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相似文献
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1.
通过重组技术获得大肠埃希菌噬菌体内溶素纯化蛋白和表面展示噬菌体,并观察产物的生物效应。将肠侵袭性大肠埃希菌EIEC 8401噬菌体LSB-1内溶素基因gp17构建到质粒pET300中,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达,通过Ni柱纯化系统纯化产物;利用噬菌体展示技术构建T7-LSB-gp17重组噬菌体,通过双层琼脂法纯化噬菌体,并观察2种产物的抗菌效应。2 139 bp的gp17基因通过重组技术表达出78.3 ku的可溶性蛋白,纯化后浓度为2.38 mg/mL,其对EIEC8401有良好的抑菌活性,但对其他试验菌无抗性;通过噬菌体展示技术构建的重组噬菌体T7-LSB-gp17通过SDS-PAGE电泳显示在78 ku处有表达增强,对EIEC8401无感染、裂解作用,但对EIEC8401及其他试验菌有明显溶菌作用,宿主谱增加。通过重组技术获得的噬菌体LSB-1内溶素基因gp17的产物对LSB-1噬菌体原宿主具有明显的抑制效应。其中gp17表达的纯化蛋白具有明显的宿主专一性,重组噬菌体悬液有较宽种类的抗菌作用。这可能是因为gp17蛋白与噬菌体表面复杂空间结构的相互作用产生的生物效应。  相似文献   

2.
细菌生物膜(bacterial biofilm, BF)是细菌产生耐药性的重要原因之一,给抗生素治疗细菌感染带来极大困难。生物膜主要由细菌菌体和胞外聚合物质(extracellular polymeric substance, EPS)构成,其中EPS成分复杂,主要包括多糖(polysaccharides)、蛋白质、核酸和脂类等。噬菌体是一类特异性侵染细菌且以细菌为宿主的病毒,可编码多种酶类,在感染过程中打破细菌的防御屏障。其中,解聚酶(depolymerase)可以降解EPS中的多糖成分;溶素(lysin)可以降解肽聚糖,破坏生物膜的完整结构,降低细菌的耐药性。结合噬菌体本身的特异性裂解作用,可以协同改善耐药菌感染的抗生素治疗效果。现就噬菌体编码的解聚酶与溶素对细菌生物膜的影响作一阐述。  相似文献   

3.
噬菌体一般通过表达内溶素来降解宿主菌细胞壁上的肽聚糖 . 用 PCR 技术从结核杆菌 D29 噬菌体基因组中克隆了 gene10 ,并使其在大肠杆菌中得到了高效表达,蛋白质 C 端带有 6×His. 用镍柱亲和纯化了大肠杆菌表达的 gp10 蛋白可溶性部分 . 活性测定表明, gp10 不但具有几丁质酶活性,还具有溶菌酶活性,是一种双功能的酶 . 耻垢杆菌经 gp10 作用后,其生长受到抑制,扫描电镜观察发现部分耻垢杆菌被降解 . 说明与其他种类噬菌体降解细胞壁的方式不同, D29 噬菌体可能利用 gp10 的溶菌酶活性使结核杆菌细胞壁降解 . 这有助于揭示结核杆菌噬菌体与其宿主的相互作用机制,是关于噬菌体几丁质酶的首次报道 .  相似文献   

4.
镰刀菌不仅能侵染小麦、大麦、玉米等粮食作物,造成作物产量严重降低,谷物中存留的镰刀菌毒素还能引发人、畜中毒,严重威胁人、畜健康。本研究以镰刀菌细胞壁蛋白特异单链抗体CWP2为靶标,淘选噬菌体随机12肽库,筛选获得两种与抗体CWP2特异结合的短肽,多肽1(YLNPPCDLYACA)和多肽2(YQSVFFTDPHEF)。竞争性酶联免疫吸附实验证实,多肽1更好的模拟了镰刀菌细胞壁蛋白的抗原表位。这是首次对镰刀菌细胞壁蛋白模拟肽的报道,为探寻CWP2所结合抗原表位的编码基因,进一步阐明CWP2介导的抗镰刀菌分子机理提供了信息和材料。同时,获得的模拟肽可直接用于家畜疫苗以及作为粮食安全检测标准品。  相似文献   

5.
随着细菌耐药性问题的日益严重,人们开始寻求新型抗菌制剂。噬菌体裂解酶是一种由ds DNA噬菌体编码的水解酶,能高效特异性地裂解细菌细胞壁且不易使细菌产生耐药性。由于天然裂解酶具有宿主谱窄,不能裂解革兰阴性菌等缺点,研究者对裂解酶进行了大量的设计改造。本研究主要对提高噬菌体裂解酶抗菌活性的研究进展进行综述。  相似文献   

