并趋于稳定;当感染复数(MOI)为0.05PFU/cell时,测定四株GCRV的滴度均高于108 TCID50/mL,但略有差异.GCRV873的滴度最高,可达到6.4×1011 TCID50/mL.连续传代的GCRV毒株在不同温度(28℃、31℃、34℃、37℃、41℃)条件下,均可感染CIK细胞;在28℃时,感染效价最高,随着温度的升高,其感染效价逐渐降低.  相似文献   

3.
草鱼出血病病毒对其它鱼的感染性研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
用草鱼出血病病鱼分离出的草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)感染其它常见鱼并用ELISA方法检查感染鱼组织提取液,结果表明:青鱼、鲢鱼、布氏鳌条对GCHV抗体呈阳性反应;鲤鱼、鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、泥鳅则呈阴性反应。综合感染鱼发病症状及死亡特征,初步认为:青鱼对GCHV是易感的,GCHV能在鲢鱼、布氏蟹条体内增值,但毒力较低,鳙鱼、鲫鱼、团头鲂、鲤鱼、泥鳅能抗GCHV感染。  相似文献   

4.
FANG Qin  {  }  XIAO Tiao-yi    DING Qing-quan    LI Lu    ZHANG Huai-yu    ZHU Zuo-yuan   《Virologica Sinica》2002,17(2):179-181
从湖南长沙分离到一株致病性强的草鱼呼肠孤病毒 (GCRV991) ,该病毒能使草鱼CIK ,肥头鲤FHM细胞产生明显的CPE ,对水生动物BF2 ,EPC及哺乳动物BHK ,VERO细胞株不敏感。中和实验显示 ,GCRV873 抗体能有效地中和GCRV991病毒颗粒 ,形成抗原抗体免疫复合物。纯化的病毒核酸与蛋白经SDS PAGE分离 ,分别呈现 11条清晰的核酸带及 5条主要与 2条微量结构多肽图谱 ,其核酸蛋白分子量大小与GCRV873 相近似。该毒株基因组总分子量为 14.48× 10 6kD ,大小范围是 0 .5 5~ 2 .6 1× 10 6kD ;5条主要与两条微量结构多肽分子量近似值分别为136kD、132kD、6 5kD、43kD、34kD及 138kD、82kD。上述结果提示 ,新分离的GCRV991与GCRV873 具有相似的抗原性  相似文献   

5.
利用自流行性出血热(EHF)病人血液中分离的EHF病毒浙10株,感染长爪沙鼠肾单层细胞,经培养后,按流行性乙型脑炎的生物制品法规要求研制成灭活疫苗。取1ml经肌肉免疫家兔,6天后即可在血液中检出荧光抗体,至第14~21天为最高峰,荧光抗体效价可达320~2560。经活EHF病毒攻击,有明显的保护作用,保护率达90%以上。疫苗经1:10或1:30稀释后免疫家兔,荧光抗体阳转率仍达100%,但抗体滴度明显降低。肌肉接种优于皮下接种。本研究证明,甲醛灭活EHF病毒可破坏血凝素活性,从而影响疫苗血凝抑制抗体的产生,可能也会影响中和病毒的能力。  相似文献   

6.
运用营养液培养法和常规耗竭法,对低浓度(2和10μg·L~(-1))微囊藻毒素MC-LR分别处理6和12 d后梭鱼草(Pontederia cordata Linn.)幼苗根系对不同浓度NH_4~+(0.05~1.50 mmol·L~(-1))和H_2PO_4~-(0.01~0.50mmol·L~(-1))的吸收速率和吸收动力学参数的变化进行了研究。结果显示:随培养液中NH_4~+和H_2PO_4~-浓度的提高,各处理组幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收速率均逐渐增大,但增幅则因MC-LR处理浓度和处理时间而异。经2和10μg·L~(-1)MC-LR短期(6 d)处理后,幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收速率总体上均显著高于CK(对照,0μg·L~(-1)MC-LR)组;经长期(12 d)处理后,2μg·L~(-1)MC-LR处理组幼苗根系的H_2PO_4~-和较高浓度NH_4~+吸收速率均显著高于CK组,而10μg·L~(-1)MC-LR处理组幼苗根系的NH_4~+吸收速率降低,但其较高浓度H_2PO_4~-吸收速率仍显著高于CK组。梭鱼草幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收速率与底物浓度的函数关系均符合双倒数曲线,拟合关系均在α=0.001水平上显著,但最大吸收速率(V_(max))和表观米氏常数(K_m)变化规律不同。经2和10μg·L~(-1)MC-LR处理6和12 d后,幼苗根系NH_4~+吸收的V_(max)和K_m值均高于CK组;经2μg·L~(-1)MC-LR处理6和12 d后,幼苗根系H_2PO_4~-吸收的V_(max)值高于CK组、K_m值低于CK组;经10μg·L~(-1)MC-LR处理6 d后幼苗根系H_2PO_4~-吸收的V_(max)值高于CK组、K_m值与CK组无差异,但经10μg·L~(-1)MC-LR处理12 d后幼苗根系H_2PO_4~-吸收的V_(max)值略高于CK组、K_m值明显高于CK组。说明随处理时间延长,经2μg·L~(-1)MC-LR处理后幼苗根系的NH_4~+吸收潜力提高、NH_4~+亲和力略有降低,而H_2PO_4~-吸收潜力略有降低、H_2PO_4~-亲和力略有提高;经10μg·L~(-1)MC-LR处理后幼苗根系的NH_4~+吸收潜力略有提高、NH_4~+亲和力降低,而H_2PO_4~-吸收潜力和亲和力均降低。综合分析结果表明:2和10μg·L~(-1)MC-LR处理均能够提升梭鱼草幼苗根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收潜力,其中,2μg·L~(-1)MC-LR处理对其根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收均具有明显的促进作用,而10μg·L~(-1)MC-LR短期处理对其根系的NH_4~+和H_2PO_4~-吸收也具有一定的促进作用。  相似文献   

