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共有20条相似文献,以下是第1-20项 搜索用时 312 毫秒

1.  两株真养产碱杆菌部分基因的克隆与序列分析  
   姚四新  赵淑秋  李学斌  王丽荣  王宪文  陈仕钧  张兆沛  王青  刘兴友  刘金华《生物技术通报》,2011年第4期
   采用随机引物PCR技术从新建细胞培养室空气中获得两段长度414 bp及450 bp的片段.通过克隆测序及序列分析,结果表明,所测序列与真养产碱杆菌主要参考菌株的同源性分别高迭79%-83%及79%-84%,由其推导的氨基酸序列与真养产碱杆菌主要参考菌株的同源性高达86.4%-89.1%,由两分离菌株所获得基因片段推导的氨基酸序列之间的同源性高达98.1%,从而确定所分离两菌株为真养产碱杆菌不同亚型的菌株.    

2.  鸡传染性支气管炎病毒ZZ2004分离株3a、3b及E基因的序列测定与分析  
   姚四新  王宪文  周晓丽  刘兴友  刘金华《生物技术通报》,2010年第6期
   采用随机引物PCR技术从具有腹泻、呼吸道症状及肾脏病变的肉鸡及无明显症状但生长迟缓的鸭体内获得一段长1 171 bp的片段,将此片段克隆入pMD18-T载体,测序后将序列用网上的BLAST软件和DNASTAR软件进行分析,结果表明所测序列与IBV主要参考毒株的同源率为82.0%-94.4%,与国内主要毒株CK/CH/LGD/04III、CK/CH/LGD/04II、chicken/JS/YZ07/2008、CK/CH/LSC/99I、SAIBK的同源率较高,达92.4%-94.4%,与国外毒株M41、H120、Beaudette、IBV 4/91的同源性较低达85.2%-87.9%,从而确定所分离毒株ZZ2004为肾型传染性支气管炎病毒.    

3.  一株耐碱Mn-SOD高产细菌的分离、基因克隆及序列分析  
   孟鑫  阚国仕  刘剑利  王晓丹  陈红漫《中国生物工程杂志》,2007年第27卷第5期
   首次从长白山温泉土中筛选得到了一株高产耐碱SOD的细菌,通过抑制剂试验确定了该菌所产SOD类型为Mn-SOD。通过形态特征、生理生化特征及16SrDNA基因序列分析,与芽孢杆菌Bacillus sp.MO6同源性高达100%,与地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis同源性为99%。根据地衣芽孢杆菌Mn-SOD序列,并结合GenBank中已发表的多种细菌Mn-SOD基因保守区,分别设计引物,PCR扩增获得600bp的Mn-SOD全基因序列和430bp的核心片段,克隆sodA全基因序列,构建重组质粒pMD18-SOD。    

4.  真养产碱杆菌112R4酰亚胺酶基因的克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达  被引次数:5
   王宇 张英姿 丁久元 刘阳剑 王绛 余志华《微生物学报》,2002年第42卷第2期
   筛选到一株具海因水解活力的微生物,经鉴定后命名为真养产碱杆菌112R4。该菌能水解海因、二氢尿嘧啶和琥珀酰亚胺,且对琥珀酰亚胺活力最高,但不水解5单取代海因和5,5’双取代海因,因而被确定为含有酰亚胺酶。真养产碱杆菌112R4能在以琥珀酰亚胺为唯一碳、氮源的培养基上生长,表明该菌中存在琥珀酰亚胺完整的转化途径。从112R4基因组DNA出发,用鸟枪法克隆了一个6kb的与环酰亚胺水解相关的DNA片段;进一步亚克隆得到了带酰亚胺酶基因的2kb的DNA片段,并进行了序列测定。缺失分析确定了一个876bp的ORF为真养产碱杆菌112R4的酰亚胺酶基因,推测编码一个291个氨基酸的多肽,这是第一次报道微生物酰亚胺酶的核酸和蛋白序列。推测的氨基酸序列在蛋白数据库中进行了比较,结果表明,酰亚胺酶与已知的环酰胺酶没有明显的同源性,也不属于氨酰水解酶蛋白超家族,因而被分类为一种新的环酰胺酶。真养产碱杆菌112R4的酰亚胺酶与芽生杆菌A17p4的酰亚胺酶N端的20个氨基酸有较高的同源性,一致性为60%,与多糖脱乙酰酶保守序列也部分同源,一致性为14%。带有酰亚胺酶基因的重组质粒在大肠杆菌中得到表达,在lac启动子控制下,使用1mmol/L IPTG诱导5h,酰亚胺酶活力达到3200U/L,为供体菌真养产碱杆菌112R4的7倍。    

