烟碱降解细菌的分离、鉴定及其降解性能的初步研究

从福建三明地区的土壤中分离得到一株能够高效降解烟碱的菌株 ,编号为DN2。该菌经常规的形态、生理生化分析以及 16SrDNA序列同源性分析 ,鉴定为Ochrobactrumintermedium ,属于α_变形杆细菌纲。该菌在 30℃～4 0℃和pH 6 . 0～ 9. 0范围内具有较高的降解活性 ,其最适值分别为 30℃和 6 5 ,烟碱的耐受浓度在无机盐培养基中可达到 4 0 0 0mg L。该菌能够以烟碱为唯一碳源生长 ,对于 5 0 0mg L烟碱的降解速率为 15mg L·h ,36h烟碱降解率为97. 6 5 %。该菌在烟草工业和环境保护上可能具有应用前景。     

甲基对硫磷彻底降解菌X4的分离、降解性及系统发育研究

从生产甲基对硫磷的山东华阳农药厂污水曝气池中,分离到一株能以甲基对硫磷及其降解中间产物对硝基苯酚为唯一碳源生长,且能够将其彻底降解为CO2和H2O的细菌X4,经鉴定,为节杆菌属(Arthrobactersp.)。用气相色谱法和分光光度法对X4的降解性能分析表明,X4在7h内对50mg/L甲基对硫磷、50mg/L对硝基苯酚的降解率为99%以上,对其它有机磷农药也有良好的降解效果,测定条件为:pH值7,温度30℃,接种量30%。并构建了系统发育树以了解其它菌株与X4之间的亲缘关系。     

苯酚降解菌ZJ-1的分离及降解特性研究

目的:筛选苯酚降解菌,用于降解苯酚提高氧化塘处理效率.方法:以苯酚为惟一碳源进行选择性培养.结果:从乌鲁木齐市某炼油厂污水池的活性污泥中分离出一株能以苯酚为惟一碳源培养基上生长的菌株,编号为ZJ-1,该菌株最高可耐受1000mg/L的苯酚.对该苯酚降解菌降解性能研究表明:该菌具有较强的降解能力,在32℃、pH 7左右、接种量1%时,摇床振荡速度120r/min的条件下,该菌株在48h内苯酚降解率可达81%以上.培养液中苯酚浓度在300mg/L、500mg/L时,该菌株的降解率比较明显.当苯酚浓度大于1000mg/L时,则元明显降解效果.结论:ZJ-1菌株对苯酚具有较强的降解能力,具有广阔的应用前景.     

甲基对硫磷降解菌L1的分离、鉴定及降解酶基因的克隆

从农药厂的污水处理池中分离到一株能高效降解甲基对硫磷的菌株L1,L1能以甲基对硫磷为惟一碳源、氮源和能源生长;经生理生化实验和16s rRNA同源性分析,初步将L1归为节杆菌属（Arthrobacter sp.）。紫外分光光度法对L1的降解性能研究表明,L1能在12h内将50mg/L的甲基对硫磷完全降解;用PCR方法克隆其甲基对硫磷降解酶基因mpd,这是迄今首次从革兰氏阳性菌中克隆到的mpd基因。     

苯酚高效降解菌的筛选和降解特性研究

从东华理工学院北区原化学系排污口土壤中筛选到一株高效的苯酚降解细菌PS1。该菌为球菌,革兰氏染色阴性,能以苯酚为唯一碳源和能源生长。经16S rRNA基因部分序列分析PS1为Raoultella属菌株(Raoultella sp.strain PS1),其最高苯酚耐受和降解浓度在3500mg/L以上,当苯酚浓度为500mg/L和1000mg/L时,22h和32h可完全降解,在1500mg/L~3000mg/L时,32h~50h可完全降解,2500mg/L时降解速率最快,达78.1mg/h。通过正交试验得出该菌最适生长条件为25℃、pH6.5、葡萄糖500mg/L;最佳苯酚降解条件为20℃、pH7.0、葡萄糖500mg/L。     

甲胺磷降解菌的筛选及降解特性研究

从长期受有机磷农药污染的土壤中分离到1株能降解甲胺磷的菌株B15,经生理生化鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。在甲胺磷无机盐培养基(甲胺磷浓度为0.5%)生长时,最适生长温度为28℃,最适pH为7.0,摇床培养(28℃190 r/min)48 h降解率达到83%。菌株在甲胺磷浓度为1%的无机盐培养基上能生长,但是在甲胺磷浓度为0.5%的无机盐培养基上生长最好,降解率最高。外加碳氮源对菌株的降解率有所提高,但是超过某一浓度降解率随着浓度的增加反而下降。     

