猪瘟病毒石门株与兔化弱毒株E0糖蛋白基因的克隆及序列分析

参考已发表的猪瘟病毒序列,设计并合成了一对引物,应用ＲＴＰＣＲ 技术,扩增了猪瘟兔化弱毒（Ｈｏｇ ｃｈｏｌｅｒａ ｖｉｒｕｓ ｌａｐｉｎｉｚｅｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｓｔｒａｉｎ , ＨＣＬＶ） 和石门强毒株的Ｅ０ 糖蛋白基因,并将其克隆到ｐＧＥＭＴ 载体中,测定了其核苷酸序列,并推导了其氨基酸序列。结果表明我国这两株强弱不同毒株Ｅ０ 糖蛋白核苷酸序列同源性和推导的氨基酸序列同源性分别为９５－０ ％ 和９４－３ ％ ,有１３ 个氨基酸的差异,ＨＣＬＶ 比石门株多了一个潜在的Ｎ糖基化位点。将我国这两株病毒与国外已报导的ＨＣＶ 毒株Ｅ０ 基因序列进行了比较,发现石门株与日本的两株毒株ＡＬＤ 和ＧＰＥ－ 同源性较高,核苷酸序列同源性分别为９７－４ ％ 和９６－５ ％ ,氨基酸同源性分别为９７－４ ％ 和９６－０ ％ ,而与欧洲Ｂｒｅｓｃｉａ 株和Ａｌｆｏｒｔ 株同源性较低,核苷酸同源性分别为９２－２ ％ 和８６－５ ％ ,氨基酸同源性为９５－２ ％ 和９２－５ ％ , ＨＣＬＶ 与ＡＬＤ、ＧＰＥ－ 、Ｂｒｅｓｃｉａ、Ａｌｆｏｒｔ 株核苷酸同源性分别为９５－６ ％ 、９４－９ ％ 、９１－３ ％ 、８５－５ ％ …     

猪瘟病毒石门株NS2—3基因片段的序列测定及比较

根据猪瘟病毒Ｃ株的序列,以计算机辅助设计,化学合成１对引物（ＰＦ５６４８／ＰＲ６６０４）,应用ＲＴＰＣＲ技术从感染猪血中成功地扩增了我国猪瘟病毒强毒石门株ＮＳ２３基因片段,大小为９５７ｂｐ,位于ＮＳ３基因的中部ＮＴＰａｓｅ和Ｈｅｌｉｃａｓｅ活性区。克隆后测序,结果表明该段基因产物具有解旋酶超家族全部七个特征性保守序列,包括共同的ＮＴＰ结合基序Ａ位点（ＧＸＧＫＴ／Ｓ）和Ｂ位点（３ｈｙ,２ｘ）Ｄ。序列同源性比较表明,石门株与日本的ＡＬＤ和ＧＰＥ－株同源性最高,与其它３株猪瘟病毒（Ｃ株、Ｂｒｅｓｃｉａ株和Ａｌｆｏｒｔ株）的同源性也很高,并与２株牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）（ＮＡＤＬ株和ＳＤ１株）也有较高的同源性,尤其是由核苷酸序列推导的氨基酸序列,同源性均大于９０％,是瘟病毒属基因组中最保守的区段,这与该基因产物在病毒复制及聚蛋白前体加工过程中所具有的重要功能是一致的     

