大肠埃希菌耐药性水平传播实验研究

目的研究重症监护病房（ICU）患者标本中分离的大肠埃希菌的耐药情况以及耐药性水平传播的实验研究。方法采取双纸片法（K-B）检测细菌的耐药性;产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌为供体菌,耐利福平大肠埃希菌（对其他抗生素敏感）作为受体菌进行接合实验;采用聚合酶链反应（PCR）技术扩增整合子和耐药基因。结果30株大肠埃希菌中产ESBLs菌株检出率为46．7％;接合培养后,接合菌携带23kb和25kb大质粒,而无供体菌中一系列小质粒;供体菌和接合菌均携带I型整合子。结论大肠埃希菌耐药性严重,且呈多重耐药性;产ESBLs菌株可通过质粒和整合子将耐药基因转移给敏感菌,导致耐药性传播。     

非致病性大肠埃希菌能增多大肠埃希菌O157:H7志贺毒素的产生

大肠埃希菌(简称大肠杆菌)O157：H7毒力因子为志贺毒素2(stx2),其基因由温和噬菌体编码,由晚期基因启动子调控表达。stx2的合成与释放需要诱导噬菌体溶菌周期,而且正常肠道大肠杆菌感染了毒素编码的噬菌体就能制造毒素和噬菌体,使毒素水平远远超过病原性菌株本身的产量,作者在体外以及鼠肠道验证了这一假设。     

酸性氧化电位水防治大肠埃希菌腹膜炎的实验观察

目的：观察酸性氧化电位水(electrolyzed strong acid water,EOW)对大肠埃希菌所致小白鼠腹膜炎的治疗作用及毒性反应。方法：实验分酸性氧化电位水毒性测定组、治疗观察组和对照组,治疗组小鼠用大肠埃希菌O136K：78株经腹腔接种后,制造腹膜炎模型,然后采用不同的pH值,氧化还原电位(ORP)为950～1150mv的酸性氧化电位水对小鼠腹膜炎治疗及毒性作用进行观察。结果：4组不同pH值酸性氧化电位水治疗小鼠腹膜炎均有一定的作用,以pH2．8组疗效最为理想,小白鼠存活率为100％;腹腔中感染的大肠埃希菌消失或存在极少量,病理切片可见腹膜炎症反应明显降低,增厚的腹膜变薄,血管充血减轻。结论：酸性氧化电位水作为一种替代的抗菌消毒剂,在杀灭大肠埃希菌和治疗小鼠腹膜炎具有一定的作用,并且在尿毒症患者腹膜透析过程中,替代抗生素防治感染具有进一步研究和应用推广的价值。     

大肠埃希菌基因组研究

大肠埃希菌是最早启动全基因组测序的细菌之一,但是对于大肠埃希菌作为共生菌存在于人类和动物肠内的生物学本质尚不清楚。目前,研究人员正在对大肠埃希菌基因组中每个必需基因的功能进行研究,以期能进一步了解大肠埃希菌的生物学特性。本文就大肠埃希菌基因组研究现状、研究方法及其后基因组研究等方面进行综述。     

秦皮素对大肠埃希菌作用机制的初步研究

目的以大肠埃希菌ATCC 25922为供试菌,探讨秦皮素的抑菌活性及其作用机制。方法利用TTC法测定秦皮素对大肠埃希菌ATCC 25922的最低抑菌浓度;通过测定加药前后菌体培养液电导率和大分子的变化及观察扫描电镜和透射电镜电镜结果,分析秦皮素对其细胞膜的影响;通过SDS-PAGE测定秦皮素对供试菌株蛋白含量的影响;采用逐个检出法研究秦皮素对大肠埃希菌ATCC 25922质粒合成的抑制作用。结果秦皮素可抑制大肠埃希菌ATCC 25922的生长,其最低抑菌浓度为40μg/mL。秦皮素作用菌体5 h后,培养液中的电导率比对照组增加1.96%,但DNA和RNA大分子增加的不明显。秦皮素作用大肠埃希菌20 h后,菌体可溶性蛋白总量比对照组降低42%。秦皮素对大肠埃希菌的质粒有消除作用,药物作用48 h后,秦皮素对大肠埃希菌的质粒消除率为60.3%。结论秦皮素可抑制大肠埃希菌的生长,其抑菌作用机制与抑制菌体内蛋白质合成和消除菌体内的质粒有关,但对大肠埃希菌细胞膜的影响不大。     