5.  AP—PCR结合进化树分析在幽门螺杆菌地域起源特征研究中的价值  
   刘炯  王忠灿  金鑫鑫  汪芳裕  陈春燕  王震凯  朱乐明  陆恒  施慧《中国微生态学杂志》,2012年第3期
   目的探讨随机引物PCR(Arbitrary primerPCR,AP—PCR)结合克隆测序及生物信息学分析等方法在研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hpylori)菌株地域起源特征中的价值和意义。方法针对临床分离培养的Hpylori菌株的基因组DNA,采用一组10nt的寡核苷酸引物进行随机PCR扩增,选取相对保守的片段进行回收、克隆及测序,测序的基因序列提交GenBank数据库进行序列相似性的BLAST比对,收集BLAST比对得到的同源性较高不同地域来源螺杆菌的对应序列,用ClustalX软件进行排序,采用Mega4.0软件中的邻位相连法(Neighbor-joining)和最大简约法(Maximum—parsimony)进行进化树分析。结果随机引物扩增及筛选克隆测序得到的基因产物为NADH脱氢酶G和H亚单位的部分编码序列,与27株不同地域来源H.pylori及1株猫科动物来源螺杆菌菌株的同源性均高达90%以上,表明Hpylori中NADH脱氢酶基因序列为保守结构,进化树分析显示:采用AP.PCR方法得到的Hpylori临床菌株的基因序列,显示出东亚菌株来源的遗传特征,与具有东亚菌株特征的美洲秘鲁Sat464和Shi470菌株、韩国的52、51菌株、日本的1757菌株遗传距离较近,与南亚、欧洲菌株距离较远,与非洲的SouthAffica7菌株和猫科动物来源的Sheeba菌株的遗传距离最远。结论不仅某些特殊基因可以反映地域差异,随机定位相对保守的基因片段同样可以反映Hpylori的地域起源特征。AP—PCR、测序等技术方法与进化树分析相结合是探讨Hpylori地域起源特征的一种更为便捷有效的新方法。    

6.  兼性厌氧纤维素菌的分离与系统发育分析  
   蒋芳  赵婷  刘成君  卢涛  张和民《微生物学通报》,2006年第33卷第3期
   从四川卧龙中国保护大熊猫研究中心提供的野外放归大熊猫“祥祥”的粪样中,分离到一株产纤维素酶的兼性厌氧菌株。该菌株经初步生理生化鉴定为肠杆菌科沙雷氏菌(Serratia),命名为Serratia JF-1116。用PCR技术扩增了该菌的16S rDNA全序列,并对其进行了克隆和测序,对该序列在GenBank中的BLAST结果表明,所有与该序列高度同源的序列均为肠杆菌科的16SrDNA基因序列,选取同源性高的菌株的16SrDNA基因序列进行系统发育分析,菌株与3株Serratia聚类在一起。    

7.  兼性厌氧纤维素菌的分离与系统发育分析*  
   蒋芳   赵婷   刘成君   卢涛   张和民  《微生物学通报》,2006年第33卷第3期
   从四川卧龙中国保护大熊猫研究中心提供的野外放归大熊猫“祥祥”的粪样中,分离到一株产纤维素酶的兼性厌氧菌株。该菌株经初步生理生化鉴定为肠杆菌科沙雷氏菌(Serratia),命名为Serratia JF-1116。用PCR技术扩增了该菌的16S rDNA全序列,并对其进行了克隆和测序,对该序列在GenBank中的BLAST结果表明,所有与该序列高度同源的序列均为肠杆菌科的16S rDNA基因序列,选取同源性高的菌株的16S rDNA基因序列进行系统发育分析,菌株与3株Serr    

8.  猪圆环病毒2型分离毒株全基因组的克隆及序列分析  被引次数:9
   芦银华  华修国  陈德胜  黄伟坚  戴亚斌  谈国蕾  陈溥言《病毒学报》,2003年第19卷第1期
   根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)基因序列,设计两对特异性引物,用PCR方法从接种疑似PMWS仔猪病料的细胞中分段扩增2个分离毒株全基因组。将扩增片段克隆入pGEM-T easy载体,筛选获得含有相应片段的阳性重组质粒。对质粒中的插入片段进行测序拼接,获得2株均为1768bp的全基因组序列。应用DNA star序列分析软件,对所测PCV-2序列与GenBank中的国内外PCV毒株进行同源性比较,并绘制系统发生树,结果发现:所测两毒株之间的核苷酸序列同源性极高,可达99.8%,亲缘关系密切;与PCV-2参考毒株的同源性介于95.3%-99.7%之间,其中与美国的一株PCV-2同源性最高,分别为99.5%和99.7%,亲缘关系很近;与国内两分离株同源性分别为96.4%和98.8%-98.9%;与PCV-1参考毒株同源性仅为77.1%-77.5%。    

