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1.  康氏木霉纤维素酶系中Cx酶多分子型的分离纯化及某些性质  
   那安 马建华 崔福绵 张树政《菌物学报》,1983年第2卷第1期
   从康氐木霉(Trichoderma kkoningii) 白色变异株 AS 3.4001的粗酶制剂中,获得了纤维素酶系中的一组Cx酶(Cxt Cxz Cz3 Cz4)。分离步骤包括Sephadcx G-75凝胶过滤,DEAE-Sephadex A-50离子交换层析,ConA-Sepharnse亲合层析,SE—Sephadcx C-50离子交换层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳。Cxt 与Cxt 的分子量不同而所带电荷相同,它们的分子量各自为44,500和34,000。Cxz—Cx4 的分子量相同而所带电荷不同。纯化的Cxt—Cz4“经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单带。比较它们对羧甲基纤维素钠(CMC—Na)的糖化力及液化力表明在作用方式的随机性上Cxz>Cz3>Cz1>Cx4    

2.  碳酸钙促进丙酮酸发酵过程中α-酮戊二酸的形成  被引次数:8
   刘立明 李寅 堵国成 陈坚《生物工程学报》,2003年第19卷第6期
   在多重维生素营养缺陷型菌株光滑球拟酵母CCTCC M202019发酵生产丙酮酸的摇瓶和发酵罐实验中发现,CaCO3的添加对发酵液中α-酮戊二酸(α-KG)的积累有重要影响。在维生素浓度不变且供氧充分的前提下,延迟CaCO3添加时间可明显抑制α-KG的产生,并提高丙酮酸与α-KG的碳摩尔比(CPYR/CαKG);而增加培养基中的CaCO3浓度会导致αKG积累的增加。用不同物质调节发酵液中pH的实验证实:在丙酮酸发酵过程中, Ca2+对αKG的积累起主要作用,CO32-起辅助作用,两者对α-KG的积累具有协同效应。维持培养基中CaCO3浓度不变,改变培养基中硫胺素的浓度,对αKG的积累,特别是对CPYR/Cα-KG值没有影响;而增加培养基中生物素的浓度,则导致αKG的浓度不断上升且CPYR/Cα-KG值不断下降。当有Ca2+存在时,胞内丙酮酸羧化酶的活性最高可提高40%,而丙酮酸脱氢酶系的活性没有明显变化。结果表明,丙酮酸发酵过程中α-KG的形成是由于CaCO3促进了丙酮酸羧化反应,其中Ca2+可显著提高丙酮酸羧化酶的活性,而CO32-则有可能作为丙酮酸羧化反应的底物。    

3.  蜗牛酶中一种人参皂苷Rb1水解酶的分离纯化  
   刘欣 崔昱 杨凌 杨胜利《生物工程学报》,2005年第21卷第6期
   通过DEAE-Sepharose离子交换分段层析,DEAE-Sepharose离子交换梯度层析和Sephadex G100凝胶过滤层析三种方法的联用从中华白玉蜗牛消化酶中分离出一种人参皂苷Rb1水解酶。分离后该酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质条带。应用SDS-PAGE和凝胶过滤层析对分子量的测定,提示该酶是由4个分子量为110~115 kD的相同亚基组成的同源四聚体。Rb1为底物的动力学参数KmVmax分别为0.790 mmol/L和10.192 μmol/min/mg。该酶对人参皂苷Rb1糖键进行有选择的水解,可水解人参皂苷Rb1C20位的一个糖苷键生成人参皂苷Rd。    