6.
本研究分析了铜绿假单胞菌噬菌体K5基因在宿主中的表达及其影响因素.通过测定融合报告基因dnaP-lacZ、capP-lacZ、bapP-lacZ和rdr-lacZ编码的β-半乳糖苷酶活力,分析了噬菌体K5相关基因的表达水平,发现噬菌体K5的不同基因在宿主细胞内表达水平存在较大差异,其中噬菌体K5的DNA聚合酶基因dnaP的表达水平最高,而主要衣壳蛋白基因capP的表达水平最低.加入噬菌体后,除二磷酸核糖核苷酸还原酶基因rnr外,其它基因的表达水平均有明显提高,说明噬菌体自身因子能够调控噬菌体部分基因在宿主细胞中的表达.进一步分析显示,噬菌体基因在对数生长前期细胞中的表达水平显著高于平衡期.同时,噬菌体感染对数生长前期的宿主菌,其释放量为12.8 PFU/感染中心,是平衡期释放量的9.2倍.噬菌体以对数生长期宿主为指示菌时噬菌体的滴度为4.7×108PFU/mL,而以平衡期宿主菌为指示菌噬菌体K5滴度仅能达到2.5×104PFU/mL,噬菌体K5的裂解能力显著降低.这些结果对研究噬菌体与宿主细胞的相互作用机制具有重要作用.  相似文献   

7.
去年秋天 ,炭疽引起许多美国人的恐慌 .依靠美国军方提供的资金 ,研究者现在开发出一种检测与杀死炭疽菌的革新方法 .研究者在自然界中寻觅到攫食炭疽菌的噬菌体所产生的一种酶 .这种酶称为溶素 (ly sin) ,它阻止了受炭疽菌亲属感染的大多数小鼠的死亡 .研究者在 2 0 0 2年 8月 2 2日的Nature上作了报道 .噬菌体感染细菌是为了在细菌体内繁殖自己 ,它们一旦感染了细菌便利用溶素攻破细菌的细胞壁 ,于是新的噬菌体可以感染其它细菌 .将近一个世纪以前 ,所发现的噬菌体 ,长期以来吸引着医师的兴趣 ,因为噬菌体可用来控制细菌感染 .…  相似文献   

8.
噬菌体是细菌的天敌,它利用宿主的细胞机制完成自身的复制。在感染过程中噬菌体基因组进入细菌细胞后立即产生调节或重新定向宿主特定功能的蛋白质(即抑菌蛋白),以逃避多种细菌的防御机制或改变宿主的分子代谢机制。研究发现,这些噬菌体编码的抑菌蛋白可抑制细菌分裂,干扰细菌遗传物质的复制、转录及降解,影响CRISPR介导的细菌免疫以及代谢。明确噬菌体编码的抑菌蛋白如何影响这些宿主的防御或分子代谢机制可以优化目前基于噬菌体的抗菌策略,找出控制细菌感染的新途径,为抑菌药物的发现和设计打开新的大门。本文就近年来发现的噬菌体编码的抑菌蛋白及其抑菌机制的研究进展进行综述。  相似文献   

9.
目的分离鉴定大肠埃希菌噬菌体并分析其裂解特性,为噬菌体疗法应用于大肠埃希菌感染提供实验依据。方法采用双层琼脂噬斑法从污水中分离噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体的形态学特征,利用限制性酶切图谱初步分析噬菌体的基因组,测定噬菌体对宿主菌的最佳感染复数和一步生长曲线,分析噬菌体对宿主菌的裂解谱,观察噬菌体在不同的pH及温度下对宿主菌的裂解特性,SDS-PAGE分析噬菌体的主要和次要蛋白。结果通过噬斑法从污水中分离出1株能裂解大肠埃希菌的噬菌体,命名为ΦEc-SL25;电镜显示,噬菌体ΦEc-SL25的形态特征符合有尾病毒目、管尾病毒科噬菌体;ΦEc-SL25的最佳感染复数为0.01;一步生长曲线表明,噬菌体ΦEc-SL25的潜伏期为5 min,爆发期为10 min;ΦEc-SL25对26株大肠埃希菌的裂解率可达30.8%;在温度70℃20min时以及在pH 4~10的范围内,噬菌体ΦEc-SL25仍保持其裂解活性;蛋白电泳可观察到2条主要蛋白带和至少3条次要蛋白。结论噬菌体ΦEc-SL25是一种潜伏期短、裂解较性强的毒性噬菌体,可用于开发针对大肠埃希菌感染的生物制剂。  相似文献   

10.
噬菌体展示技术的发展及应用   总被引:9,自引:0,他引:9  
高学良    赵群飞 《生命的化学》2001,21(5):432-433
噬菌体展示技术是一种用于筛选和改造功能性多肽的生物技术 ,编码多肽的DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合后 ,以融合蛋白的形式在噬菌体的表面表达出多肽序列。这是一种表型与基因型的统一。噬菌体展示技术最初是以M 13噬菌体为载体的 ,其宿主菌为大肠杆菌。以大肠杆菌为宿主的展示系统还有其他 ,如λ噬菌体和T4噬菌体等展示系统。还有利用真核细胞的病毒以及酵母菌作为展示系统的。这些展示系统各有各的优势 ,但最常用的仍是M 13噬菌体表达系统。最初的噬菌体展示系统是将外源肽或蛋白质与噬菌体外壳蛋白PⅢ或PⅧ的N末端融…  相似文献   

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