9.  松嫩平原盐碱地中耐(嗜)盐菌的生物多样性  
   潘媛媛  黄海鹏  孟婧  肖鸿禹  李成  孟琳  洪闪  刘贺男  王雪枫  姜巨全《微生物学报》,2012年第52卷第10期
   【目的】分离纯化松嫩平原盐碱地中可培养的耐盐菌和嗜盐菌,并分析其生物多样性。【方法】采用纯培养法和定向富集法从该地区盐碱土样中分离耐盐菌和嗜盐菌,然后通过16S rRNA基因同源性比对鉴定所分离细菌的系统发育学地位,从而获取松嫩平原盐碱地中耐盐菌和嗜盐菌的多样性信息。【结果】共分离到细菌40株,分属于细菌域中3个门(Actinobacteria,Firmicutes,γ-Proteobacteria)、8个科、16个属、34个种。其中多数菌株属于厚壁菌门(Firmicutes),最优势属为葡球菌属(Staphylococcus)(8株,占总菌株的20%),其次依次为盐单胞菌属(Halomonas)(5株,12.5%)、芽胞杆菌属(Bacillus)(4株,10%)、大洋芽胞杆菌属(Oceanbacillus)(4株,10%)、库克菌属(Kocuria)(4株,10%)和假单胞菌属(Pseudomonas)(3株,7.5%)等。其中9株细菌的16S rRNA基因序列与最近缘种的同源性在97.2%-99.0%之间,可能为新种。菌株耐盐能力主要在5%-10%之间,其中62.5%的菌株为耐盐菌,其余则为中度嗜盐菌。所有菌株的耐碱能力在pH 9-12之间,其中60%的菌株耐碱能力则高达pH 12,除两株为嗜碱菌,其余均为耐碱菌。【结论】研究结果表明,松嫩平原盐碱地中耐盐菌与嗜盐菌种群丰富,主要以葡萄球菌和盐单胞菌为主,菌株不仅耐盐能力高而且耐碱能力也高,并且该地区可能含有丰富的耐盐菌和嗜盐菌的新物种。    

10.  一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法  
   黄威  邢益平  严有德  严玉娟  艾月梅《现代生物医学进展》,2014年第29期
   目的:针对目前结核性疾病实验室诊断的局限性,探索一种更为敏感和特异的结核分枝杆菌DNA检测新方法。方法:选取10株江苏地区流行的结核分支杆菌(MTB)菌株,选取临床其他常见菌株及分枝杆菌菌株作为对照组,分别提取DNA作为随机引物的模板。参考国内、外文献设计12条随机引物,并分别对MTB及对照菌株进行单个引物随机扩增,2%的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分离并切胶纯化,通过TA克隆将纯化片段连接到质粒pEASYTM-T5 Zero并进行测序,通过BLAST-nr比对验证是否为MTB DNA片段。按照所确定的MTB片段序列,在其内部设计、合成一对特异性引物。用此特异性引物扩增对应的随机引物扩增产物,获得MTB特异性条带图谱。并将该方法检测的敏感性和特异性与临床上常用的real-time PCR进行比较。结果:经BLAST-nr比对,随机引物IS986F,S535及IS986R扩增的条带与MTB DNA有高度同源性(均为99%)。随机引物IS986F、S535和IS986R分别联合其特异性引物可以检测稀释105倍、105倍和103倍的MTB DNA,其特异性分别为100%、90%和80%。常规real-time PCR可检测出稀释104倍的MTB DNA。结论:随机引物IS986F联合其特异性引物检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性优于S535、IS986R两组,特异性为100%,且灵敏度优于常规real-time PCR法。    