4.  一氧化氮和氧自由基诱导缺氧再给氧心肌细胞凋亡的bcl-2p53信号通路研究  被引次数:2
   沈剑刚  丘幸生  姜泊  张德良  忻文娟  冯戬云  赵保路《中国科学C辑》,2002年第32卷第5期
   观察了心肌缺氧再给氧损伤的一氧化氮(nitric oxide, NO)和氧自由基机制. 新生Wistar大鼠心肌细胞置于95% N2 /5% CO2环境培养24 h, 然后置于95% O2 /5% CO2环境培养4 h造成缺氧再给氧心肌细胞损伤模型. 单纯缺氧组心肌细胞置于95% N2/5% CO2环境培养24 h, 但不再给氧. NO供体硝普钠(SNP, 5 mmol/L)、NO合酶抑制剂Nw-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME, 100 mmol/L)和其异构体Nw-硝基-D-精氨酸甲酯(D-NAME, 100 mmol/L)以及超氧化物歧化酶/过氧化氢酶(SOD/CAT, 各100 U/mL)分别于缺氧前加入培养基. 正常对照组心肌细胞置于95% 空气/5% CO2环境下培养. 结果显示, 缺氧24 h能增加培养介质中NO, 硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)和乳酸脱氢酶(LDH)水平, 再给氧降低培养介质中NO和 水平, 增加TBARS和LDH水平. 缺氧上调bcl-2p53p21/waf1/cip1蛋白表达水平, 而再给氧下调bcl-2蛋白表达水平, 上调p53p21/waf1/cip1蛋白表达水平. 同时, 缺氧增加心肌细胞凋亡率, 而再给氧增加心肌细胞坏死率. NO供体硝普钠(SNP)增加培养介质中 和TBARS水平, 下调bcl-2蛋白表达而上调p53p21/waf1/cip1蛋白表达水平, 增加DNA断裂、凋亡及坏死细胞率. L-NAME和 SOD/CAT分别降低培养介质中 和TBARS水平, 它们均能上调bcl-2蛋白表达而下调p53p21/waf1/cip1蛋白表达水平, 抑制DNA断裂、凋亡及坏死细胞率, 而D-NAME则无此作用. 以上结果表明, 在缺氧再给氧所致心肌细胞死亡过程中, NO和氧自由基参与下调bcl-2蛋白表达水平和上调p53p21/waf1/cip1蛋白表达水平, 相应地激发细胞凋亡程序, 并提示一氧化氮及氧自由基诱导心肌细胞凋亡的机制与调节 bcl-2p53p21/waf1/cip1信号通路有关.    

5.  里氏木霉纤维素酶产生条件的研究  被引次数:8
   陈春洪   邝哲师   陈薇   赖来展  《微生物学通报》,1998年第25卷第2期
   通过对培养基、水份含量、氮源、培养时间、培养基的起始PH以及培养温度的研究,测定TrichodermareeseiGAB纤维素酶的C1酶和Cx酶的酶活,找到了一个最佳的条件,即:稻草粉:花生壳=4:1,物料:水份=2:3,以NH4Cl、(NH42SO4、NH4H2PO4为氮源,起始pH为自然pH(约5.8),在28℃    

6.  葡萄糖异构酶及其在高果糖浆生产中的应用  
   刘成龙  周海岩  柳志强  郑裕国《氨基酸和生物资源》,2014年第36卷第3期
   葡萄糖异构酶(Glucose isomerase,GI)能催化D-葡萄糖的异构化反应,生成D-果糖,是目前工业上制备高果糖浆(HFCS)的关键酶之一.本文对GI的来源、分类、高级结构特征和催化机制进行了介绍,并从GI催化功能的改善、基因工程菌的构建和固定化三个方面对GI在HFCS生产中应用的关键技术和策略进行分析.    

7.  不同温度条件下白纹伊蚊生命生殖力表  被引次数:3
   钟作良 何桂铭《昆虫学报》,1990年第33卷第1期
    观察了20—30℃五个不同温度的白纹伊蚊Aedes altoptctusSkuse实验种群生命生殖力表,所得有关种群动态参数的值包括净增殖率Ro、增殖能力rc、内禀增长能力rm、周限增长速率λ,瞬时出生率b和瞬时死亡率d均与温度呈正相关,而平均世代周期长T呈负相关.而且各参数对温度的变化是敏感的.在mx值曲线图中,加用了同龄种群产卵数的百分构成比曲线,该曲线反映了种群中各年龄组雌蚊生殖能力的分布.本文应用v=λ(X2-X1),以X2-X1=ex 计算同龄雌蚊不同温度条件下平均预期寿命天数,一个雌蚊所产生的雌性个体,以25℃条件下的V值明显地高于其他四个实验温度.    

