补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞增殖与分化影响的实验研究

为探讨补骨脂素加锌对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化作用的影响及其量效关系,用改良的组织块培养法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,在成骨细胞体系中以不同浓度加入补骨脂素与锌,MTT法检测加药后不同时间成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶的活性;用放射免疫法(RIA)测定细胞外骨钙素(BGP)的含量,用改良的Lowry法测蛋白含量。补骨脂素加锌较单独应用补骨脂素或硫酸锌在48 h和72 h时促体外大鼠成骨细胞增殖的作用更加明显;在24、48 h和72 h时能提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,其中在48 h时的效果更为显著;在24 h和72 h时能提高细胞外液中的骨钙素含量;补骨脂素浓度为1×10-9mol/L和锌浓度为1×10-5mol/L两者联合用药较为合适。与单独应用补骨脂素或者锌相比,补骨脂素与锌联合应用能够协同增效,对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖与分化作用更加显著。     

甲氧补骨脂素对大鼠成骨细胞生物活性影响的实验研究

为探讨甲氧补骨脂素对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化作用的影响,用改良的组织块培养法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,在成骨细胞体系中以不同浓度加入甲氧补骨脂素,MTT法检测加药后不同时间细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量;用放射免疫法测定细胞内骨钙素含量。结果显示:与对照组相比,甲氧补骨脂素组在24 h和36 h时促进体外大鼠成骨细胞增殖的作用更明显;在24、48 h和72 h时均能提高成骨细胞碱性磷酸酶活性(ALP)和骨钙素(BGP)的分泌。甲氧补骨脂素对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖与分化均有明显的促进作用。     

补骨脂素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

为探讨补骨脂素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响,用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,补骨脂素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。补骨脂素浓度在1μmol/L 24 h,5~20μmol/L浓度范围内48 h,1、10、20μmol/L浓度范围内72 h促进成骨细胞增殖,在10~15μmol/L范围内48 h及72 h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。补骨脂素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞相关细胞因子表达影响的实验研究

为探讨异补骨脂素加锌对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞相关基因表达的影响,用改良的组织块培养法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,在成骨细胞体系中加入异补骨脂素与锌,以雌激素为阳性对照,空白组为阴性对照。结果显示:异补骨脂素加锌较单纯应用异补骨脂素或硫酸锌在48 h时促体外大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原的表达;异补骨脂素加锌组可以明显上调大鼠成骨细胞TGF-β1的细胞信号转导因子Smad4 mRNA的表达(P0.01);能促进Runx2/Cbfa1 mRNA的表达(P0.05)。与空白对照组相比,异补骨脂素组,异补骨脂素加锌组均能增强Osterix mRNA的表达(P0.05)。与单纯应用异补骨脂素或者锌相比,异补骨脂素与锌联合应用能够协同增效,对促进体外培养的成骨细胞相关转录因子的表达更加明显,探讨了异补骨脂素及其与锌配伍调节骨代谢的分子机制,为提高骨质疏松症的临床疗效以及抗骨质疏松新药的开发提供了实验依据。     

五味子乙素对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨五味子乙素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,五味子乙素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果:五味子乙素在0.75×10-4 mol/L 24 h,48 h及72 h,及0.75×10-5mol/L 24 h促进成骨细胞的增殖,在0.75×10-6mol/L24 h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论:五味子乙素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

山萘酚对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

为探讨山萘酚体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响及中药菟丝子补肾壮骨作用的物质基础,用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,山萘酚以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时问后,用MTF法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。山萘酚在浓度1×10^-5mol／L24h,1×10^-5～1×10^-7mol／L浓度范围内48h促进成骨细胞增殖,在浓度1×10^-9moL／L48h及72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。山萘酚体外能促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,山萘酚可能是菟丝子补肾壮骨作用的活性成份之一。     

五味子甲素对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的　探讨五味子甲素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法　用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,五味子甲素以不同浓度加入细胞培养体系 ,作用不同时间后 ,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况 ;用对硝基苯二钠基质动力学法 (PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶的活性 ,用改良的Lowry法测蛋白含量。 结果　五味子甲素在 0 75× 10 -5mol/L及 0 75× 10 -9mol/L浓度范围内 2 4h ,72h ,0 75× 10 -4 ～ 0 75× 10 -7mol/L 48h促进成骨细胞增殖 ,在 0 75× 10 -5～ 0 75× 10 -6mol/L浓度范围内 48h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论　五味子甲素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

大豆甙元对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的探讨大豆甙元体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,大豆甙元以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用放射免疫法(RIA)测定细胞外骨钙素(BGP)的含量,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果大豆甙元1×10(-5)～1×10(-9)mol／L浓度范围内48h,72h促进成骨细胞增殖,在1×10(-7)～1×10(-9)mol／L范围内48h和72h提高成骨细胞外骨钙素含量。结论大豆甙元体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

佛手柑内酯对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

为研究佛手柑内酯对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。原代培养新生大鼠颅骨细胞,利用MTT法、微量酶标法、酶联免疫吸附法(ELISA)、q PCR等方法分别测定不同浓度佛手柑内酯对大鼠成骨细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP),骨钙素(BGP),Ⅰ型胶原mRNA(CollagenⅠmRNA)表达的影响。结果显示,与对照组相比,佛手柑内酯作用于细胞24、48、72 h均对成骨细胞的增殖有促进作用(P0.05);作用48、72 h均能促进ALP、BGP、CollagenⅠmRNA表达(P0.05)。表明佛手柑内酯可促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,为防治骨质疏松症的新药研究提供理论依据。     

染料木黄酮对成骨细胞增殖分化的影响

目的：研究染料木黄酮对体外培养乳鼠颅盖骨成骨细胞增殖分化的影响。方法：取乳鼠颅盖骨,采用胶原-胰蛋白酶消化法,进行颅骨成骨细胞培养,取第二代成骨细胞,添加10^-5～10^-7mol／L染料木黄酮,在CO2孵箱中培养48h和72h后MTT比色法测定细胞增殖,培养72h采用^3H-TdR和^H-Pro掺入实验测定DNA和胶原合成。用试剂盒检测细胞裂解液碱性磷酸酶(ALP)活性。结果：染料木黄酮明显增加成骨细胞MTT的吸光度值、^3H-TdR和^3H-Pro的掺入,增加成骨细胞碱性磷酸酶活性。结论：染料木黄酮促进体外培养的乳鼠颅盖骨成骨细胞DNA和胶原的合成,促进增殖和分化。     

Determination of stoichiometry of radioiodination of proteins

A sensitive method for the detection of small quantities of hydrophobic antioxidant free radical scavengers such as butylatedhydroxytoluene (BHT) and butylatedhydroxyanisole (BHA) in aqueous samples is described. The procedure involves extraction of the hydrophobic free radical scavenger into an organic solvent phase, followed by the subsequent reaction of an aliquot of this extract with the stable cation radical tris(p-bromophenyl)amminium hexachloroantimonate (TBACA). In experiments with BHT and BHA, the loss of TBACA absorbance at 730 nm was found to be linearly proportional to the amount of antioxidant added, with quantities of BHT as small as 200 pmol being easily detectable. In aqueous suspensions of dimyristoylphosphatidylcholine vesicles, assays of the aqueous BHT concentration showed that BHT partitioned strongly into the membrane phase, achieving very high BHT/phospholipid ratios. For a given concentration of BHT, partitioning into the membrane phase was greater in large, multilamellar liposomes than in either small, single-walled vesicles or in purified rat brain synaptic vesicle membranes. Direct assay of BHT and BHA in phospholipid membranes, however, was complicated by a nonspecific interaction between TBACA and the phospholipid.