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相似文献
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1.
利用末端重叠PCR法和定点突变技术,获得了去除N-连接多糖结构的乙肝表面抗原S突变基因,将乙肝表面抗原S-蛋白中结合N-连多糖结构序列Asn-X-Thr中的第148苏氨酸的密码子ACT,改变为编码甘氨酸的密码子GGT。构建了该突变基因的表达载体并在CHO细胞中表达,筛选到两株表达水平较高的细胞系。对其中的一株细胞系C41的表达产物做了初步纯化和鉴定,纯化样品经SDS-PAGE电泳分析,只含有23k  相似文献   

2.
本文研究了新的层析介质(Cellufine)对原纯化工艺中SepharseCL-4B柱层析纯化后的乙肝表面抗原(HBsAg)组分及DNA组分的进一步纯化效果。结果表明:该层析介质可以提高HBsAg的纯度和收量,并对初步提纯DNA组分中的乙肝表面抗原有一定意义。并首次发现DNA组分中乙肝表面抗原的SDS-PAGB图谱较正常基因乙肝表面抗原的图谱缺少30KD的条带。  相似文献   

3.
本文采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从鼠抗乙肝病毒表面抗原(HBsAg)单克隆细胞中克隆到了该抗体重、轻链可变区(Ⅴ区)基因,并分别将其与人的恒定区基因Cγ3,Ck相拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因。SDS-PAGE和Western-Blot分析结果证实嵌合抗体重链基因在E.coli中得到了表达。间接ELISA法免疫测定的结果表明该表达产物具有与乙肝表面抗原结合的能力。  相似文献   

4.
糖基化对乙型肝炎表面抗原疫苗的影响   总被引:5,自引:0,他引:5  
哺乳动物(CHO)细胞表达的三种糖基化程度不同的乙肝表面抗原(HBsAg)A(含GP30,GP27,P23),B(含GP27及P23),C(只有P23),在免疫原性、放置后抗原的稳定性以及对不同单克隆抗体亲和力等方面都有明显的差异;(1)免疫BALB/C小鼠后血清中抗体工(ED50)。平均结果为A=1:80,B=1:117,C=1:14,表明有糖基的HBsAg疫苗对小鼠的免疫力明显高于无糖基的HB  相似文献   

5.
利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)[1]作扩增选择标记,结合CMV-IE启动子,在CHO细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因。初筛克隆表达水平RPHA检测为1:64,经过谷氨酰胺合成酶基因的抑制剂MSX的两轮基因扩增,HBsAg的表达水平RPHA在1:256以上。方瓶静置培养收液,RIA检测HBsAg最高产量为9.5μg/毫升。表达水平较以前利用dhfr基因扩增选择系统所得到的高表达细胞系B43高一倍以上。利用GS基因扩增选择系统可以在哺乳动物细胞中高水平表达外源基因。  相似文献   

6.
昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法   总被引:4,自引:0,他引:4  
谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferases,GST)是一类具有多种生理功能的同功酶.从蜡螟幼虫(Galeriamelonela)的提取液中分离纯化谷胱甘肽S-转移酶的基本方法如下:首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨,经10000g和100000g分级离心;取上清液通过QAE-SephadexA-25离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白;然后采用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶亲和层析(GSH-QT4),四溴酚酞二磺酸盐-琼脂糖凝胶亲和层析(BSP-QT4),铜离子-琼脂糖凝胶螯合层析(Cu2+-QT4)及PBE94-Sepharose(PBE94)聚焦层析等层析技术进一步分离纯化.将上述方法获得的色谱峰以CDNB和DCNB为底物检测生物活性.具有生物活性部分的蛋白质,通过SDS-PAGE测定其分子量.实验结果表明,采用GSH-QT4亲和层析法获得的活性峰,在SDS-PAGE图谱上呈现出两条带,分子量为24kD,24.5kD左右;Cu2+-QT6螯合层析法分离的活性峰,呈现出一条带,分子量为24kD左右;PBE94-聚焦层析法分离获得三个活性峰:第一色谱峰,呈现出一条带,分子量为23kD左右  相似文献   

7.
柑叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质的研究   总被引:8,自引:0,他引:8  
柑(Citrusreticulata Blanco)幼叶中存在高活性的酸性蔗糖酶。经硫酸铵盐析、DEAE-琼脂糖离子交换层析、SephacrylS-200 凝胶层析纯化,活性回收率6.4% ,纯化倍数179.2 倍。纯化的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示1 条蛋白带,其亚基分子量40 kD。用SephacrylS-200 凝胶层析法测得分子量为80 kD。推测该酶由两个相同亚基构成。以蔗糖为底物测定该酶的表观Km 为1.6×10- 2 m ol·L- 1,Vm ax为100 m g 还原糖·m g- 1蛋白质·h- 1。最适pH 5.0,酸碱稳定区在pH 4.5—5.5 之间。最适温度55℃  相似文献   