8.  不吸水链霉菌葡萄糖异构酶的物化表征  
   李小平  黄友梅  张峰  苏普《生物化学与生物物理进展》,1992年第19卷第4期
   葡萄糖异构酶是一种催化葡萄糖异构为果糖的酶。本文用紫外吸收光谱、红外光谱、氨基酸组分分析、聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、超薄 层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳技术研究了不吸水链霉菌嗜热亚种M1033菌株产生的葡萄糖异构酶的一些物化性质。结果表明由本实验室制备的均一葡萄糖异构酶的A280A260的比值是1.76。它是由一个亚单位组成的酶分子。最小分子量是49000。pI值是5.2。氨基酸组分与其它来源的葡萄糖异构酶的氨基酸组分相比较有一些差异,其中Glu,Gly,ALa和Leu的含量都此其它异构酶的高,而Met,Trp,Asp,Thr则比其它葡萄糖异构酶的低。    

9.  干旱胁迫下油橄榄品种光合特性研究  
   兰 艳  徐应杰  谭 枫  丁春邦  李 天  苏光灿《西北植物学报》,2016年第36卷第11期
   为揭示油橄榄 (Olea europaea L.) 耐旱性与光合特性之间的关系,以筛选出的适宜于半干旱川西南地区种植的7个引进油橄榄品种为供试材料,采用盆栽模拟干旱胁迫的方法,研究持续干旱胁迫对其光合特性的影响。结果表明:(1) 随着干旱胁迫程度加剧,7个油橄榄品种叶片相对含水量均显著降低,至干旱胁迫后期 (25 d),各品种叶片均出现大幅失水,其中品种‘科拉蒂’失水率最高 (45.79%),而品种‘小苹果’失水率最低(25.52%),说明‘小苹果’叶片在干旱胁迫下较其他油橄榄品种具有更高保水能力。(2) 随着干旱胁迫程度加剧,7个油橄榄品种叶片光合色素含量均不同程度降低,表明光合色素分解量大于合成量;干旱胁迫持续25 d时,品种‘豆果’的叶绿素a和叶绿素b 含量下降幅度最大 (P<0.05),品种‘皮削利’类胡萝卜素含量下降幅度最大 (P<0.05),而品种‘小苹果’叶绿素a含量下降幅度最小。(3) 随着干旱胁迫的持续进行,各油橄榄品种叶片净光合速率 (Pn)、蒸腾速率 (Tr)、气孔导度 (Gs) 和胞间CO2浓度 (Ci) 均不同程度降低,而水分利用效率 (WUE) 则呈上升趋势;干旱胁迫期间,品种‘佛奥’的PnTrCi以及‘皮削利’的Gs降幅均高于其他品种,而‘小苹果’的PnGsCi降幅均为最小且WUE上升幅度最大。研究发现,在持续干旱胁迫条件下,油橄榄幼苗叶片均大幅失水,光合色素结构被破坏、色素分解、含量降低,同时气孔关闭蒸发减少,光合作用减弱,而供试油橄榄品种中‘小苹果’对干旱胁迫的适应性最强,适宜于在半干旱的川西地区种植。    

10.  耐热酵母与酿酒酵母原生质体融合的研究  被引次数:7
   方霭祺 李绍兰 陈有为 李萍《生物工程学报》,1990年第6卷第3期
   酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)396是利用甘蔗糖蜜生产酒精的生产菌株,假丝酵母(Candida sp·)C6是我们从云南温泉底泥中筛选到的一株能在45℃生长良好的耐热酵母,我们应用原生质体融合技术进行了两菌株属间融合的研究。通过亚硝基胍(NTG)诱变得到的营养缺陷型菌株396(arg)和C6(lys-),其融合频率为O.91×10-5。从检出的融合子中挑选6株进行考核、其细胞体积平均为亲株的1.3倍,DNA含量平均为亲株的1.6倍,培养特征、形态、大小和生理生化特征表现不一,特别是糖类的同化试验。除F2、F14外,其他4株可以排除异核体形成的可能性。比较了在28℃,40℃和45℃培养条件下出发亲株396、C6、直接亲株396(arg-)C6(lys-)和融合子F1、F7、F12,F13的生长曲线、基质利用率和乙醇产率等,得到一株在40℃培养条件下糖的利用率为94.3%、乙醇产量为59.7g/L的属间融合株F13    