一株萘降解菌的筛选及其降解途径

从胜利油田被污染土壤中筛选出一株能够以萘为唯一碳源的菌株W1,经形态和生理生化以及16S rD-NA测序分析,初步鉴定为沙雷氏菌属。其最适生长条件为35℃,pH 7.5。该菌对盐及萘有较好的耐受性。当培养基盐质量浓度为30 g/L,底物萘质量浓度为100 mg/L时,培养3 d后,其萘降解率仍可达到80.9%。当萘浓度为800 mg/L时,仍具有一定的降解作用,降解率为15.8%。通过对菌株降解原油前后组分的GC-MS分析,以及检测其降解多种底物后的吸光度,得出该菌能利用苯酚、甲苯、苯甲酸、1-萘酚、丙酮、辛烷生长,对原油中组分C20～C23、C33～C36的直链烃有较好的降解效果。经UV-Vis扫描其降解中间产物,初步判断其萘降解生物途径为邻苯二酚途径,萘首先被其降解生成水杨酸,而后转化为邻苯二酚,开环并生成一系列小分子物质,最后进入三羧酸循环。     

氯氰菊酯降解菌草酸青霉SSCL-5分离鉴定及降解特性

为解决土壤中残留的菊酯类农药问题,通过富集筛选法从70余份土壤中获得一株高效分解利用菊酯类农药的微生物菌株SSCL-5,该菌株可在含1 000 mg/L的氯氰菊酯无机盐培养基中正常生长。经形态学及ITS测序鉴定,确定该菌为草酸青霉(Penicillium oxalicum),对多种高浓度菊酯类农药耐受。经紫外分光光度法及HPLC验证该菌株草酸青霉SSCL-5在无机盐培养基、28℃、180 r/min摇瓶培养24 h的条件下,对400 mg/L氯氰菊酯的降解率为97%。土壤室内试验证明该菌在土壤中,温度20-34℃、水分含量保藏40%-60%条件下,30 d可将土壤中400 mg/L的氯氰菊酯降解67.6%。     

一株苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性

本研究采用逐量分批驯化的方法,从造纸废水中分离得到一株能够以苯酚为唯一碳源生长的苯酚降解菌株F5-1.经形态观察、生理生化特性鉴定及16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为克雷伯菌(Klebsie-lla sp.).该菌株能够在7 h时完全降解初始浓度为100 mg/L的苯酚,降解苯酚主要发生在生长对数期;在pH 5.0～9.0,NaCl浓度0～80 g/L,温度20～40℃范围内,菌株F5-1均可有效降解初始浓度为100～1 200 mg/L的苯酚;能够耐受的最大苯酚浓度为1 500 mg/L.本研究结果表明,F5-1菌株对处理环境条件复杂的含酚废水具有潜在的应用前景.     

低温萘降解菌的筛选、鉴定及降解条件优化

研究采用富集培养法从黑龙江省大庆油田地区污染土壤中筛选能以萘为唯一碳源和能源的低温菌株,采用气相色谱-质谱法(GC-MS)研究降解菌在萘-无机盐培养基中对萘的降解情况,通过单因素试验与正交试验测定降解菌的培养条件并进行优化,同时分析降解阶段其主控因素。结果表明:筛选出2株在低温条件下高效降解萘的菌株,编号为GN1和GN2。在低温条件下GN1和GN2可以快速降解萘,在对照组非生物因素影响基础上,萘(300 mg/L)的降解率在4 d内达到94.43%和95.47%,在耐受能力和降解速度方面具明显优势;经形态观察、生理生化特性和16S rDNA基因序列鉴定两株降解菌皆属于假单胞菌属(Pseudomonas);均在萘-无机盐培养基(萘浓度300 mg/L),培养温度15℃,初始pH 6.0,培养转数180 r/min,培养时间7 d的条件下生长最佳。2株降解菌的生长与5种环境因素均有显著关系。     