7.
<正> 本文叙述了定量测定白喉毒素抗体的酶联免疫吸附测定法(ELISA)。用ELISA技术与单间免疫扩散测定法比较,其结果能很好地相关,而且ELISA技术更为敏感一万倍。比在家兔体内皮肤试验法也至少敏感10倍。 绪言 某些方法用于定量测定白喉毒素的抗体,它包括体内和体外测定试验。体内测定如在家兔去毛的背上作皮内中和滴定试验,有利于测定实际中和毒素的抗体。虽然,在体内进行中和抗体滴度的测定是不可缺少的,但这些方法需要精心操作,代价高而又费时,另外,如果不进行大量的动物实验,  相似文献   

8.
草鱼呼肠孤病毒新分离株(GCRV991)的病毒学特性分析   总被引:15,自引:1,他引:14  
从湖南长沙分离到一株致病性强的草鱼呼肠孤病毒(GCRV991),该病毒能使草鱼CIK,肥头鲤FHM细胞产生明显的CPE,对水生动物BF2,EPC及哺乳动物BHK,VERO细胞株不敏感.中和实验显示,GCRV873抗体能有效地中和GCRV991病毒颗粒,形成抗原抗体免疫复合物.纯化的病毒核酸与蛋白经SDS-PAGE分离,分别呈现11条清晰的核酸带及5条主要与2条微量结构多肽图谱,其核酸蛋白分子量大小与GCRV873相近似.该毒株基因组总分子量为14.48×106kD,大小范围是0.55~2.61×106kD;5条主要与两条微量结构多肽分子量近似值分别为136kD、132kD、65kD、43kD、34kD及138kD、82kD.上述结果提示,新分离的GCRV991与GCRV873具有相似的抗原性.  相似文献   

9.
用电子显微镜观察了稀有(鱼句)鲫出血病(Hemorrhage of Gobiocypris rarus)鱼的病理切片及对照鱼的超薄切片。在对照鱼的鳃、肠道、肾脏、脾脏、肌肉和肝脏中没有见到任何病毒颗粒。在病鱼鳃血管内皮细胞质中观察到聚集的直径70nm左右的GCHV颗粒,说明鳃是GCHV侵袭的主要器官之一,并讨论了鳃对GCHV敏感在GCHV传播中的意义。还在病鱼肠道,肾脏中观察到成片的病毒颗粒,它们也是GCHV侵袭的主要组织。在病鱼脾脏的电子密度低的细胞质中观察到散在的病毒颗粒。很少见到病毒聚集体,脾脏中的病毒可能是脾脏的吞噬细胞吞噬而来。作者认为在病鱼组织中观察到的大小不同的病毒颗粒是处于不同成熟阶段的GCHV。  相似文献   

10.
目的:建立结肠癌13cm和24cm非线性分离系统的2-D图谱,分析比较两者的分辨率.方法:提取结肠癌总蛋白,用pH3-10非线性干胶条对样品进行等电聚焦分离,并分别使用13cm和24cm电泳系统进行双向电泳,考马斯亮蓝G250染色,图像分析,比较对比两组2-D图谱,量化分析两种系统的分辨率差异.结果:在等点电3-10,分子量20-170 kD范围内分别分离得到蛋白质斑点873个(13 cm电泳系统)和1349个(24cm电泳系统).对于24cm电泳系统,1 mg蛋白质上样量的电泳图谱清晰,分辨率较好.结论:成功建立了高分辨率、简便易控的结肠癌蛋白质组双向电泳技术平台.  相似文献   

