产甾体皂甙华重楼内生真菌、放线菌的分离与筛选

目的:研究重楼内生菌的次生代谢产物的医用价值。方法:从产自四川彭州的华重楼(Paris polyphylla vat．chinensis Franch)地下块茎中分离、筛选内生菌,采用PDA液体培养基26℃发酵培养;发酵液分别经泡沫反应、Salkowski反应、Liberman反应及以薯蓣皂甙元为标准对照的薄层层析分析。结果:表明其中编号为SNUF-1的真菌和编号为SNUA-1、SNUA-2的放线菌菌株均能分泌甾体皂甙或其类似化合物。结论:华重楼内生菌发酵液具有产生宿主药用活性的成份。     

产薯蓣皂甙华重楼内生菌的筛选与鉴定

从华重楼(Paris polyphylla chinensis Franch)的地下块茎中分离出107株内生菌,经TLC筛选检测,菌株RZ03和RZ07可产生薯蓣皂甙。进行了形态和生理生化鉴定并将菌株的16S rDNA序列分别与用BLAST调出GenBank EMBL DDBJ中的相关序列比较,用ClustalW绘制系统发育树,RZ03与DQ019167(Exiguobac-terium acetylicum)同源性为99%,鉴定为Exiguobacterium acetylicum,RZ03、RZ07与DQ207730(Bacillus subtilis)序列同源性为99%,初步鉴定为Bacillus subtilisRZ07。     

产甾体皂甙华重楼内生菌的筛选与鉴定

从华重楼(Paris polyphyllavar.chinensisFranch)的地下块茎中分离筛选得到2株可能产生甾体皂甙的内生菌(SS01和SS02),薄层层析检测菌株SS01、SS02的发酵产物分别有3条和2条层析带与重楼总皂甙的层析带迁移率相当。形态和生理生化特征初步表明SS01和SS02分属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)和芽孢杆菌属(Bacillussp.)细菌。扩增、测序得到SS01和SS02的部分16S rDNA序列,GenBank接收号分别为AY842143和AY842144。用Blastn调出与菌株16SrDNA同源的序列,用Clustal W进行多重序列对比,用软件Phylip按Neighbor-Joining方法构建16SrDNA系统发育树。菌株SS01和SS02分别与Cedecea davisae DSM4568、Paenibacillus daejeonensis处于同一分支,相似性分别为98.9%和97.7%,将它们鉴定为Cedecea davisae SS01和Paenibacillus daejeonensis SS02。     

一株高产PLC的CW-W-90-3菌的鉴定

198 9年 ,筛选了 1株高产 phospholipaseC(PLC)的CW W 90 3菌株[1,2 ] ,据其形态特征、生理生化反应 ,初步将其归于弧菌科气单胞菌属[3 ] ,由于该菌株的许多生理生化特性与粘质沙雷氏菌相同。但其极生单鞭毛和无色素及少许生理生化特性与粘质沙雷氏菌相异。后经AutomatedBacteriaIdentificationSystem BiologMicroStationSystem检测 96种C源和N源的利用及其个体群体发育 ,说明其与粘质沙雷氏菌 (Serratiamarcescens)相符 ;并在基因组水平上研究该菌株的系统发育 ,从分子水平上对该菌株进行 16SrRNA序列分析煌同源性比较。根据CW W 90 3菌株 16SrRNA与GeneBank数据库中Serratiamarcescens的 16SrRNA的序列具有 99%的同源性 ,终将CW W 90 3菌株鉴定为粘质沙雷氏菌武汉株 (SerratiamarcescensWuhanstrain)。     

两株丁草胺高效降解菌复配菌剂降解特性研究

LYC-1(Acinetobacter sp.)与LYC-2(Ancylobacter sp.)为两株从长期受农药污染的土壤中分离得到的丁草胺高效降解菌。本研究考察此两株降解菌复配菌剂对丁草胺降解特性,结果表明,菌株LYC-1和LYC-2的菌悬液以3:1的比例混合时,其降解率最高,且高于两个单菌株的降解率。当丁草胺浓度为100 mg·L-1和200 mg·L-1时,混合菌达到最大降解率和生长量,分别为97.8%与1.26(OD600mn)。     