人内皮抑素在毕赤酵母中的表达、纯化与生物功能研究

内皮抑素（Endostatin）是近年来新发现的一种内源性新生血管生成（Angiogenesis）抑制因子,通过抑制新血管生成而抑制肿瘤的形成和转移且不会引起耐药性,具有极高的临床应用前景。巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris)具有表达率高、产物可分泌、可对高等真核生物蛋白正确进行翻译后加工、遗传稳定、发酵工艺成熟等优点被用来进行重组人Endostatin的表达。本研究用PCR的方法从人胎肝cDNA文库中扩增出人Endostatin的cDNA,测序正确后转入毕赤巴斯德甲醇酵母,并获得了高效可溶型表达,用肝素亲和层析的方法进行纯化,纯化后产物经SDSPAGE薄层扫描分析纯度达987％以上,质谱测定分子量为2043kD与理论值一致,蛋白质N端序列测定结果为SPPAHTHRDFQPVLH与天然序列一致。生物活性检测证明可抑制鸡胚尿囊绒毛膜（CAM）的新生血管生成（Angiogenesis),并可抑制血管内皮细胞的增殖。因此用酵母表达系统可以得到具有生物活性的内皮抑素,经纯化后可用于进一步的生物功能和作用机理试验。     

大蒜分生组织培养脱病毒和快速繁殖技术

采用茎尖分生组织培养技术,获得了大蒜（Ａｌｌｉｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．）的无病毒试管苗。通过基本培养基和激素配比试验,筛选出最佳的培养基组成,进行脱病毒苗的快速繁殖。结果表明：诱导愈伤组织的最适培养基为：ＭＳ＋ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ,月生长率达１２．７０倍;诱导丛生芽的最适培养基为：Ｂ５＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ,丛生芽繁殖系数高达２５．５倍,技术上达到了快速繁     

Leu122对Hsp16.3组装过程中亚基相互作用的影响

小分子热休克蛋白是种类最多的热休克蛋白家族 ,它们均以寡聚体的形式存在 .研究表明 ,来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3是以 3个三聚体的形式存在的九聚体 .为了探讨Hsp16 3体外组装过程中的亚基相互作用和识别 ,利用野生型Hsp16 3及其L12 2A突变体蛋白为模型 ,采用高效液相分子筛层析、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和脲梯度凝胶电泳等方法进行研究 .结果表明 ,Hsp16 3在体外能自发地再组装成九聚体 .12 2位的亮氨酸残基对Hsp16 3体外再组装过程中的亚基相互作用有重要的影响 ,并且在Hsp16 3的组装过程中 ,亚基之间的相互识别是高度灵敏和特异的 ,野生型蛋白的亚基和L12 2A突变体蛋白的亚基并不能形成杂合体 ,只有完全相同的亚基才能组装成九聚体     

金黄色破囊壶菌发酵生产DHA的研究

顺 4,7,1 0 ,1 3 ,1 6 ,1 9 二十二碳六烯酸 (ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃａｃｉｄ ,简称ＤＨＡ)是ω 3系列多不饱和脂肪酸。近年的研究表明 ,ＤＨＡ是组成大脑和视网膜的重要结构物质 ,如大脑灰质结构脂质中 6 0 %的脂肪酸均为ＤＨＡ[1] 。ＤＨＡ对人体健康有益的生理功能主要表现在[2 ] :调节中枢神经系统功能 ;预防和治疗心血管疾病 ;治疗气喘、关节炎等 ;预防和治疗乳腺癌、结肠癌等。由于ＤＨＡ具有上述生理功能 ,已在医药、食品、保健品等领域得到广泛应用。目前 ,商品ＤＨＡ主要来源于深海鱼油 ,如沙丁鱼、金枪鱼等鱼油 ,由于鱼…     

人肝细胞生长因子(hdHGF)基因在毕赤酵母中的分泌表达

研究了hdHGF基因在毕赤酵母中的表达 .以人胎盘mRNA为模板 ,经逆转录、重叠PCR获得hdHGF全长和成熟基因片段 .将该基因片段克隆到pPIC9载体上 ,将重组表达质粒转化巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115,筛选mut+ 表型 ,经甲醇诱导可实现rhdHGF的分泌表达 .经摇瓶培养筛选出 4株表达水平较高的酵母工程菌株 ,SDS PAGE分析和Western印迹试验表明 ,产物分子量约为80kD ,5L发酵罐高密度培养已使生物量达 13 5g L(干重 ) ,发酵液上清总蛋白量为 8 0g L ,电泳结果表明rhdHGF表达水平为总蛋白的 12 3 % .     