11.  龙眼胚性愈伤组织DRM1基因的克隆及其定位与表达分析  
   白 玉  陈晓慧  谢礼洋  吴晓佩  林玉玲  赖钟雄《西北植物学报》,2017年第37卷第11期
   该研究以龙眼胚性愈伤组织的转录组数据为基础,对龙眼胚性愈伤组织DlDRM1基因进行克隆和生物学信息分析,并检测其在体胚发生过程中不同发育阶段、不同浓度的外源激素(2,4 D、IAA、KT)处理下及不同组织部位的表达,以揭示DlDRM1基因在龙眼体胚发生过程中的功能。结果表明:(1)从龙眼转录组unigene序列筛选获得龙眼结构域重排甲基化酶1基因(命名为DlDRM1)全长序列,并利用RT PCR法从‘红核子’龙眼胚性愈伤组织中克隆获得DlDRM1基因的cDNA全长序列(GenBank登录号为KY990493);DlDRM1基因cDNA全长2 574 bp,包括494 bp的5′UTR,184 bp的3′UTR,可编码包含631个氨基酸的蛋白质。(2)生物信息学分析显示,DlDRM1是一个不稳定的亲水蛋白,不含信号肽,不存在跨膜结构域,其分子式为C3104H4839N851O984S28;序列比对和系统进化分析表明,龙眼DlDRM1与脐橙DRM相似度最高(76.85%),二者亲缘关系也最为接近。(3)实时荧光定量PCR分析发现,DlDRM1在龙眼各组织器官中均有表达,且在果肉中表达量最高,其次是花蕾,在叶中的表达量最低;DlDRM1基因在非胚性愈伤组织中表达量最高,而且在非胚性愈伤向胚性愈伤转变过程中DlDRM1基因的表达量呈逐步下降趋势,说明DlDRM1基因与体胚胚性呈负相关关系,在龙眼体胚发生过程中可能发挥着重要的作用;一定浓度的IAA和2,4 D能够促进DlDRM1基因的表达,而KT则抑制DlDRM1的表达。(4)亚细胞定位结果表明,DlDRM1定位于细胞核和细胞膜上。    

12.  外源亚精胺对根际低氧胁迫下黄瓜幼苗光合作用的影响  被引次数:6
   汪天  王素平  郭世荣  孙艳军《应用生态学报》,2006年第17卷第9期
   采用营养液水培法,研究了低氧胁迫下亚精胺(Spd)对黄瓜幼苗净光合速率(Pn)、细胞间隙CO2浓度(Ci)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)以及量子效率(Φc)和羧化效率(CE)的影响.结果表明,低氧胁迫下,黄瓜植株Pn呈下降趋势,处理10 d后达最低值,为同期对照的63.33%,而低氧胁迫的外源Spd处理10 d时Pn升高了1.25倍;Ci与Pn呈一定负相关性(R2=0.4730~0.7118),Gs与Tr的变化幅度较大,低氧胁迫下有明显下降趋势,Spd处理后其值有所上升,两者呈显著相关(R2=0.7821~0.9458),但与Pn的相关性不显著;低氧下Φc和CE比对照分别下降了63.01%和72.33%,而Spd处理后,Φc和CE值分别提高了23%和14%.表明在低氧胁迫下黄瓜幼苗的光合抑制主要是由非气孔限制所引起的,而外源Spd可通过对光系统的修饰减轻黄瓜幼苗的低氧胁迫伤害.    