11.
In susceptible insects, Cry toxin specificity correlates with receptor recognition. In previous work, we characterized an scFv antibody (scFv73) that inhibits binding of Cry1A toxins to cadherin-like receptor. The CDR3 region of scFv73 shared homology with an 8-amino acid epitope ((869)HITDTNNK(876)) of the Manduca sexta cadherin-like receptor Bt-R(1) (Gomez, I., Oltean, D. I., Gill, S. S., Bravo, A., and Soberón, M. (2001) J. Biol. Chem. 276, 28906-28912). In this work, we show that the previous sequence of scFv73 CDR3 region was obtained from the noncoding DNA strand. However, most importantly, both scFv73 CDR3 amino acid sequences of the coding and noncoding DNA strands have similar binding capabilities to Cry1Ab toxin as Bt-R(1) (869)HITDTNNK(876) epitope, as demonstrated by the competition of scFv73 with binding to Cry1Ab with synthetic peptides with amino acid sequences corresponding to these regions. Using synthetic peptides corresponding to three exposed loop regions of domain II of Cry1Aa and Cry1Ab toxins, we found that loop 2 synthetic peptide competed with binding of scFv73 to Cry1A toxins in Western blot experiments. Also, loop 2 mutations that affect toxicity of Cry1Ab toxin are affected in scFv73 binding. Toxin overlay assays of Cry1A toxins to M. sexta brush border membrane proteins showed that loop 2 synthetic peptides competed with binding of Cry1A toxins to cadherin-like Bt-R(1) receptor. These experiments identified loop 2 in domain II of as the cognate binding partner of Bt-R(1) (869)HITDTNNK(876). Finally, 10 amino acids from beta-6-loop 2 region of Cry1Ab toxin ((363)SSTLYRRPFNI(373)) showed hydropathic pattern complementarity to a 10-amino acid region of Bt-R(1) ((865)NITIHITDTNN(875)), suggesting that binding of Cry1A toxins to Bt-R(1) is determined by hydropathic complementarity and that the binding epitope of Bt-R(1) may be larger than the one identified by amino acid sequence similarity to scFv73.  相似文献   

12.
草鱼出血病病毒多肽的免疫原性   总被引:10,自引:1,他引:9  
采用中和试验比较了草鱼出血病病毒GCHV873的11个多肽的免疫原性,确定了主要中和抗原。纯化的单个病毒多肽免疫家兔获得抗血清,多太VP1、VP5、VP6和VP9的抗血清具有中和效价,而VP2、VP3、VP4、VP8、VP10和VP11则不能诱生中和抗体。其中VP5的抗血清中和效价最高,因此,VP6极可能是病毒多肽中的主要中和抗原。  相似文献   

13.
ISG15 is one of the most strongly induced genes upon viral infection, interferon (IFN) stimulation, and lipopolysaccharide (LPS) stimulation, and only one copy has been found in mammals so far. Here two fish ISG15 genes, termed CaISG15-1 and CaISG15-2, have been cloned and sequenced from UV-inactivated GCHV (grass carp haemorrhagic virus)-infected and IFN-produced CAB cells (crucian carp Carassius auratus blastulae embryonic cells) by suppression subtractive hybridization. The full-length cDNA sequences of two crucian carp ISG15 encode a 155-amino-acid protein and a 161-amino-acid protein, both of which show 78.9% identity overall and possess the characteristic structures of mammalian ISG15 proteins including two tandem ubiquitin-like domains and the C-terminal canonical LRLRGG motif. In CAB cells treated with different stimuli including active virus, UV-inactivated GCHV and IFN containing supernatant (ICS), the expression of both CaISG15-1 and CaISG15-2 was upregulated but displayed different kinetics. Poly I:C and LPS were also able to induce an increase in mRNA for both genes. In CAB cells responsive to active GCHV, UV-inactivated GCHV, CAB ICS, Poly I:C and LPS, CaISG15-1 was upregulated more significantly than CaISG15-2. These results suggest that there are two ISG15 homologues in crucian carp, both of which might play distinct roles in innate immunity against viral and bacterial infection.  相似文献   

14.
Biohybrid antennas built upon chromophore–polypeptide conjugates show promise for the design of efficient light-capturing modules for specific purposes. Three new designs, each of which employs analogs of the β-polypeptide from Rhodobacter sphaeroides, have been investigated. In the first design, amino acids at seven different positions on the polypeptide were individually substituted with cysteine, to which a synthetic chromophore (bacteriochlorin or Oregon Green) was covalently attached. The polypeptide positions are at –2, –6, –10, –14, –17, –21, and –34 relative to the 0-position of the histidine that coordinates bacteriochlorophyll a (BChl a). All chromophore–polypeptides readily formed LH1-type complexes upon combination with the α-polypeptide and BChl a. Efficient energy transfer occurs from the attached chromophore to the circular array of 875 nm absorbing BChl a molecules (denoted B875). In the second design, use of two attachment sites (positions –10 and –21) on the polypeptide affords (1) double the density of chromophores per polypeptide and (2) a highly efficient energy-transfer relay from the chromophore at –21 to that at –10 and on to B875. In the third design, three spectrally distinct bacteriochlorin–polypeptides were prepared (each attached to cysteine at the –14 position) and combined in an ~1:1:1 mixture to form a heterogeneous mixture of LH1-type complexes with increased solar coverage and nearly quantitative energy transfer from each bacteriochlorin to B875. Collectively, the results illustrate the great latitude of the biohybrid approach for the design of diverse light-harvesting systems.  相似文献   