应用毛细管气相色谱法检测棉铃虫细胞色素P450 O-脱甲基活性

依据毛细管气相色谱法灵敏度高 ,样品用量少 ,分辨率高的特点 ,建立了一个用于检测棉铃虫Helicoverpaarmigera幼虫中肠和脂肪体细胞色素P45 0O -脱甲基活性产物的小型反应体系 ( 875 μL) ,其中含 0 1mol L ,pH 7 8Tris HCl缓冲液 ,0 5 μmol,NADPH ,7 5 μmolMgCl2 ,0 0 85 %BSA ,0 1 5 7mmol对硝基苯甲醚及酶液。利用毛细管气相色谱直接检测该反应体系中棉铃虫细胞色素P45 0的O -脱甲基产物对硝基苯酚。     

两种赤眼蜂对小菜蛾卵的寄生潜能分析

应用生命表技术分析了拟澳洲赤眼蜂Trichogramma confusum Viggiani(T.c)和卷蛾分索赤眼蜂Trichogramm-atoidea bactrae Nagaraja(T.b)在两种繁蜂条件组配下（分别用米蛾Corcyra cephalomica(Stainton)(RM)卵和小菜蛾Plutella xylostella(L.)(DBM)卵繁育）对小菜蛾卵的寄生潜能分析,结果表明：（1）在相同寄主繁蜂条件下,卷蛾分索赤眼蜂在小菜蛾卵上显示出较强的寄生潜能,米蛾卵上所繁的卷蛾分索赤眼蜂（T.b-RM)和小菜蛾卵上所繁的卷蛾分索赤眼蜂（T.b-DBM)的内禀增长率为0.3509和0.3450,而米蛾卵上所繁的澳洲赤眼蜂（T.c-RM)和小菜蛾卵上所繁的拟澳洲赤眼蜂（T.c-DBM)的仅为0.2391和0.1902,T.b-RM和T.b-DBM的每雌平均寄生卵数为70.75和46.13粒,而T.c-RM和T.c-DBM的仅为64.90和31.73粒,但拟澳洲赤眼蜂的雌蜂寿命较卷蛾分索赤眼蜂更长。（2）在不同寄主繁蜂条件下,同种赤眼蜂对小菜蛾卵的寄生潜能以米蛾卵所繁的仔蜂的各项寄生特性参数（内禀增长率,每雌寄生卵量,净生殖力,平均世代历期和雌蜂寿命）均优于用小菜蛾卵所繁之蜂,米蛾卵是其适宜的中间寄主。（3）长期用中间寄主繁蜂,赤眼蜂对目标寄主表现出一定的不适应性,中间寄主的驯化对赤眼蜂的寄生潜能有不容忽视的削弱作用。     

固定化产氨短杆菌MA-2、黄色短杆菌MA-3反应动力学的研究

多年来虽然有不少学者对固定化细胞生产Ｌ 苹果酸的方法进行过探讨[1～ 6] ,但对过程动力学的研究报道并不多见[2 ,7] ,在富马酸铵转化体系中的表观动力学及本征动力学模型还未见报道 ,本文对富马酸铵转化体系中固定化产氨短杆菌ＭＡ 2、黄色短杆菌ＭＡ 3细胞的动力学进行了探讨 ,测定了两种固定化细胞的表观动力学常数 ,并进一步求解了相应的本征动力学常数 ,这一结果便于从理论上指导富马酸铵转化过程的工业化生产。1　材料和方法1 1　试剂富马酸 ,工业级 ,苏州合成化工厂 ,碳酸钙 ,工业级 ,泗联化工厂。1 2　菌株本文所用的菌株是由我院…     

大凉疣螈碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质

碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,AKP)在生物界的分布很广 ,动物、植物、微生物中均广泛存在 .提纯的 AKP常被应用于对核酸等的研究 ,是基因工程常用的工具酶 ,也是酶标免疫测定技术的常用工具酶之一 .人类血清中的 AKP在不同疾病状态下有显著变化 ,临床上将血清 AKP变化指标作为诊断某些疾病的依据 .对于细菌和高等动物的 AKP已有广泛的研究 ,但国内外对两栖爬行类动物 AKP的研究报导却很少 ,仅有蛇毒中 AKP的研究报导 [1,2 ] .本文对大凉疣螈皮肤的 AKP进行了分离纯化 ,并对其部分性质进行了初步研究 .1　材料和方法1 .1　材…