13.  动脉狭窄内脂质大分子传输的实验研究: LDL的浓度极化现象  被引次数:1
   张治国  邓小燕  樊瑜波  李德玉《中国科学C辑》,2007年第37卷第3期
   理论研究结果表明: 动脉狭窄远端的扰动流会增强血液与动脉壁接触面上脂质的积聚[1] . 为了验证这一结果, 将一犬颈动脉狭窄模型作为研究对象, 使用牛血清白蛋白作为示踪大分子, 通过直接从动脉内壁面提取液体样品的方法对血管内壁面牛血清白蛋白的浓度进行体外测量. 实验结果表明, 由于渗流的发生, 血管壁面白蛋白的浓度cw要高于其本体浓度co, 这与我们先前的理论结果一致. 测量结果同时表明, 流动受扰动区域内血管壁面的大分子浓度的确发生了显著的提高. 在Re(雷诺数) = 50的情况下, 涡漩区域内的相对浓度cw/co (即血管壁面的大分子浓度与其本体浓度之比)为(1.66 ± 0.10), 而层流区域内的相对浓度为(1.37 ± 0.06). 当Re数升高到100时, 涡漩区域和层流区域内的相对浓度分别降低到了(1.39 ± 0.07)和(1.24 ± 0.04). 研究同时发现渗流速率对白蛋白壁面浓度的影响是非常明显的, 在Re = 50和100, 渗流速率Vw = (8.9 ± 1.7)×10-6 m/s的情况下, 涡漩区域内的白蛋白壁面浓度cw要比本体浓度co分别高77%和52%, 然而当渗流速率降低为Vw = (4.8 ± 0.6)×10-6 m/s的情况下, 涡漩区域内的白蛋白壁面浓度cw仅比本体浓度co分别高66%和39%. 综上所述, 本研究进一步从实验上论证了浓度极化现象的确会在人体动脉系统中发生, 流动分离点区域内的高脂质浓度层是引起动脉粥样硬化发生和发展的因素之一.    

14.  Mg~(2+)、Co~(2+)、Mn~(2+)和Ca~(2+)对葡萄糖异构酶活性的影响  被引次数:6
   陶丽梅  过莹立  李宁  王淳  滕脉坤  王玉珍《中国生物化学与分子生物学报》,1999年第15卷第6期
   D-木糖异构酶(EC5.3.1.5)能催化醛糖D-木糖至酮糖D-木酮糖的转化,又能催化D-葡萄糖至D-果糖的异构化反应.故被称为葡萄糖异构酶(GI).一般认为,葡萄糖异构酶存在二种作用机制:烯醇化和氢转移机制.对我国自行筛选的链霉菌No.7M1033菌株葡萄糖异构酶的晶体结构研究表明[1],异构化可能是采用氢转移机制.这一机制认为催化需要半径≤0.08nm的二价金属离子如Mg2+、Co2+和Mn2+等激活,而离子半径>0.08nm的二价金属离子则对酶的活性有抑制作用.Mg2+、Co2+和Mn2+…    

15.  OvDREB2B基因陆地棉鉴定及其对水分渗透胁迫的分析  
   沈海涛  冯玉杰  王爱英  李予霞  胡鸢雷  祝建波《西北植物学报》,2013年第33卷第12期
   通过花粉管通道技术,以该实验室自育陆地棉品系TH1和TH2为材料,将诸葛菜(Orychophragmus vidaceus)抗逆转录因子OvDREB2B基因构建到植物表达载体后,导入棉花基因组,经卡那霉素筛选和分子鉴定表明目的基因已整合到棉花基因组中并表达。将T1代转基因植株和受体对照在温室中栽培,待植株生长至四叶一心时,用不同渗透势的PEG-6000水溶液进行渗透胁迫处理,分析探讨转基因植株的抗旱效果及其抗旱机理。结果显示:当渗透势为0和0.5 MPa处理时,转基因植株和对照无明显差异;当渗透势为0.8 MPa和1.1 MPa处理时转基因植株较对照抗旱性明显提高。当渗透势为1.1 MPa处理96 h时,对照植株Fv/Fm降至0.2左右,而转基因植株仍正常生长,Fv/Fm值约为0.51,而且初始荧光(F0)值、净光合速率(Pn)、胞间CO2浓度(Ci)、蒸腾速率(Tr)等一系列参数转基因植株都明显优于对照,表明DREB2B基因能够提高棉花对水分胁迫的耐受性。    