中华补血草内生与根际具ACC脱氨酶活性细菌的筛选及其生物多样性

【目的】获得江苏沿海滩涂盐生药用植物中华补血草内生及根际具有1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶活性的细菌,研究其遗传多样性和潜在促生活性。【方法】从中华补血草和根际土壤分离筛选具有ACC脱氨酶活性的菌株,对其ACC脱氨酶活性定量检测,通过16S r RNA基因序列分析确定菌株系统发育地位。同时研究其固氮、溶磷、产植物生长素吲哚乙酸(IAA)及耐盐能力。【结果】分离筛选获得18株具有ACC脱氨酶活性的内生与根际细菌,定量检测发现其中有13株菌的ACC脱氨酶含量在20 nmolα-KA/(mg Pr·h)以上,有11株菌可以固氮,7株菌能够解磷,9株菌产生IAA。菌株的Na Cl盐耐受范围多数在0–13%之间。16S r RNA基因测序表明,活性菌株分属于7个属,多样性丰富,节杆菌属(Arthrobacter)为优势类群。其中菌株KLBMP 5180为节杆菌属的潜在新种。【结论】江苏沿海滩涂盐生药用植物中华补血草共生环境中具有丰富多样的具ACC脱氨酶活性的菌株,并存在潜在新物种资源,具有进一步研究价值。     

蕲艾内生细菌的分离鉴定及抑菌活性分析

为探究蕲艾(Artemisia argyi var.argyi‘Qiai’)不同组织内生菌组成及其次级代谢产物的抑菌活性，该研究采用组织培养法对蕲艾根、茎和叶内生细菌进行分离，用滤纸片法检测内生菌发酵液挥发物对6种常见病原菌的抑菌活性，并分别对其最低抑菌浓度(MICs)和最低杀菌浓度(MBCs)进行测定，结合形态观察、生理生化性质及16S rDNA序列测定对分离菌株进行鉴定。结果表明：(1)菌株lzy-21、lzy-20和lzy-1分别具有较强的分泌纤维素酶、蛋白酶和脂肪酶的能力。(2)菌株lzy-20和wnn4-3发酵液挥发物对大肠杆菌、产气肠杆菌和枯草芽孢杆菌的MICs均为16μg·mL^-1;对三者的MBCs依次为32、32、16μg·mL^-1和16、32、32μg·mL^-1。(3)菌株lzy-12对金黄色葡萄球菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌的MICs均为16μg·mL^-1,对二者的MBCs分别为32μg·mL^-1和16μg·mL^-1。(4)菌株lzy-17...     

蛭弧菌类菌株JU-PX1的生物学特性和16S rDNA序列分析

[目的]研究蛭弧菌类菌株JU-PX1的噬菌特性、形态特征,并分析16S rDNA序列从而对其进行种属鉴定.[方法]采用双层平板法和三角瓶培养法研究蛭弧菌类菌株JU-PX1的噬菌特性,通过光镜和电镜观察其形态,利用16S rDNA序列的蛭弧菌类特异性引物以及细菌通用引物进行PCR扩增.[结果]JU-PX1对10株宿主菌中的6株具有噬菌作用,特别对大肠杆菌和副溶血弧菌侵噬能力较强.菌体呈弧状或杆状,单极鞭毛,大小为(0.2-0.5) μm×(0.8-1.2) μm,在其增殖阶段也有长约3.2 μm的较长个体.扩增后分别获得了一段长为831 bp和1 515 bp的DNA序列,进一步通过NCBI BLAST和MEGA 5.10等软件分析并构建了系统发育树.[结论]蛭弧菌类菌株JU-PX1属于噬菌弧菌属(Bacteriovorax),与海岸噬菌弧菌(Bv.litoralis)亲缘关系最近,两者的16S rDNA序列相似性为93％.     

一个降解染料的希瓦氏菌新种——中国希瓦氏菌

从细胞形态、生理生化特性和16S rRNA基因和gyrB基因序列同源性分析等方面对一株广谱高效染料降解菌D14进行了鉴定.菌株D14的细胞壁革兰氏染色为阴性,细胞为杆状,大小为0.6μm～1.0μm×1.0μm～4.0μm,周身纤毛,极生单鞭毛,其生长pH范围为pH 7.0～10.0,最适生长pH为8.0,生长温度范围为4℃～40℃,最适生长温度为20℃～30℃.该菌株具有还原三价铁,液化明胶、Tween40和Tween 80,产生H2S的能力.在乳酸钠存在的条件下,能还原硝酸盐、亚硝酸盐、铁氧化物和硫代硫酸钠.可利用D-半乳糖、D-葡萄糖、蔗糖、丙酸钠、L-亮氨酸等多种有机物为碳源.BIOLOG细菌自动鉴定系统鉴定结果表明该菌株应归属于希瓦菌属.16S rDNA和gyrB基因序列分析结果表明,菌株D14与其亲缘关系最近的菌株Shewanella putrefacien ATCC8071T的16S rDNA序列相似值为97%(小于97.7%),gyrB基因序列相似值为87%(小于90%).菌体所含有的主要脂肪酸为iso-15:0,16:1ω7c,15:0和16:0,DNA中(G C)mol%含量为49.3.结合菌株D14的生理生化特征和分子生物学特性,将菌株定为希瓦氏菌属的一个新种,命名为中国希瓦氏菌(Shewanella cinica)D14T.     