CS3纤毛抗原表达调控机理的研究

ＣＳ３是某些肠毒素大肠杆菌菌体表面上的多聚物,它能使病原菌粘附于宿主的小肠上皮细胞上,是致病的重要因素．为了探索ＣＳ３菌毛抗原基因的表达调控机制,根据ＣＳ３亚基结构基因的核苷酸序列分析表明,在其翻译起始位点的上游存在着ｒｂｓ位点及原核启动子的－１０区和－３５区ＤＮＡ序列．采用基因重组技术将ＣＳ３结构基因上游１２０ｂｐ的ＤＮＡ片段亚克隆进缺乏启动子而只含报告基因ｌａｃＺ的质粒ｐＣＢ２６７中．凝胶滞留和启动报告基因表达的实验证明了ＣＳ３亚基结构基因具有自身的启动子（Ｐｓ）．将该启动子上游区域不同长度的核苷酸片段克隆进ｐＣＢ２６７中,报告基因表达结果表明ＣＳ３结构基因的表达受其上游区域的抑制．核苷酸序列分析发现,在Ｐｓ－３５区上游５５０ｂｐ和８４０ｂｐ处各存在一个富Ａ－Ｔ簇．结合原核启动子的一般作用规律推知,ＣＳ３的表达可能受ＤＮＡ结合蛋白型的正向调节因子的作用．用ＣＦＡ／１菌毛抗原基因的正向调节基因ｃｆａＤ对ＣＳ３基因进行的互补表达试验表明ｃｆａＤ基因不仅可消除上游区对Ｐｓ的抑制,而且可大幅度地提高Ｐｓ的启动能力．在分析表达调控的基础上获得ＣＳ３重组高效表达．同时提出了其表达调控模型．     

Ⅲ型中国株HCVE2/NS1基因与已知分离株的同源性比较

利用逆转录套式ＰＣＲ扩增Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因片段,将其克隆到ｐｃＤＮＡ３载体上．采用双脱氧链终止法测定插入片段的核苷酸序列．并与已知分离株的相应区域进行同源性比较．首次克隆出Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因（ＨＣ－Ｗ１４）,其核苷酸序列与Ⅲ型日本株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｊ６）该区域同源性为８８．３７％,其推定的氨基酸同源性为８９．２９％．而与已知的非Ⅲ型株ＨＣＶ该区域相比,核苷酸及氨基酸的同源性均相对较低．Ⅲ型中国株ＨＣＶ与Ⅱ型中国株ＨＣＶ在Ｅ２／ＮＳ１区域有较大的变异,揭示研制我国的ＨＣＶ疫苗应该考虑这种基因型之间的变异性．     

中国丙型肝炎患者中发现新的丙型肝炎病毒核苷酸序列

应用ＲＴ－ＰＣＲ和ＤＮＡ克隆重且技术从中国云南地区丙型肝炎患者血清中克隆到３个丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５?端非编码区（５’ＮＣＲ）核苷酸序列。这３个序列分别来自３个不同的再型肝炎患者。与国内外已发表的ＨＣＶ原型株同源序列比较研究发现,这３个ＨＣＶ５’ＮＣＲ序列中分别存在部分核苷酸序列的缺失或出现插入重复。在ＹＳ２２５－１ ５’ＮＣＲ序列－１５５￣－１７４位之间,有１８个核苷酸序列缺失;在ＹＳ２０３－     

水稻黄矮病毒基因2的核苷酸序列

从水稻黄矮病毒基因组的ｃＤＮＡ文库中,获得了包含邻接核衣壳蛋白基因的基因２的克隆,并测定了其核苷酸序列。ＲＹＳＶ基因２的５‘端起始序列推测为５’ＡＡＣＡＣ－３‘,该起始序列与ＲＹＳＶ其他基因及其他弹状病毒基因的５’端起始序列高度同源。     

猪瘟病毒糖蛋白E0基因的克隆及及表达研究

用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增分别获得了中国猪瘟病毒强毒石门株和兔化弱毒株糖蛋白Ｅ０基因ｃＤＮＡ,并克隆到ｐＧＥＭ Ｔ载体中测定其核苷酸序列和推导出其对应氨基酸序列,结果表明这两个毒 间的Ｅ０基因核苷酸序列同源性为９５．３％,氨基酸序列同源性为９４％,有１４个殖基的差异;与几个代表毒株ＡＬＤ株、ＧＰＥ株、Ｂｒｅｓｃｉａ株、Ａｌｆｏｒｔ株和国外测得的兔化弱毒Ｃ株相应序列进行比较,所测石门病毒核苷酸序列与上述     