大肠埃希菌的分型研究

目的分析上海某医院各科室分离大肠埃希菌的药敏状况和致病性,了解大肠埃希菌在该院流行情况。方法采用K-B琼脂法进行药敏试验,多重PCR技术进行基因分型。结果药敏结果显示该菌对多种常用抗生素具有耐药性,仅对阿米卡星等药物敏感。85株菌分为4个基因型,其中B2型25株,致病性最强;D型37株,致病性次之。菌株间亲缘关系表明可能存在院内流行。结论实验获得菌株具有较强耐药性和致病性,应当采取相应的措施预防院内感染的流行。     

肠出血性大肠埃希菌产生的Vero毒素

本文简要述及Ｖｅｒｏ毒素的分子结构,生物学活性,作用机理,毒素分子中氨基酸置换对毒素活性的影响和Ｖｅｒｏ毒素及其基因的检测。     

噬菌体φEc-SL25对大肠埃希菌临床分离株裂解作用的研究

目的 分离鉴定大肠埃希菌噬菌体并分析其裂解特性,为噬菌体疗法应用于大肠埃希菌感染提供实验依据。方法 采用双层琼脂噬斑法从污水中分离噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体的形态学特征,利用限制性酶切图谱初步分析噬菌体的基因组,测定噬菌体对宿主菌的最佳感染复数和一步生长曲线,分析噬菌体对宿主菌的裂解谱,观察噬菌体在不同的pH及温度下对宿主菌的裂解特性,SDS-PAGE分析噬菌体的主要和次要蛋白。结果 通过噬斑法从污水中分离出1株能裂解大肠埃希菌的噬菌体,命名为φEc-SL25;电镜显示,噬菌体φEc-SL25的形态特征符合有尾病毒目、管尾病毒科噬菌体;φEc-SL25的最佳感染复数为0.01;一步生长曲线表明,噬菌体φEc-SL25的潜伏期为5 min,爆发期为10 min;φEc-SL25对26株大肠埃希菌的裂解率可达30.8%;在温度70 ℃ 20 min时以及在pH 4～10的范围内,噬菌体φEc-SL25仍保持其裂解活性;蛋白电泳可观察到2条主要蛋白带和至少3条次要蛋白。结论 噬菌体φEc-SL25是一种潜伏期短、裂解较性强的毒性噬菌体,可用于开发针对大肠埃希菌感染的生物制剂。     

泌尿系统感染高龄患者大肠埃希菌耐药性分析

目的:探究高龄患者泌尿系统感染大肠埃希菌对常用药物的耐药性,指导临床医生合理用药。方法:按照标准操作规程采集我院泌尿系统感染高龄患者的尿液,作常规尿标本培养和分离,应用微生物分析仪进行细菌鉴定,采用纸片扩散法进行药物敏感试验,采用纸片扩散法和双纸片确证法完成产超广谱β-内酰胺酶菌株的检测。结果:129株大肠埃希菌中,检测出产超广谱β-内酰胺酶菌株有62株,占48.1%;在17种常用抗生素敏感试验中,亚胺培南敏感性最高(100%),无耐药株出现,对第一、二、三和四代头孢类抗生素均出现了不同程度的耐药性,对氨苄西林、四环素和哌拉西林高度耐药(均超过了95%)。结论:泌尿系统感染高龄患者大肠埃希菌对临床常用抗生素耐药性逐年升高,且产超广谱β-内酰胺酶菌株也逐渐增多,这就要求临床医生严格合理应用抗生素,尽量避免耐药菌株的出现。     

2株可感染大肠埃希菌工程菌的噬菌体的鉴定与分析

大肠埃希菌来源的基因工程菌是应用最为频繁的工程菌,但在基因工程菌规模化制备生物活性制剂的过程中常常会被噬菌体感染。通过对鸡粪中噬菌体大量筛选及鉴定,对工程菌防御相应噬菌体感染机制开展基础研究。实验以大肠埃希菌工程菌为宿主菌（CICC编号：10424）,采用双层琼脂平板法从鸡场粪样中分离噬菌体,结果获得2株噬菌体,对其进行形态学鉴定。经透射电镜观察发现一株(CX)为短尾噬菌体,其头部外廓呈长六角形,非收缩性尾部,其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环,裂解性较强;另一株(B1X)为长尾科噬菌体,其噬菌斑呈双层环状,中心澄清透明,直径约0.8~1.3 mm,外环呈半透明,云雾状区域,宽约0.8~1.3 mm。可进一步研究这2株噬菌体的侵染机制。     