文冠果一、二年生植株根系内生菌的分离、鉴定和固氮活性

该文对文冠果(Xanthoceras sorbifolia)根系内生菌的种类和固氮活性进行了首次报道。试验以田间栽培的文冠果一、二年生植株为材料,以Ashby和YMA为培养基,对根系内生菌进行了分离,通过对菌落形态的观察,划线挑取单菌落培养,并对7个代表性的单菌落进行扩大培养,提取其DNA,采用细菌16S rDNA通用引物序列进行PCR扩增,胶回收、测序后,进行Blast比对分析。试验结果表明:YMA培养基上的菌落数量和种类均明显多于Ashby培养基上的菌落。田间一年生文冠果与田间二年生文冠果的根系内生菌情况存在差异。一年生文冠果的根系内生菌数量与种类略多于二年生文冠果。一年生文冠果根系中分离得到的主要内生菌为成团泛菌(Pantoea agglomerans)、根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)和产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)等;田间二年生文冠果根系中分离得到的主要内生菌为假单胞菌属(Pseudomonas)细菌。固氮活性测定结果表明,在所分离的7个菌株中,6个测到了固氮酶活性,其中鉴定为产酸克雷伯菌的菌株固氮酶活性显著高于其他菌株,达到9.688nmol·mg-1·h-1,为文冠果固氮菌肥的菌种的筛选奠定了基础。     

球药隔重楼的化学成分研究(英文)

采用硅胶柱层析、大孔吸附树脂、ODS柱层析、Sephadex LH-20和RP-C18柱层析等技术中分离得到8个化合物。通过波谱学数据和已知化合物数据比较,分别鉴定为β-谷甾醇(1),β-蜕皮激素(2),Paris SaponinsⅤ(3),Paris SaponinsⅠ(4),Paris SaponinsⅡ(5),Paris SaponinsⅦ(6),Paris Saponins H(7)和Paris SaponinsⅥ(8)。化合物1～8均为首次从球药隔重楼中分离得到。     

蚤休、重楼和王孙

经过历史考证,作者确认:首载于《神农本草经》的蚤休为重楼属的Paris polyphyllaSmith var. chinensis (Fr.)Hara;首载于《滇南本草》中的重楼为重楼属的Paris polyphyllaSmith var. yunnanensis (Fr.) Hand. -Mazz.;《植物名实图考》中的王孙则是三白草科的三白草Saururus chinensis (Lour.) Bail.     

云南重楼植物内生真菌的分离及抗菌活性筛选

从云南重楼[Paris polyphylla Smithvar.yunnnanensis(Franch.)Hand.Mazz.]块状茎中分离出166株内生真菌,对其进行形态分类鉴定归于4目,6科,20个属,体现了云南重楼植物内生真菌的生物多样性特征。同时,选择与人类和植物相关的37株病原微生物作为抗菌活性筛选指示菌,进行了云南重楼植物内生真菌抗菌活性的初步研究。结果表明,4株内生真菌对细菌、植物致病真菌、皮肤致病真菌多种病原微生物具有显著抑制生长的作用。     

南方红豆杉根际溶无机磷细菌的筛选、鉴定及其促生效果

【目的】对南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)根际溶无机磷细菌进行了分离、筛选与鉴定,并对获得的高效溶磷菌株进行了温室盆栽试验。本研究为通过生物途径改善南方红豆杉磷素供应,促进其生长提供了优良的菌株资源。【方法】利用选择培养基从南方红豆杉根际土壤中共分离出具溶磷能力的细菌;采用NBRI-BPB培养基进行复筛获得溶磷能力较强的溶无机磷细菌;并采用钼锑抗比色法测量其在NBRIP培养基中经4d发酵后的可溶性磷含量;通过形态指标、生理生化测定、Biolog系统和16S rDNA序列分析鉴定细菌种类;并进行了溶磷菌株的室内盆栽实生苗接种试验。【结论】从南方红豆杉根际共分离出4株高效溶磷细菌,分别鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)、草木樨中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)和地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis);4株细菌对南方红豆杉苗期的生长有明显的促进作用。     