11.  一株产蛋白酶嗜碱菌株的分离、鉴定及酶学特性  被引次数:4
   郝建国  薛燕芬  马延和《微生物学报》,2010年第50卷第1期
   摘要:【目的】筛选产蛋白酶嗜碱菌并对其进行鉴定和特性分析。【方法】利用碱性脱脂牛奶培养基分离纯化产蛋白酶嗜碱菌,通过形态特征、生理生化、16S rRNA基因序列分析以及DNA–DNA杂交实验确定菌株的分类地位,利用酪蛋白水解法分析所产蛋白酶的pH和温度作用范围、稳定性和耐氧化剂能力。【结果】从我国西藏盐碱湖样品中分离到一株产碱性蛋白酶的菌株ZL223,该菌株为革兰氏阳性菌,最适生长温度为37 oC,最适生长pH 9.0,16S rRNA基因序列分析显示,菌株ZL223与假强芽孢杆菌Bacillus pseudofirmus OF4亲缘关系最近,16S rRNA基因序列相似性为98.6%,DNA–DNA杂交结果显示与B. pseudofirmus OF4同源性为86%。菌株ZL223产生的蛋白酶作用的最适pH为12.0,最适温度为40 oC。【结论】结合生理生化指标测定的结果,鉴定菌株为假强芽孢杆菌ZL223(B. pseudofirmus ZL223)。该菌株产生的碱性蛋白酶具有较高的pH适应性,值得进一步研究。    

12.  一株碱性纤维素酶产生菌的分离、鉴定及酶谱分析  被引次数:1
   郭成栓  欧阳蒲月  崔堂兵  郭勇《生物技术》,2011年第21卷第1期
   目的:从土样中分离株碱性纤维素酶高产菌株.方法:利用CMC平板初筛,然后利用摇瓶复筛,筛选酶活力高的菌株,对分离出的一株高产菌株进行了鉴定并对其所产酶进行了酶谱分析.结果:获得一株碱性纤维素酶高产菌株H12,酶活力达到1.96U/ml.结论:该菌株呈长杆状、革兰氏染色为阳性、产芽孢;16S rDNA基因序列为1 419bp,与短小芽孢杆菌16S rDNA基因序列具有最高的同源性,基于16S rDNA基因序列的同源性分析以及系统发育分析等方面的多相分类研究,鉴定菌株H12为为短小芽孢杆菌;碱性纤维素酶的酶谱分析只有一条水解条带,酶分子量在75kD左右.    

13.  副溶血弧菌海产品分离株tdh基因及其临近区域结构分析  被引次数:1
   王淑娜  Khamphouth VONGXAY  沈飚  周向阳  金培婕  陈健舜  方维焕《微生物学报》,2009年第49卷第12期
   摘要:【目的】初步探索副溶血弧菌海产品分离株tdh基因区域的结构特征。【方法】采用长距离PCR和基因步移技术进行tdh基因侧翼序列扩增,测序验证后拼接成疑似毒力基因片段,将所获序列与NCBI数据库进行比较,初步明确tdh基因侧翼序列的结构与功能。【结果】海产品分离株ZS34与参考菌株 RIMD2210633的tdh基因区域(VPA1310-VPA1327)结构基本一致,核苷酸同源性达98.3%;而FJ14与WZ64株基因组中的tdh基因均与tdh3的同源性最高,在基因组中的位置也不同于ZS34株和参考菌株    

14.  芽胞杆菌β-甘露聚糖酶基因部分序列的克隆及相似性分析  
   李雅楠  孟昆  杨培龙  王亚茹  姚斌《微生物学通报》,2007年第34卷第1期
   通过平板筛选,从28株芽孢杆菌中筛选出16株产β-甘露聚糖酶的菌株。利用一对兼并引物,通过PCR分别从不同来源芽孢杆菌基因组DNA上扩增出β-甘露聚糖酶编码基因的一段保守序列。将基因片段测序并同已发表的β-甘露聚糖酶基因进行相似性分析,并构建进化树。结果表明:克隆到的β-甘露聚糖酶部分基因序列与报道的相比,其最高同源性在62%~98%之间。环形芽孢杆菌β-甘露聚糖酶编码基因间相似性较低,枯草芽孢杆菌及其它芽孢杆菌的β-甘露聚糖酶编码基因间相似性较高。    

15.  猪瘟病毒石门株NS4A基因的克隆,测序及分析  
   黄茜华  张楚俞《微生物学杂志》,1999年第19卷第2期
   采用RT-PCR技术,利用一对引物,从感染猪血中成功扩增了猪瘟病毒强毒石门株NS4A基因,片段大小为757bp,与预期大小一致。克隆后经酶切鉴定,自动化测序。序列比较表明,该基因为最保守的基因之一,其中石门株序列与ALD,GPE,HCLV及Brescia株均有很高的同源性,由其推导的氨基酸的同源性高达100%。仅与Alfort株的同源性消低。对石门株序列与同属的BVDVSD-1株和NADL株序列进行了比较。    

