不同浓度的NO^—3和NH^＋4对小麦根谷氨酰胺合成酶及其相关酶的影响

利用酶活性测定和 Northern分子杂交等技术 ,研究了小麦幼苗根在不同浓度的 Na NO3 和(NH4) 2 SO4的供应下 ,其谷氨酰胺合成酶 (GS)、天冬酰胺合成酶 (AS)、谷氨酸脱氢酶 (GDH)、硝酸还原酶 (NR)以及 GS- m RNA的变化。结果表明 :NH 4 处理的小麦 ,其根部 GS活性比 NO-3 处理的高 ;高浓度处理的比低浓度处理的高 ;Northern杂交结果说明 GS- m RNA转录量与 GS活性一致 ;3mmol/ L NO-3促进了 AS的活性。AS酶活性变化与 GS酶活性变化无明显依赖关系。在实验的条件下 ,没能测出 GDH的活性 ,不同浓度的 NO-3 和 NH 4 处理对 NR活性没有明显的规律。     

氮源对钝齿棒杆菌谷氨酰胺合成酶的调节作用及溶菌酶对破壁作用…

钝齿棒杆菌６２８２谷氨酰胺合成酶的合成显著受氮源性质的影响,以５０ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酸钠为唯一氮源时,谷氨酰胺合成酶活力最高;ＮＨ４＾＋对谷氨酰合成酶的合成有阻遏作用,谷氨酸钠则具有解阻遏作用,蛋清溶菌酶对于菌株６２８２的细胞超声波破碎具有良好的辅助作用,适宜的细胞破碎条件为０．８ｍｇ／ｍｌ溶菌酶,３７℃保温４￣５ｈ,超声波１２０Ｗ处理１２ｍｉｎ。     

小麦开花后不同器官中硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶的活性比较

小麦开花后各器官的硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶均具有一定的活性,旗叶中硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶活性最高。开花后旗叶和根系硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶活性逐渐降低,颗壳和籽粒中硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶活性先升高,达到最大值后又降低。     

氮源对谷氨酰胺转胺酶合成的影响

研究不同氮源及培养条件对轮枝链霉菌 (Streptoverticillium)SK - 1合成谷氨酰胺转胺酶 (TGase)的影响 ,结果当以 5 0g/L玉米浆为主要氮源时发酵酶活水平可达 3 0 1μmol/ (min·ml) ;对摇瓶发酵条件进行优化后 ,以 5 0g/L玉米浆为主要氮源 ,起始pH值为 7 0～ 7 5 ,培养温度为 30℃ ,接种量范围为 5 % - 10 % ,培养时间为 38h时 ,酶活最高可达 4 5 2 μmol/ (min·ml) ,酶活提高了5 0 17%。玉米浆作为氮源时发酵酶活比较高 ,发酵时间也较短 ,酶的生产成本较低     

不同光质和钙对小麦幼苗硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶活性的影响

蓝光,红光,远红外都可诱导小麦幼苗硝酸还原酶的活性。黄化苗经红光照射后立即照射远红光,可逆转红光对硝酸还原酶活性的诱导效应,钙可促进这一效应。绿苗在缺钙时滑有光逆转效应,有钙时则表现部分逆转效应。     

小麦谷氨酰胺合成酶的原核表达特点

谷氨酰胺合成酶(GS)是植物氮同化的关键酶,为了研究小麦GS同工酶的结构及其表达特点,我们构建了小麦GS1、GSr、GSe、GS2和GS2前体GS2p的原核表达载体,并对表达条件进行了优化。结果表明,尽管小麦GS同工酶氨基酸序列同源性达70%–80%,蛋白质表达却各具特点。30℃诱导3 h后,GSr、GSe及GS2表达量达最大,诱导7 h后GS1表达量达最大,GS2p不表达,表达量依次为GS1(22%)GSr(15%)GS2(12%)GSe(5%);且GSe可溶性表达,GS1主要为可溶性表达,而GSr和GS2为包涵体。30℃诱导3 h,GS同工酶相对转录量为GSr(7.59)GS2(1.84)GS2p(1.66)GSe(1.46)GS1(1.00),酶蛋白质翻译水平与转录水平不一致。mRNA结构分析显示,GS同工酶翻译起始区稳定二级结构的自由能不同:GS1(14.4)GSr(17.2)GS2(22.6)GSe(25.4)GS2p(31.6),自由能越小,翻译起始区结构越不稳定,蛋白表达水平越高。GS1、GSr、GSe和GS2可溶性表达的最佳诱导条件不同,分别是30℃诱导5 h、16℃诱导15 h、37℃诱导5 h及25℃诱导7 h;可溶性表达量为GS1(20%)GSr(13%)GS2(10%)GSe(7%),酶活性为GS1GSeGS2,GSr无活性。可见,GS同工酶的基因序列决定了蛋白质在原核细胞中的表达量、状态及其活性。     

叶绿体发育和光对小麦叶谷氨酰胺合成酶基因表达的影响

利用电镜、ＤＥＡＥ－纤维素柱层析技术和小麦叶谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）酶活性测定,研究了小麦叶片不同发育梯度的叶绿体超微结构和ＧＳ同功酶活性之间的关系。结果表明,从叶基至叶尖,随着叶绿体的成熟,净光合率增加,ＧＳ活性增加。各发育阶段离体叶绿体的３Ｈ－Ｕｒａ,３Ｈ－Ｌｅｕ 掺入试验和ＧＳ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ表明,基部是基因表达活性最高的部位。ＧＳｍ ＲＮＡ 在叶绿体发育阶段最多,而ＧＳ酶活性则在成熟叶绿体的部位最高。对黄化苗进行光照,ＧＳｍ ＲＮＡ 和ＧＳ活性明显增加,７２小时达到正常绿苗同等水平。由此说明核编码的叶绿体ＧＳ基因为光调控基因,明显促进了叶绿体ＧＳ基因的转录,而后叶绿体ＧＳ合成量增加     