Cloning and Functional Characterization of a Squalene Synthase from Paris polyphylla var. yunnanensis

Paris polyphylla Smith var. yunnanensis (Franch.) Hand. – Mazz. is a precious traditional Chinese medicine, and steroidal saponins are its major bioactive constituents possessing extensive biological activities. Squalene synthase (SQS) catalyzes the first dedicated step converting two molecular of farnesyl diphosphate (FDP) into squalene, a key intermediate in the biosynthetic pathway of steroidal saponins. In this study, a squalene synthase gene (PpSQS1) was cloned and functionally characterized from P. polyphylla var. yunnanensis, representing the first identified SQS from the genus Paris. The open reading frame of PpSQS1 is 1239 bp, which encodes a protein of 412 amino acids showing high similarity to those of other plant SQSs. Expression of PpSQS1 in Escherichia coli resulted in production of soluble recombinant proteins. Gas chromatography-mass spectrometry analysis showed that the purified recombinant PpSQS1 protein could produce squalene using FDP as a substrate in the in vitro enzymatic assay. qRT-PCR analysis indicated that PpSQS1 was highly expressed in rhizomes, consistent with the dominant accumulation of steroidal saponins there, suggesting that PpSQS1 is likely involved in the biosynthesis of steroidal saponins in the plant. The findings lay a foundation for further investigation on the biosynthesis and regulation of steroidal saponins, and also provide an alternative gene for manipulation of steroid production using synthetic biology.     

川连抗癌的实验研究

目的通过对动物体内抗癌实验的观察研究,验证中药川连具有抑制和治疗肿瘤的生物学特性。方法选取80只昆明小鼠,于前肢皮下接种小鼠肉瘤细胞。将动物随机分为对照组和川连治疗组。治疗组每日给予川连汤剂稀释液（0．5mg,瘤内注射,1次／d）,连续10d;对照组注射同体积生理盐水。结果连续观察70d,治疗组小鼠存活率100％,对照组小鼠存活率为0％。结论中药川连具有抑制和治疗肿瘤作用,其抗肿瘤作用机制有待于进一步研究。     

镧对华重楼生长及皂苷含量的影响

本研究以4年生华重楼（Paris polyphylla Smith var. chinensis（Franch.）Hara）为实验材料，分别采用0、5、20、80、160 mg/L的加镧营养液培养华重楼植株，通过比较不同营养生长指标及采用HPLC法测定根茎皂苷组分，研究不同施镧水平对华重楼生长及皂苷含量的影响。结果显示，镧对华重楼生长及皂苷含量均有显著影响，随着镧溶液浓度的增加，华重楼皂苷含量呈上升趋势，但当镧含量达到160.00 mg/L时，则会对华重楼的生长产生抑制作用，导致株高降低、比叶面积升高。研究结果表明80.00 mg/L的施镧水平最有利于华重楼的营养生长及根茎皂苷积累。     

Chemotaxonomic study of the genus Paris based on steroidal saponins

The study of saponins from the genus Paris (Trilliaceae) has led to the isolation of over 70 steroidal saponins. Their distributions in different species are summarised and possible patterns in the modifications of the aglycone moiety, based on a biosynthetic pathway for steroidal saponins, were reviewed in this study. The chemotaxonomic value of these secondary metabolites has been evaluated, and it is suggested that Paris thibetica, Paris vietnamensis, Paris delavayi and Paris pseudothibetica, which contain more active saponins, could be an ideal substitution material for Paris polyphylla Smith var. chinensis, and Paris polyphylla Smith var. yunnanensis. Distribution of the same types of saponins amongst the Trilliaceae suggests a close relationship between the Trillium and Paris.     

野生珍稀药用植物七叶一枝花的成分含量分析

利用分光光度计、高效液相色谱仪和等离子光谱仪对华中地区珍稀药用植物七叶一枝花[Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch．)Hara]根茎的化学成分薯蓣皂甙元、黄酮、19种游离氨基酸、微量元素进行了分析。结果显示：薯蓣皂甙元含量为0．62％,黄酮含量为0．0628%,总游离氨基酸含量为0．33%,微量元素中钙为0.77％,镁为0.20％,钾为0.98%,铁为0．20%,锌为44．8mg／kg,磷为746mg／kg。