16.  2型糖尿病患者尿核糖浓度显著高于正常  被引次数:2
   苏 涛  辛亮  赫英舸  魏艳  宋宜祥  黎巍威  王学美  赫荣乔《生物化学与生物物理进展》,2013年第40卷第9期
   自从Chevreul ME发现糖尿病患者尿液中的糖是葡萄糖,近200年的时间,糖尿病被视为一组以葡萄糖慢性增高为特征的代谢性疾病,而体内广泛存在的核糖与糖尿病之间的关系却被忽略.研究发现核糖可以降低血葡萄糖浓度,曾报道糖尿病患者可以口服核糖.本实验室前期工作表明,核糖能够迅速与蛋白质发生非酶促糖基化,形成具有强烈细胞毒性的糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs),引起细胞(包括神经细胞)死亡.进一步的实验证明,虽然在给小鼠注射核糖时,血葡萄糖浓度有所降低,但是糖基化血清蛋白和AGEs均显著升高,说明核糖浓度的升高更容易使机体发生非酶促糖基化反应,产生AGEs,从而造成危害.本文采用1-(4-羧基苯基)-3-甲基-5-吡唑酮(MOPBA)结合高效液相色谱,对明确诊断的2型糖尿病患者(n = 30)和同龄健康人(n = 30)尿核糖进行了定量分析,结果显示,MOPBA-核糖衍生物与尿核糖浓度之间呈线性相关(r2=0.999),回收率达99%.经质谱分析显示,HPLC分离的糖尿病患者尿样品中含569.19 u MOPBA衍生物峰(核糖,C27H29N4O10)和599.20 u MOPBA衍生物峰(葡萄糖,C28H31N4O11).2型糖尿病组尿核糖浓度(男性:(134.28?35.09) μmol/L;女性:(97.33?23.68) μmol/L)显著高于正常对照组(男性:(35.99?5.64) μmol/L;女性:(33.72?6.27) μmol/L) (P < 0.001),同时,其尿葡萄糖浓度也显著高于正常对照(P < 0.001).糖尿病患者尿核糖显著高于正常人的现象提示,2型糖尿病不但葡萄糖代谢异常,同时核糖代谢也发生了异常.    

17.  铜绿假单胞菌Las系统信号分子对小鼠巨噬细胞影响的体外研究  
   杨旺  陈松  杨振德  肖昕  廖芳《生物化学与生物物理进展》,2013年第40卷第11期
   对于包括铜绿假单胞菌在内的众多微生物而言,群体感应系统是细菌表达毒力因子的重要调节子.Las和Rhl是群体感应两个主要组成部分.Las和Rhl分别受自诱导剂N-3-氧化十二烷酰基-L-高丝氨酸内酯(3-oxo-C12-HSL)和N-丁酰-L-高丝氨酸内酯(C4-HSL)的影响.最近的研究进展显示群体感应分子尤其是3-oxo-C12-HSL具有调节宿主免疫系统的能力.本实验展示了3-oxo-C12-HSL可以诱导鼠源巨噬细胞(RAW264.7)的凋亡和吞噬作用.把合成的3-oxo-C12-HSL加入RAW264.7细胞培养基中,发现细胞生活力以一种依赖于3-oxo-C12-HSL的浓度(6.25 to 100 μmol/L)和培养时间(2 to 24 h)的方式逐渐丢失.同样,我们观察到3-oxo-C12-HSL的细胞毒活性,用3-oxo-C12-HSL处理的细胞出现细胞形态上的改变,这一改变表明3-oxo-C12-HSL处理的细胞加速凋亡,这一点同时也被其他多个标准(caspases3、8和9,线粒体膜电位,磷脂酰丝氨酸的表达)所证实.中性红吞饮实验证明,3-oxo-C12-HSL会显著地减小RAW264.7细胞的吞噬能力(P < 0.05).同时,高浓度的3-oxo-C12-HSL会降低RAW264.7细胞对铜绿假单胞菌的吞噬作用(P < 0.001).这些数据表明3-oxo-C12-HSL能特异性地促进细胞凋亡的诱导和RAW264.7细胞吞噬能力的减小.这可能和3-oxo-C12-HSL诱导的细胞毒性有关.最终我们的实验数据证明,群体感应信号分子3-oxo-C12-HSL在铜绿假单胞菌感染的致病机理中扮演着重要的角色.    