8.
将含有重组HBsAg的pMEP4表达性质粒转染HepG2,CHO,C127和CV1细胞,并用ELISA检测表达量,结果在HepG2细胞中的表达量较高,在C127和CV1细胞中的表达量偏低,而在CHO细胞中没有表达。  相似文献   

9.
基因工程乙肝病毒表面抗原纯化工艺研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
基因工程乙肝病毒表面抗原(rHBsAg)是由重组哺乳动物细胞CHO系分泌表达的,经过纯化制备基因工程乙肝疫苗。目前在国际上,对从CHO细胞培养液中分泌的rHBsAg,纯化工艺主要采用多步柱层析和超滤技术,而在国内,CHO系rHBsAg的大规模生...  相似文献   

10.
根据Nm23-H1与HbFGFcDNA序列,人工合成一段中间核酸序列,将它分别与Nm23-H1cDNA的上游引物及HbFGFcDNA的下游引物组成两对引物,通过PCR(聚合酶链式反应)构建出融合基因Nm23-H1/HbFGF,将其定向克隆于质粒载体pBV220上,经诱导,SDS-PAGE分析,表达产物分子量为34kD,表达量占菌体总蛋白的14%,表达产物以包涵体形式存在,ELISA和Western  相似文献   

11.
SITE OF ACTION OF RADIOPENICILLIN   总被引:10,自引:2,他引:8       下载免费PDF全文
  相似文献   

12.
THE CELLULAR SITE OF ACTION OF ANGIOTENSIN   总被引:7,自引:0,他引:7       下载免费PDF全文
The site of action and the distribution of angiotensin II have been studied in the mouse. A comparison of the ratios of angiotensin-14C and inulin-3H at the time of the pressor effect reveals an extracellular pattern of distribution. Morphological studies were made using angiotensin coupled to exogenous enzymes which can be demonstrated histochemically. Coupling of angiotensin to horseradish peroxidase or cytochrome c, with glutaraldehyde or difluorodinitrodiphenylsulfone (FNPS) as the coupling agent, does not alter the pattern of its vasopressor response or that of its inactivation; nor are differences present between angiotensin and the angiotensin-enzyme complexes in the stimulation of in vitro tissue preparations. Dissociation of the complexes was shown not to occur in vitro, but the possibility of a serum factor splitting the complexes immediately after intravenous injection cannot be excluded. Since these complexes are localized on the endothelium and not on the smooth muscle at the time of maximum hypertension, the endothelium is proposed as the site of action for angiotensin.  相似文献   

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14.
铜梁旧石器遗址自然环境的探讨   总被引:1,自引:0,他引:1  
<正> 在我国南方的洞穴中发现了丰富的、更新世不同时期的哺乳动物化石、古人类化石和旧石器,但洞外第四纪地层中的发现物则不多,比较重要的有云南元谋早更新世哺乳动物群和晚更新世资阳人哺乳动物群。1976年春发现了铜梁旧石器遗址,在文化层中发现了较丰富的植物和哺乳动物化石,在其上覆的地层中,还发现一些新石器时代遗物,这就  相似文献   

15.
金牛山人遗址下部地层的热释光断代   总被引:2,自引:0,他引:2  
金牛山A点剖面分为8层,曾发现有大量化石.1984年在Ⅶ层底部见到人骨化石,定名为“金牛山人’.热释光测年结果表明,Ⅵ层下部为18.84±1.51万年;Ⅶ层上部为19.70±0.70万年;Ⅶ层下部为19.46±0.34万年;Ⅷ层上部为38.87±5.07万年.地层年代数据与剖面层序一致,与同层中更新世晚期动物化石时代吻合.可以认为,Ⅵ至Ⅶ层堆积连续而迅速,Ⅶ至Ⅷ层堆积有明显间断.20万年前,该处曾是一个长时间稳定的洞穴环境.这与“金牛山人”活动所需要的时间与空间相符.  相似文献   

16.
梁山旧石器遗址的初步观察   总被引:6,自引:6,他引:0  
梁山旧石器产自汉水第三阶地砾石层,与“大熊猫-剑齿象动物群”共生,是一个含手斧的旧石器时代初期工业。它与秦岭北坡“汾渭地堑”的同期文化关系密切,在类型和技术上与华南的百色石器、朝鲜半岛的全谷里文化、东非的奥杜韦文化和发达的奥杜威文化也有相似之处。  相似文献   

17.
18.
THE SITE OF SWELLING IN MUSCLE   总被引:2,自引:2,他引:0       下载免费PDF全文
  相似文献   

19.
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