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汕头牛田洋沿海围垦区锯缘青蟹病害爆发的环境因素   总被引:5,自引:0,他引:5  
锯缘青蟹(Scylla serrata)是汕头市的传统特色和优势养殖品种,也是拥有3万多亩海水养殖池塘的牛田洋围垦区的主养品种。近年来,每年9-11月份,牛田洋的青蟹病害严重,经济损失较大。为探讨青蟹发病与养殖环境的关系,于2007年4月至12月份对牛田洋养殖区的水体理化因子和生物因子进行连续监测研究,结果发现:各因子呈现出明显的季节性变化。在发病前的7-8月份,青蟹处于较高水温(≥28℃)和较低盐度(≤6)环境中。在发病期(9-11月份),各种环境因子恶化,其中铵态氮(NH4+-N)和亚硝态氮(NO2--N)在9月份达到峰值,分别为235.63μg·L-1和27.75μg·L-1;硝态氮(NO3--N)(10.85μg·L-1)、无机磷(PO34—P)(39μg·L-1)及生物因子(水体异养菌157.93×105cfu·L-1、弧菌116.75×103cfu·L-1,干重底泥异养菌157.93×105cfu·g-1、弧菌141.65×103cfu·g-1)在10月份达到峰值。结果说明:水体理化因子的恶化和条件致病微生物的大量增生是青蟹病害爆发的重要原因。  相似文献   

18.
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Jiang XY  Gao GD  Wang XF  Lin YX  Wang YW  Yang YB 《生理学报》2006,58(6):556-566
为了研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)受体在成年大鼠心肌成纤维细胞的信号转导机制,分离及培养成年Sprague-Dawley大鼠心肌成纤维细胞,采用免疫组化染色测定AngⅡ受体的蛋白表达。将细胞随机分为四组进行药物干预48h:AngⅡ组、AngⅡ+losartan组、AngⅡ+PD123319组和AngⅡ+losartan+PD123319组。抽提mRNA制备cDNA探针,与G蛋白耦联受体信号通路发现者基因芯片杂交,筛选表达差异的基因。发现血管紧张素Ⅱ 1型(angiotensinⅡ type1,AT1)受体被losartan阻断后,AngⅡ刺激的心肌成纤维细胞血管紧张素Ⅱ2型(angiotensinⅡ type2,AT2)受体蛋白高表达;34个基因表达差异在2倍以上,30个下调,4个上调,其最大改变不超过20倍;9条信号通路被活化:cAMP/PKA、Ca^2+、PKC、PLC、MAPK、PI-3K、NO-cGMP、Rho、NF-κB通路。当AT2受体被PD123319阻断时,64个基因表达差异在2倍以上,48个下调,16个上调;11条途径基础活化,其中7个基因的改变在30倍以上:Cyp19a1(37倍)、I1lr2(42倍)、Cflar(53倍)、Bcl21(31倍)、Pik3cg(278倍)、Cdknla(90倍)、Agt(162倍)。在AT1受体阻断的基础上再阻断AT2受体,46个基因表达差异在2倍以上,36个下调,10个上调;11条信号途径全部活化。其结果与单独阻断AT2受体信号途径基本一致。RT-PCR选取IL-1β和TNF-α进行验证,结果与芯片各组间的变化趋势基本相符。结果表明,在成年大鼠心肌成纤维细胞,AT2受体阻断明显不同于AT1受体阻断,在信号转导通路相关基因表达谱上,两者有显著差异。  相似文献   

20.
通过比较溶液的离子浓度对病毒形态的结构的影响,发现GCHV在低盐溶液盐低温(-20℃)保存条件下,外壳蛋白会自动降解,但不十分完全,采用含1%NP40(Nonidet-p40)的稀盐溶液处理感染病毒的细胞,经冻融及差异离心,电镜下观察到纯度较高的病毒双层衣壳,核心衣壳及散在的子粒。纯化的病毒亚单位用核酸酶消化后,与等量的福氏佐剂混合,免疫家兔制备抗体,该抗血清经台和试验测定,显示了较强的中和病毒的  相似文献   

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