18.  黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其在酵母中的高效表达  被引次数:7
   周亚凤 张先恩 刘虹 张成刚 Anthony E G Cass《生物工程学报》,2001年第17卷第4期
   将黑曲霉葡萄糖氧化酶(GOD)基因重组进大肠杆菌酵母穿梭质粒Ppic9,转化甲基营养酵母Pichia pastoris GS115,构建出GOD的高产酵母工程菌株。在酵母αFactor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,黑曲霉GOD在甲基酵母中大量表达并分泌至胞外,经甲醇诱导3~4d,发酵液中的GOD活力可达30~40u/mL。SDS-PAGE证实GOD在培养物上清中的含量显著高于其它杂蛋白,约占胞外蛋白总量的60%~70%,经Q SepharoseTMFast Flow离子交换柱一步纯化即达电泳纯。重组酵母GOD比活达426.63u/mg蛋白,是商品黑曲霉GOD的1.6倍。动力学性质分析表明,重组酵母GOD的KmKcat分别为38.25mmol/L和3492.66s-1,与商品黑曲霉GOD相比,具有更高的催化效率。重组酵母GOD的高活力特性可有效提高葡萄糖传感器的线性检测范围。    

19.  多态性蛋白Mad2与其配体Cdc20121-138的相互作用研究  
   张会亭  赵园园  葛保胜  黄方《生物化学与生物物理进展》,2017年第44卷第3期
   多态性蛋白Mad2是有丝分裂纺锤体检测点(SAC)的关键蛋白,也是多态性蛋白质家族中研究最广泛的成员之一.Mad2有两种不同的天然构象:O-Mad2和C-Mad2.Mad2构象间的转变及其与配体Cdc20间的相互作用对SAC发挥其生物学功能至关重要.本文利用荧光各向异性技术对O-Mad2和C-Mad2与配体TAMRA-Cdc20121-138间相互作用的热力学及动力学过程进行了系统表征.结果表明:在无盐和低盐溶液(100 mmol/L NaCl)中,Mad2两种构象与Cdc20121-138的平衡解离常数(KD)均在10-6 mol/L,但C-Mad2与Cdc20121-138结合的KD值约为O-Mad2的1/5;在高盐(300 mmol/L NaCl)溶液中,Mad2两种构象与TAMRA-Cdc20121-138结合的KD值无明显差别.动力学实验结果显示,在同一种缓冲液中Mad2两种构象与Cdc20121-138相互作用的解离速率常数kd没有显著差别,而C-Mad2与Cdc20121-138的结合速率常数ka却比O-Mad2高一个数量级,这表明C-Mad2与Cdc20121-138不仅结合力更强,且结合速率要快很多.Mad2与Cdc20121-138突变体间的相互作用以及离子强度对二者相互作用的影响结果提示,Mad2和Cdc20间的相互作用不是通过静电相互作用,而可能是通过疏水相互作用来实现的.本研究为揭示多态性蛋白Mad2的构象转变机理及其在有丝分裂过程中的作用机制提供了重要的实验基础.    

20.  C3和C4植物光合途径的适应性变化和进化  被引次数:1
   龚春梅  宁蓬勃  王根轩  梁宗锁《植物生态学报》,2009年第33卷第1期
    高等植物大多为C3植物, C4植物和景天酸代谢(Crassulacean acid metabolism, CAM)植物是由C3植物进化而来的。C4途径的多源进化表明, 光合途径由C3途径向C4途径的转变相对简单。该文分析研究了植物光合途径的进化前景, 指出C4植物是从C3植物进化而来的高光效种类, 且地质时期以来降低的大气CO2浓度和升高的大气温度以及干旱和盐渍化是C4途径进化的外部动力。C3植物的C4途径的发现说明植物的光合途径并非是一成不变的, C3和C4植物的光合特征具有极大的可塑性, 某些环境的变化会引起植物光合途径在C3和C4途径之间转变。C3植物具有的C4途径是环境调控的产物, 是对逆境的适应性进化结果, 因而光合途径的转变也适用于干旱地区植被的适应性生存机理研究。该文还利用国外最新的C4光合进化模型介绍了植物在进化C4途径中所经历的7个重要时期(从分子基础到形态基础、结构基础, 再到物质代谢水平、光合酶活水平, 直到C3和C4途径协调运转时期, 最后达到形态与功能最优化阶段), 并结合全球气候变化的特点对国内外相关领域的研究进行了分析, 总结了植物光合途径的适应性转变和进化的研究成果, 为今后的相关工作提出建议。    

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