16.  phbB,phbC基因克隆,序列分析及植物表达载体的构建  被引次数:11
   谢安勇 崔晓江《Acta Botanica Sinica》,1995年第37卷第8期
   利用聚合酶链式反应技术,从真养产碱杆菌Alcaligenes eutrophus H16染色体DNA中的主增并克隆了调控聚-β-羧基丁酸生物合成的两个关键酶基因;依赖NADPH的乙酰乙酰CoA还原酶基因和PHB合成酶基因。限制性内切酶图谱和核苷酸序列分析证实了克隆结果,并表明所克隆的基因与国外报道的有很高的同源性。    

17.  枯草芽孢杆菌抗脯氨酸结构类似物突变株的筛选及突变株proBA基因的克隆和序列分析  被引次数:3
   苗丽霞  曹军卫  刘瑞杰  王友亮  曾永辉《遗传学报》,2002年第29卷第12期
   利用亚硝基胍对枯草芽孢杆菌93151进行诱变处理,获得了耐NaCl浓度达14%的突变株,同时发现该突变株也是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株,其胞内自由脯氨酸的含量随着盐浓度的提高显著增加,说明其对渗透压的耐受能力与胞内自由脯氨酸的含量紧密相关。利用PCR方法克隆突变株的proBA基因,得到一个约2.3kb的DNA片段,序列分析表明该片段含有一完整的proB基因和部分proA基因,与野生菌株的proB基因相比,突变株proB基因中有3个碱基发生了改变,其中一个碱基的变化(从起始密码子开始第781位由T→A)导致了一个氨基酸发生改变(Ser→Thr),另外两个碱基变化为沉默位点突变。将该proB基因转入大肠杆菌脯氨酸营养缺陷型菌株,能够与其功能互补。同时对部分proA基因序列分析发现,其与proB基因头尾重叠。在proA基因起始密码子上游第14个碱基处有一个类似于SD的序列,其所编码的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌168的同源性为77%。    

18.  一株嗜酸兼性异养菌的分离和系统发育分析  
   张燕飞  张晓健  王亿平  杨宇  柳建设《现代生物医学进展》,2007年第7卷第12期
   从广东大宝山矿区硫化矿酸性矿坑水中分离获得一株嗜酸兼性异养菌DBS4-1,对该菌株进行了形态、生理生化特性研究及16S rRNA序列分析。分析结果显示:该菌株为革兰氏阴性细菌,球状,菌体直径约为4.0±0.5μm;该菌株兼性异养,具有广泛的底物利用特性,可以利用有机物进行异养生长,同时在自养环境中,还可以利用三价铁、单质硫获得能量进行生长,最适生长温度为30℃左右,最适生长pH约为3.5;该菌16S rRNA序列与Thiobacillus acidophilus(D86511)同源性高达99%。结果表明DBS4-1属于嗜酸硫杆菌属(Acidiphilium sp.),嗜酸种(acidophilum)。    

19.  新疆盐碱地土壤耐盐芽胞杆菌的分离和鉴定  
   许珂  陈红  刘志千  王三矫  陆甜甜  薛强  程国军《生物资源》,2019年第2期
   为了开发利用新疆盐碱地的耐盐菌资源,从该盐碱地土样中分离并纯化出11株耐盐能力较高的菌株,并从形态特征和16S rDNA序列分析对这些菌株进行鉴定。结果表明,11个菌株均为产芽胞,革兰氏阳性细菌。通过对这11个菌株的16S rDNA进行测序和同源性比较,发现它们与芽胞杆菌的相似性均达到99%。因此,这些菌株被鉴定为Bacillus sp.。11株菌均不能在NaCl质量浓度大于220 g/L条件下生长,属于中度耐盐菌株。耐盐基因的PCR扩增结果表明,只有NYT21、23、25、27、29等5株菌株含有pro耐盐基因,暗示这些耐盐芽胞杆菌具有不同的耐盐机制。    

20.  斑点叉尾鮰一株致病菌的分离鉴定及系统发育分析  
   耿毅  汪开毓  陈德芳  黄小丽《微生物学报》,2006年第46卷第4期
   从发生急性流行性传染病的斑点叉尾肝、肾分离到一高致病性的菌株(CCF00024),经人工感染实验证实其为该病的病原菌。对该菌的形态、生理生化及16S rDNA序列分析结果表明,其为非发酵型,严格需氧,革兰氏阴性杆菌,极生多鞭毛,对除麦芽糖和甘露糖以外的多种糖类不能利用产酸,氧化酶阴性,DNA酶、蛋白酶、脲酶、赖氨酸脱羧酶阳性,MR阴性。在以该菌16S rDNA序列(GenBank登录号AY970826)和GenBank及RDP数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树中,分离菌CCF00024与嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)聚在一簇,特别是与S.maltophiliaM5-1的同源性最高,其序列相似性达99.6%,结合形态和生理生化特点将其鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。    

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