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) strains may carry virulence properties of diarrhoeagenic E. coli

To analyze whether Escherichia coli strains that cause urinary tract infections (UPEC) share virulence characteristics with the diarrheagenic E. coli (DEC) pathotypes and to recognize their genetic diversity, 225 UPEC strains were examined for the presence of various properties of DEC and UPEC (type of interaction with HeLa cells, serogroups and presence of 30 virulence genes). No correlation between adherence patterns and serogroups was observed. Forty-five serogroups were found, but 64% of the strains belonged to one of the 12 serogroups (O1, O2, O4, O6, O7, O14, O15, O18, O21, O25, O75, and O175) and carried UPEC virulence genes (pap, hly, aer, sfa, cnf). The DEC genes found were: aap, aatA, aggC, agg3C, aggR, astA, eae, ehly, iha, irp2, lpfA(O113), pet, pic, pilS, and shf. Sixteen strains presented aggregative adherence and/or the aatA sequence, which are characteristics of enteroaggregative E. coli (EAEC), one of the DEC pathotypes. In summary, certain UPEC strains may carry DEC virulence properties, mostly associated to the EAEC pathotype. This finding raises the possibility that at least some faecal EAEC strains might represent potential uropathogens. Alternatively, certain UPEC strains may have acquired EAEC properties, becoming a potential cause of diarrhoea.     

大肠杆菌半乳糖结合凝集素的提取纯化

采用琼脂糖凝胶CL-6B（Sepharose CL-6B）亲和层析以及Sephadex G-75凝胶分子筛等对大肠杆菌（Esche-richia coli,E.coli）半乳糖凝集素进行了纯化。结果显示,目标蛋白经简单的步骤即可以得到纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及凝血实验证明纯化蛋白为E.coli半乳糖凝集素,蛋白提取回收率为11.4%。研究首次从E.coli蛋白提取液中分离得到纯的半乳糖凝集素,且此方法简单快捷,优越性明显。应用此方法将有利于微生物半乳糖凝集素的深入研究。     

Fusion expression of mutated cecropin CMIV in E. coli

A cDNA coding mutated cecropin CMIV from Bombyx mori was synthesized according to its amino acid sequense using E .coli biased codons .The gene was cloned into the fusion expression vector pEZZ318 and was expressed in E .coli HB101.The fusion protein produced was purified by affinity chromatography to yield 26 mg/L fusion product .The anti-bacterial activities of recombinant cecropin CMIV were recovered after cleavage by chemical method.     

3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建和表达

目的 实现3α-羟类固醇脱氢酶基因在大肠埃希菌中的高可溶性表达.方法 从土壤中分离睾丸酮丛毛单胞菌,提取其基因组DNA,PCR扩增3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)基因,将它克隆到原核表达载体上进行诱导表达.提取细菌总蛋白进行SDS-PAGE分析并测定酶活性.结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了重组质粒,IPTG诱导表达后,获得融合蛋白,SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子量约为29kDa,与预期理论值一致;酶活性测定结果表明菌体可溶性总蛋白HSD酶比活性为142.81 U/mg,是对照BL21的12.97倍.结论 该研究成功地构建了3α-羟类固醇脱氢酶基因高效原核表达系统,为利用基因工程手段大量制备3α-HSD的工作奠定了基础.     

天花粉蛋白突变基因TCSA-S在大肠杆菌BL21中的表达

天花粉蛋白是具有N-糖苷酶活性的一种植物Ⅰ型核糖体失活蛋白,本研究用PCR方法获得了天花粉蛋白的突变基因TCSA-S,构建了表达载体pET-30a( )-TCSA-S,转化大肠杆菌BL21(DE3),并在30℃条件下诱导表达。经SDS-PAGE电泳检测,重组的突变体基因TCSA-S表达产物主要存在于包含体中。     