氮源对钝齿棒杆菌谷氨酰胺合成酶的调节作用及溶菌酶对破壁作用的研究

钝齿棒杆菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｒｅｎａｔｕｍ）６２８２谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）的合成显著受氮源性质的影响,以５０ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酸钠为唯一氮源时,谷氨酰胺合成酶活力最高;ＮＨ对谷氨酰胺合成酶的合成有阻遏作用,谷氨酸钠则具有解阻遏作用。蛋清溶菌酶对于菌株６２８２的细胞超声波破碎具有良好的辅助作用;适宜的细胞破碎条件为０．８ｍｇ／ｍｌ溶菌酶,３７℃保温４～５ｈ,超声波１２０Ｗ处理１２ｍｉｎ。     

林肯链霉菌谷氨酰胺合成酶的酶学性质

在分离纯化的基础上,报道了pH、温度和金属离子对林肯链霉菌(Streptomyceslincolnensis)Z-512谷氨酸胺合成酶(GS)活力的影响及GS底物专一性的研究结果.在动力学性质的研究中,发现林肯链霉菌GS在生物合成反应系统中,对底物NH_4CI的饱和曲线不遵守米氏方程.Hill作图呈两相曲线.在NH_4CI浓度低的情况下,Hill系数大于1,具有正协同效应;当NH_4CI浓度增加到一定程度时,Hill系数小于1,具有负协同效应.这说明NH_4CI不仅作为林肯链霉菌GS的底物,而且作为一种效应物调节GS的活性.林肯链霉菌GS对底物Glu及ATP的饱和曲线遵守米氏方程.在不同的激活离子存在下,GS对Glu、ATP的Km值也不同.     

三种节杆菌产生谷氨酰胺合成酶的研究

谷氨酰胺合成酶是应用广泛的生物酶类,以LNU 0165,LNU 0066和LNU 0254为实验出发菌株,对不同pH、温度条件下产谷氨酰胺合成酶的最佳发酵条件进行了研究,通过测定谷氨酰胺合成酶,并进行比较选择高产菌株,LNU 0165产酶活最高,经16S rRNA的序列和生理生化的鉴定,确定LNU 0165为球形节杆菌(Arthrobacter globiformis),其GS酶的最适温度为60℃,最适pH为7.5左右。     

林肯链霉菌谷氨酰胺合成酶活力调节的研究

对不同氮源生长条件下林肯链霉菌无细胞粗提液中谷氨酰胺合成酶 (GS)的研究结果表明 ,高浓度NH+4阻遏了GS的生物合成。从不同氮源生长条件下林肯链霉菌中分离纯化了GS ,其性质没有差别。以受腺苷化调节的产气克雷伯氏菌GS作对照 ,林肯链霉菌GS没有明显的氨休克作用 ,经蛇毒磷酸二酯酶处理后 ,其活力没有变化。这些结果都说明林肯链霉菌GS不存在腺苷化共价修饰这一调节方式。反馈抑制作用是林肯链霉菌GS的一种重要的调节方式 ,这种抑制作用是以累积的方式进行的 ,这表明各种抑制剂对GS作用位点不同 ,各种抑制剂对GS的抑制作用是相互独立的。由此推测 ,林肯链霉菌GS是一种变构酶。     

北京棒状杆菌AS1.299谷氨酰胺合成酶活力调节的研究

北京棒状杆菌(Corynebacterium pekinense AS1.299)谷氨酰胺合成酶的转移酶活性依赖于Mn~(++),酶的生物合成酶活性依赖于Mg~(++),其他二价金属离子只能部分代替Mn~(++)和Mg~(++)的作用。Mn~(++)对ATP或ADP的克分子比对酶活力起调节作用。ATP、CTP,丙氨酸和甘氨酸对谷氨酰胺合成酶有较强的抑制作用;丝氨酸、谷氨酸和6-磷酸葡萄糖胺对酶活力的抑制作用分别是24,15和21％。效应物混合物对酶的作用被证明是累积性的抑制作用。     

谷氨酰胺合成酶活性与水稻杂种优势预测

从杂种优势预测生理指标需具备的３个基本条件入手,对杂交水稻及其亲本生长发育过程中的谷氨酰胺合成酶（ＧＳ,ＥＣ６、３、１、２）活性进行研究,结果表明：水稻ＧＳ活性在整个生育期中的变化呈现一定的规律性,并且杂种酶活性是由其双亲遗传性所决定的;同时,ＧＳ活性与多个生理性状及产量性状具有一定的相关性;在孕穗期和抽穗期与产量性状的关系尤为密切,因此,在生殖生长期ＧＳ活性在一定程度上可以反映产量性状的优势水平,可望作为水稻杂种优势预测的一个辅助指标。     

谷氨酰胺合成酶活性与水稻杂种优势预测

从杂种优势预测生理指标需具备的３个基本条件入手,对杂交水稻及其亲本生长发育过程中的谷氨酰胺合成酶活性进行研究,结果表明：水稻ＧＳ活性在整个生育期中的变化呈现一定的规律性,并且杂种酶活性是由其双亲遗传性所决定的;同时,ＧＳ活性与多个生理性状及产量性状具有一定的相关性;在孕穗期和抽穗期与产量性状的关系尤为密切,因此,在生死生长期ＧＳ活性在一定程度上可以反映产量性状的优势水平,可望作为水稻杂种优势预测的