鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白基因的RT-PCR/RFLP分型

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)属于冠状病毒科冠状病毒属,可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多部位病变.近年来,由于新的IBV变异毒株不断出现,从而导致鸡传染性支气管炎病的不断爆发,造成严重的经济损失[1].IBV的基因组为单股RNA,约27.6kb,该基因主要编码3种主要结构蛋白:纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N),其中S蛋白成熟裂解为S1和S2两个蛋白亚基.S1蛋白是IBV的主要免疫原基因,可刺激机体产生中和抗体,决定病毒的组织亲嗜性,在病毒血清学分类中起主要作用[1,2].H株是1993年在河南省分离的典型肾病变IBV毒株,我们对IBV的H株S1基因进行了RT-PCR及酶切分析,并将其PCR产物克隆入质粒载体,为进一步研究IBV的H株分子生物学特性和研制IBV基因工程疫苗打下基础.     

鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LDL97 Ⅰ/97株S基因特征

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性高度接触性传染病.该病主要侵害鸡的呼吸系统、消化系统和泌尿生殖系统,可引起雏鸡死亡,蛋鸡产蛋量和蛋品质下降,给养禽业造成很大的经济损失,成为影响世界各国养禽业发展的主要疫病之一.IBV是尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)第三群的典型代表种[1].其基因组为不分节段的单股正链RNA,全长约27.6kb[2].IBV S蛋白形成病毒表面的纤突结构,翻译后的前体蛋白在跨膜时被裂解为N端的S1和C端的S2两个亚单位.S1为IBV的重要免疫原蛋白,能诱导机体产生血凝抑制抗体和病毒中和抗体[3].而且S1基因的点突变、插入、缺失或重组是IBV产生新血清型、亚型或变异株的主要原因[4].S2糖蛋白的主要功能是将S1蛋白锚定在病毒粒子的囊膜上,同时其N端也存在抗原表位[5].     

鸡传染性支气管炎病毒CK／CH／LDL97 Ⅰ／97株S基因特征

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性高度接触性传染病。该病主要侵害鸡的呼吸系统、消化系统和泌尿生殖系统,可引起雏鸡死亡,蛋鸡产蛋量和蛋品质下降,给养禽业造成很大的经济损失,成为影响世界各国养禽业发展的主要疫病之一。IBV是尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)第三群的典型代表种[1]。其基因组为不分节段的单股正链RNA,全长约27.6kb[2]。IBV S蛋白形成病毒表面的纤突结构,翻译后的前体蛋白在跨膜时被…     

鸡传染性支气管炎病毒变异株的分离及其S1基因序列分析

本实验对山东省泰安地区某蛋鸡场产蛋下降鸡群发生的临床症状疑似鸡传染性支气管炎病例,无菌采集气管、肺脏、肾脏等组织,接种SPF鸡胚,经病毒形态观察、血凝特性试验、动物回归试验等证实,我们鉴定到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV);病毒中和试验表明,该病毒为一株变异毒株,使用国外针对IBV 793/B血清型发表的血清型特异性引物经RT-PCR方法获得了该毒株的免疫原基因S1基因,初步确定该传染性支气管炎病毒变异毒株为793/B血清型.     

鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白基因的RT-PCR/RFLP分型

鸡传染性支气管炎病毒(ＩＢＶ)属于冠状病毒科冠状病毒属,可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多部位病变。近年来,由于新的ＩＢＶ变异毒株不断出现,从而导致鸡传染性支气管炎病的不断爆发,造成严重的经济损失[1]。ＩＢＶ的基因组为单股ＲＮＡ,约27.6ｋｂ,该基因主要编码3种主要结构蛋白:纤突蛋白(Ｓ)、膜蛋白(Ｍ)和核衣壳蛋白(Ｎ),其中Ｓ蛋白成熟裂解为Ｓ1和Ｓ2两个蛋白亚基。Ｓ1蛋白是ＩＢＶ的主要免疫原基因,可刺激机体产生中和抗体,决定病毒的组织亲嗜性,在病毒血清学分类中起主要作用[1,2]。Ｈ株是1993年在河南省分离的典型肾…     

鸡传染性支气管炎病毒变异机制的研究进展

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB),是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多部位病变.病鸡表现为咳嗽、喷嚏、发出气管啰音.幼鸡流鼻液,蛋鸡产蛋数量和质量下降,肉鸡食欲不振,肾型病鸡肾肿大、苍白,有大量尿酸盐沉积.鸡不分年龄、性别和品种均易感,但主要侵害1～4周龄的幼鸡[1].     

鸡传染性支气管炎病毒变异株的分离及其S1基因序列分析

本实验对山东省泰安地区某蛋鸡场产蛋下降鸡群发生的临床症状疑似鸡传染性支气管炎病例,无菌采集气管、肺脏、肾脏等组织,接种SPF鸡胚,经病毒形态观察、血凝特性试验、动物回归试验等证实,我们鉴定到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV);病毒中和试验表明,该病毒为一株变异毒株,使用国外针对IBV793/B血清型发表的血清型特异性引物经RTPCR方法获得了该毒株的免疫原基因S1基因,初步确定该传染性支气管炎病毒变异毒株为793/B血清型。     

鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白S1基因的克隆及其在毕赤酵母中表达

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)河南分离株H,经SPF鸡胚增殖,差速离心纯化病毒,SDS-蛋白酶K法抽提病毒RNA。参照IBV Bcaudette株纤突蛋白S1基因序列设计并合成引物,以其进行RT—PCR,成功地扩增出IBV H株S1基因。扩增产物经Bst YⅠ Hae Ⅲ和Pst Ⅰ酶切分析,结果表明,IBV H株S1基因的RFLP图谱与M41株S1基因的完全一致,初步断定IBV H株为Mass血清型。将IBVH株S1基因克隆于pGEM—T载体中进行序列分析,结果表明该基因全长为1611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),与标准株M41和Beaudette的S1基因序列相比较,同源率分别达到97．39％和97、27％。将IBV H株S1基因亚克隆到pPICZ—A表达载体,转化毕赤酵母中,SDS—PAGE实验证实了IBV H株S1基因在毕赤酵母中得以表达,进一步用鸡抗IBV血清做Westernblot检测．证实了表达产物的抗原特异性。     

肾型IBVS1基因重组BCG菌株的构建及其免疫原性研究

S1基因是传染性支气管炎病毒(IBV)的主要保护性抗原基因,应用RT-PCR技术特异地扩增嗜肾型传染性支气管炎病毒X株的S1基因,经序列分析证实为S1基因,将其连接到含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的表达载体pRR3上,从而构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pR-α-S1,再电转化至BCG中,形成重组菌株rBCG-S1。热激后S1蛋白在耻垢分枝杆菌M.smegmatismc2155中高效表达,并且通过ELISA和Western blot检测能够被抗IBVS1蛋白的单克隆抗体识别。将106CFU的重组菌株rBCG-S1皮下注射免疫6周龄的SPF鸡,动物保护试验结果表明重组菌株rBCG-S1对鸡具有一定的免疫保护效果,能够保护SPF鸡抵抗IBVX毒株强毒攻击。血凝抑制试验表明血凝抑制抗体滴度能够显著增加。构建的重组菌株为今后开发新型鸡传染性支气管炎基因工程弱毒疫苗奠定了基础。     

传染性支气管炎病毒N蛋白CTL表位与BF2*15鸡MHC I基序的相互作用

【目的】近年来鸡传染性支气管炎病毒在国内鸡群呈现流行趋势,尤其是变异毒株的出现,加剧了对鸡群的危害。鸡主要组织相容复合体蛋白(MHC I)通过特定的基序结合抗原表位多肽,进而识别感染病毒的细胞并引起免疫反应,达到清除病毒的效果。鉴定BF2*15鸡主要组织相容复合体(MHC I)的结合基序。【方法】采用同源建模、分子动力学和分子对接等计算方法,构建了传染性支气管炎病毒(IBV)N蛋白表位多肽和鸡MHC I BF2*15之间的复合物结构,来探索BF2*15识别抗原表位多肽的潜在结合基序。【结果】通过对该复合物的相互作用关系分析,鉴定出BF2*15鸡主要组织相容复合体(MHC I)的一条潜在结合基序"x-Arg-xx-x-Arg"。【结论】解释了传染性支气管炎病毒N蛋白CTL表位与BF2*15鸡MHC I基序的相互作用原理,该研究结果对了解传染性支气管炎病毒免疫机制以及基于特定基序筛选和设计通用疫苗具有借鉴意义。     

F.t.-i.r. and laser-Raman spectra of thymine and thymidine

F.t.-i.r. and laser-Raman spectra of thymine and thymidine in the solid state were recorded. Assignments were proposed for the frequencies observed. The influence of the deoxy sugar on the vibrations of the nucleoside are discussed as a function of its particular puckering. The aim of this work is to elucidate the differences between the molecules constituting the nucleic acids, in order the better to comprehend their biological functions.     

F.t.-i.r. and laser-Raman spectra of guanine and guanosine

Fourier-transform infrared (F.t.-i.r.) and laser-Raman spectra have been obtained for solid guanine. The F.t.-i.r. spectrum of guanosine in the solid state was also recorded. Assignments are proposed for the i.r. bands. The molecular basis of the spectral differences between guanine and guanosine are discussed.     

F.t.-i.r. and laser-Raman spectra of cytosine and cytidine

Fourier-transform infrared (F.t.-i.r.) and laser-Raman spectra of cytosine and cytidine in the solid state have been recorded and assignments of the frequencies made. Comparison of the observed frequencies for cytosine with those for cytidine permits identification of the bands characteristic of the sugar on the one hand, and of the pyrimidine base on the other.     

R.b.e. and o.e.r. of extended-Bragg-peak helium ions: survival and development of rat embryos.

Rats were exposed under aerobic or hypoxic conditions to 200-1200 rads of 60Co gamma-rays or extended-Bragg-peak helium ions on the eighth day of gestation. Uterine contents were examined on the twentieth day of gestation. At the 50 per cent embryonic survival level, helium ion r.b.e. was 1(.0) (aerobic) and 1(.2) (hypoxic). Maximum attainable gamma-ray and helium-ion o.e.r.s. were 2(.2) and 1(.7) respectively, indicating an oxygen-effect gain (o.e.g.) of 1(.2). At the 10 per cent survival level helium ion r.b.e. was 1(.1) (aerobic) and 1(.4) (hypoxic). Gamma-ray and helium-ion 0.e.r.s. were 2(.0) and 1(.5) respectively, indicating a helium ion o.e.g. of 1(.3). These data demonstrate that the small fraction of high-LET radiation present in this helium ion beam has a neglible effect on the aerobic r.b.e., but lowers the effective o.e.r. of the beam approximately 25 per cent relative to that of gamma-rays. Helium ions were significantly more effective than gamma-rays in killing embryos under hypoxic conditions, in producing congenital abnormalities under aerobic conditions, and in stunting foetal growth under both conditions.