The detection of non-O157 E. coli in food by immunomagnetic separation

AIMS: To compare immunomagnetic separation (IMS) protocols (enrichment media and temperature) for the isolation of Escherichia coli serotypes O26 and O111 from four different foods. METHODS AND RESULTS: Foods (minced beef, cheese, apple juice and pepperoni) spiked with low numbers (<100 g(-1)) of stressed nalidixic mutant E. coli serotypes O26 and O111 were enriched in media based on buffered peptone water (BPW), tryptone soya and EC broths incubated at temperatures of 37 and 42 degrees C to optimize the IMS technique. BPW enrichments gave increased recoveries of both serotypes compared with tryptone soya and EC broths. Elevated temperatures of incubation at 42 degrees C were superior to 37 degrees C. CONCLUSIONS: Positive detection of low numbers of stressed target pathogens in all replicate tests was only possible using BPW enrichments. The majority of tests from alternative enrichments resulted in zero or single colonies recovered post-IMS. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The optimum IMS protocol would improve isolation rates of E. coli O26 and O111 from foods and lead to increased safety for the consumer. Sub-optimal IMS protocols could lead to foods being incorrectly labelled free from these pathogens.     

大肠杆菌蛋白酶系统的研究进展

基因工程菌大肠杆菌细胞中含有多种蛋白酶,具有重要的生理功能,同时也是影响外源蛋白表达水平的重要因素,大肠杆菌蛋白酶系统的研究是工程菌改良的基础。为减少蛋白酶对外源蛋白的降解,从不同的角度做了大量工作,其中利用反义RNA技术控制蛋白酶活性是一条值得探索的思路。     

大肠埃希菌Mn-SOD基因的克隆、表达及多克隆抗体制备

目的实现Mn-SOD基因在大肠埃希菌中的高可溶性表达,制备Mn-SOD的多克隆抗体。方法用PCR方法从一株野生型大肠埃希菌（E.coli）基因组中扩增Mn-SOD基因编码区．将它克隆到原核表达载体上进行大量表达和纯化,再用纯化的蛋白对新西兰大白兔进行背部多点注射,40d后取其血清,用Western-blot印迹实验测定抗体效果。结果SDS-PAGE分析表明SOD的表达量约为细菌总蛋白的50％;黄嘌呤氧化酶法测定表达蛋白活性,结果表明每毫克菌体可溶性总蛋白中表达产物酶比活为3921．77U／mg,是对照BL21的276．77倍;并制备了高效价的多克隆抗体。结论该研究成功地构建了大肠埃希菌Mn-SOD基因高效原核表达系统,所表达的Mn-SOD具有良好的免疫原性和免疫反应性。     

大肠埃希菌TA系统mazEF的研究进展

大部分细菌的遗传物质中含有毒素-抗毒素系统(TA)的遗传基因.mazEF是大肠埃希菌染色体上的一对毒素抗毒素基因,由毒素基因mazF和抗毒素基因mazE组成.其在细菌的生长调控和细胞程序性死亡中发挥了重要的作用.环境压力激活mazEF后,MazF可以通过对mRNA的剪切作用造成翻译停止.mazEF的存在可以增加细菌对环境压力的耐受性、保持细菌遗传物质的稳定、参与抗生素引起的细胞死亡、也在细菌的耐药性中发挥重要作用.     

Assessment of resistance to colicinogenic Escherichia coli by E. coli O157:H7 strains

AIMS: To assess a collection of 96 Escherichia coli O157:H7 strains for their resistance potential against a set of colicinogenic E. coli developed as a probiotic for use in cattle. METHODS AND RESULTS: Escherichia coli O157:H7 strains were screened for colicin production, types of colicins produced, presence of colicin resistance and potential for resistance development. Thirteen of 14 previously characterized colicinogenic E. coli strains were able to inhibit 74 serotype O157:H7 strains. Thirteen E. coli O157:H7 strains were found to be colicinogenic and 11 had colicin D genes. PCR products for colicins B, E-type, Ia/Ib and M were also detected. During in vitro experiments, the ability to develop colicin resistance against single-colicin producing E. coli strains was observed, but rarely against multiple-colicinogenic strains. The ability of serotype O157:H7 strains to acquire colicin plasmids or resistance was not observed during a cattle experiment. CONCLUSIONS: Escherichia coli O157:H7 has the potential to develop single-colicin resistance, but simultaneous resistance against multiple colicins appears to be unlikely. Colicin D is the predominant colicin produced by colicinogenic E. coli O157:H7 strains. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The potential for resistance development against colicin-based strategies for E. coli O157:H7 control may be very limited if more than one colicin type is used.