鸡传染性法氏囊病病毒内蒙古毒株VP2基因的克隆和序列分析

以鸡传染性法氏囊病病毒内蒙古毒株（ＩＢＤＶ-ＮＭ）ｄｓＲＮＡ为模板,用ＲＴ-ＰＣＲ法扩增其主要寄主保护抗原ＶＰ２基因的全长ｃＤＮＡ,克隆于ｐＵＣ１９的ＸｂａＩ／ＫｐｎＩ位点,进行了全序列分析。序列比较发现ＩＢＤＶ-ＮＭ毒株ＶＰ２基因与已报道的其它７个ＩＢＤＶＣＪ８０１ｂｋｆ、Ｃｕ１、ＰＢＧ９８、５２／７０、００２—７３、ＳＴＣ及ＶａｒｉａｎｔＥ毒株之间高度同源,其核苷酸序列的同源率为９１.６％～９６．２％,推测的氨基酸序列的同源率为９６.２％～９８．６％。ＩＢＤＶ-ＮＭ毒株ＶＰ２高变异区的第一个亲水区氨基酸序列与ＣＪ８０１ｂｋｆ、Ｃｕ１、ＰＢＧ９８、５２／７０、ＳＴＣ、００２—７３比较,有一个氨基酸差异,第二个亲水区氨基酸序列与上述６个毒株完全相同。而与ＶａｒｉａｎｔＥ比较,两个亲水区内各有两个氨基酸差异。此外,ＩＢＤＶ-ＮＭ毒株ＶＰ２具有强毒株所特有的７肽保守区：ＳＷＳＡＳＧＳ。这些结果表明,ＩＢＤＶ-ＮＭ毒株为标准血清Ⅰ型ＩＢＤＶ强毒株。     

鸡马立克氏病病毒B抗原片段在大肠杆菌中表达

鸡马立克氏病病毒ＢａｍＨＩ基因文库Ｉ３质粒中含有编码Ｂ抗原膜外Ｄｏｍａｉｎ的ＤＮＡ序列。经ＳｃａＩ和ＳｐｈＩ双酶酶解Ｉ３质粒,分离获得７６４ｂｐＤＮＡ片段,并克隆进Ｍ１３ｍｐ１９中。ＤＮＡ序列测定分析表明克隆片段为ＭＤＶ－Ｂ抗原基因的４９４－１２５８ｂｐ部分序列。进一步分离ＮｃｏＩ－ＨｉｎｄＩＩＩ部分基因片（５３０ｂｐ）,克隆于ＰＬＰｒｏｍｏｔｅｒ控制下的含有修饰型ｃＩｔｓ８５７基因的表达载体中,     

人分裂细胞核抗原基因片段的筛选、测序及对启动子的分析

经６．６×１０５个克隆筛选,从装在λ噬菌体载体Ｃｈａｒｏｎ３０中的人基因库中筛选到了一个含人分裂细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因的克隆。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析插入基因长约１４ｋｂ,有较长的５＇上游区,但３＇端缺少一部分。经亚克隆和测序已确定从５＇上游１２６３ｂｐ到３＇端与λ载体接点共４９６９ｂｐＰＣＮＡ基因片段的核苷酸序列。将ＰＣＮＡ基因启动子核苷酸序列与ＤＮＡ聚合酶α,拓扑异构酶Ⅱα,胸苷酸激酶基因的启动子进行比较有３０％以上同源性,具有“看家基因”特征。在转录起始点的５＇上游几百ｂｐ的范围内都有与ＣＡＴ,ＳＰ１,Ｅ２Ｆ,ＮＦＨＢ,Ｏｃｔ１和ＡＴＦ等转录因子的结合位点相似的核苷酸序列。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

Shapes of curves of pH-dependence of reactions

A simple case is considered in which the rate of a two-step reaction depends on pH because the intermediate formed in the first step has to gain (or lose) a proton before it can react in the second step, and in which the rate-determining step therefore changes with pH. The curves of reaction rate against pH are shown to be symmetrical, and the sharpest peak possible has a width at half its height of 1.53pH units, i.e. of 2log(3+2 radical2). Any particular curve for this situation proves to be identical with a curve that could be generated for the pH-dependence of a single-step reaction in which the rate is proportional to the concentration of a particular ionic form of a reactant. Curves for the latter situation, however, can have forms impossible for the former case in which the rate-determining step changes, but only if the protonations that activate and deactivate the reactant are co-operative. The peak can then become even sharper, and its width at half its height can fall to 1.14pH units, i.e. to 2log(2+ radical3).