酵母细胞外蛋白质和多肽的产生及分泌

白地霉(Geotrichum candidum)AS 2．198的突变株NX47和橙黄红酵母(Rhodotoru-ta aurantiacam)AS 2．280蛋白质的合成与分泌和多肽的合成均在培养前期与细胞生长同步进行。合成的蛋白质全部或大部分贮存在胞周间,并随即通过细胞壁从胞周间分泌到细胞外,培养基的组成和培养时间对蛋白质的组份无显著的影响。合成的多肽全部贮存在细胞内。突变株NX47缓慢地分泌蛋白质,快速分泌多肽。其分泌能力取决于分为三层的细胞壁结构。多肽在培养前期不分泌,直到进入对数生长后期,才通过原生质膜和细胞壁由细胞内迅速地分泌到细胞外。分泌时间比其合成滞后一天以上。菌株AS 2．280的细胞壁没有三层结构,却能快速分泌蛋白质,但不分泌多肽。     

上皮素(epithelin)前体基因编码两种对上皮细胞生长有相反作用的蛋白质

上皮细胞广泛分布于身体各部位,从皮肤的表皮细胞到消化、泌尿器官的粘膜及各种腺体等。研究显示,这些细胞的生长发育及其功能维持需要某些多肽类生长因子的存在。这些可溶性生长因子来源于上皮细胞下的基质或上皮细胞本身,以旁分泌或自分泌方式发挥作用。1990年,Shoyab等从大鼠肾脏分离出两种蛋白     

枯草芽孢杆菌胞外氨肽酶对菌体生长的作用研究

【目的】利用基因敲除技术构建突变菌株BS-AP-K来研究枯草芽孢杆菌的分泌型氨肽酶对菌体生长的作用。【方法】基于Xer/dif重组系统敲除Bacillus subtilis 168基因组中ywaD基因,研究比较野生型与BS-AP-K菌株在不同培养基中的生长情况。【结果】通过比较两菌株的生长情况,发现敲除分泌型氨肽酶会对菌体生长带来不利影响,而这种影响可以通过在培养基中添加多种游离氨基酸来弥补。【结论】研究结果表明胞外氨肽酶通过酶切外源蛋白质以及多肽来为细胞生长提供营养所需。     

蛋白质的微量顺序分析

蛋白质结构功能的研究是分子生物学领域中的一个重要方面。遗传工程、蛋白质工程的相继发展,到最后表达产物的分离、纯化和鉴定仍然需要蛋白质化学作为基础。近年来生物科学中很多重要的进展是由于细胞和细胞器中极少量的蛋白质或多肽的分离分析和了解结构功能后而取得的。这些都促进了蛋白质化学的发展。特别是应用了一些新的微量方法导致对基本细胞过程有了较好的了解,这包括:多肽激素及其相关的释放因子、生长因子和肿瘤、生物能力学、质子泵、离子泵和通道、拓扑基因学、蛋白质分泌、分子病毒学和免疫学、膜蛋白分析和受体研究等。     

非经典的蛋白质分泌途径

蛋白质分泌是细胞间进行信息传递的重要方式之一。一般的分泌蛋白在其N端都具有信号肽序列,可以通过经典的内质网-高尔基体途径进行运输,并最终分泌到细胞外。近来发现细胞内存在另一类分泌蛋白,它们能够分泌到细胞外发挥功能,但却没有典型的信号肽序列,被称为非经典分泌蛋白。越来越多的证据表明,这类蛋白质的分泌有其独特的机制。本综述了这类蛋白质的各种分泌机制及可能的生理意义。     

纳米金颗粒负载的免疫原性多肽体外T细胞筛选

备受关注的肿瘤免疫治疗其核心在于能够激发免疫应答的抗原表位。该文以纳米金颗粒作为筛选载体,偶联肿瘤抗原,体外与人外周血单个核细胞相互作用,以酶联免疫斑点法精确检测免疫原性来筛选具有免疫原性的抗原多肽。光谱分析证明了纳米金颗粒与合成多肽的偶联,荧光显微镜和电子显微镜直接证明细胞摄取偶联复合物,通过检测T细胞γ-干扰素分泌水平证实了不同多肽的免疫原性。该文优化了实验参数(如p H、缓冲液体系以及孵育时间等),显著地减少了从多肽合成到免疫原性分析的实验过程所需的时间,同时,实验规模也成功地缩小到了96孔板,达到简单快速筛选免疫原性多肽的最终目的。     

人 LAK 细胞免疫效应分子 HMGN2 的鉴定

为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测定、蛋白质印迹分析证明HLP-3p21为HMGN2.最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)试验证明HMGN2有抗大肠杆菌ML-35p氨苄青霉素耐药株、铜绿假单胞菌ATCC27853、白色念珠菌ATCC 10231活性,无抗金黄色葡萄球菌ATCC25923活性.制备HMGN2多克隆抗体,应用免疫荧光化学、酶联免疫吸附测定和蛋白质印迹方法对HMGN2进行定位分析,证明单个核细胞经IL-2刺激成为LAK细胞时部分HMGN2由胞核转移至胞浆,进而分泌到胞外.提示HMGN2是LAK细胞一个新的免疫效应分子.     

phoA基因的克隆和一种原核分泌表达筛选载体的构建

外源基因在原核细胞中的表达,是基因工程和分子生物学许多研究领域中应用最为广泛的技术,大肠杆菌已成为蛋白质表达的首选宿主和生产基因工程多肽药物的主要表达系统。发展通用的高表达、可溶性以及分泌性表达策略,是目前该领域研究中的重点发展方向。实现外源基因在大肠杆菌中的分泌表达,由于对蛋白质分泌机制的基础研究还不够深入,缺乏有力的理论指导,目前还存在许多问题,急需要发展新的研究技术和思路。研究表明,表达蛋白的性质是决定它能否有效分泌的重要性质,蛋白质中少数氨基酸的改变可显著的影响其分泌情况。为了能够方便的…     

蛋白质分泌信息与基因工程

蛋白质分泌信息存在于自身氨基酸排列顺序内,上溯到DNA分子中。信号顺序引发蛋白质分泌的早期过程,成熟蛋白顺序决定最终分泌结果。它们相互作用并离不开细胞输出环境的配合。信号顺序启发人们对分泌性载体的构建,对蛋白质分泌信息的全面了解,肯定了基因工程中全方位研究的必要。     

mRNA展示技术

mRNA展示技术是一种新兴的体外筛选多肽和蛋白质的有力工具.在筛选过程中,mRNA与其编码的多肽或蛋白质共价结合,形成mRNA-蛋白质融合体,能在大容量的多肽文库(1013～1015)中筛选具有特定生物学功能的多肽和蛋白质.目前,mRNA展示技术主要应用于各种靶分子的多肽和蛋白质适体的发现以及蛋白质相互作用机制的阐明和分析.由于其自身的巨大发展潜力,mRNA展示技术具有更为广阔的应用前景.