高效液相色谱对酶法合成头孢力新过程的解析

酶法合成头孢力新反应过程有四种组分(苯甘氨酸、苯甘氨酸甲酯、7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸和头孢力新),应用日立2632阴离子交换柱和0.05M NaCl溶于6.25×10~(-3)M NH_4Cl作淋洗液,在不到一小时内得到良好的分离。本文报道用高效液相色谱方法对头孢力新反应过程的四种组分进行快速准确的定量。     

D-(-)-苯甘氨酸酶法制造工艺的研究

D-(-)-苯甘氨酸是半合成抗菌素氨苄青霉素及先锋四号的重要侧链,制造工艺有化学法和酶法。酶法制造工艺是八十年代新工艺,具有工艺简便、收率较高、生产周期短、原材料成本低等特点。为了探讨D-(-)-苯甘氨酸酶法制造工艺的可行性,通过筛选获得了D-乙内酰脲水解酶产生菌B—BM—17,并进行了发酵、转化、水解等一系列的制造工艺的研究,取得了较好结果。以D。L-苯海因为原料,B—BM—17菌体转化成氨基甲酰-D-苯甘氨酸,再经亚硝酸水解制备D-(-)苯甘氨酸,30克投料规模,连批平均收率为69.1％(以苯甲醛计其收率为62.23％)。周期为24小时(发酵15小时转化5小时水解1小时)。以上述收率计算制备每公斤D-(-)苯甘氨酸的原材料成本不超过30元。     

雌二醇受体在兔子宫内膜染色质蛋白中的分布

本文利用不连续HAP层析法解离兔子宫内膜染色质蛋白,共分离出四个主要组分:(1)疏松结合的非组蛋白组分(0.25M NaCl解离的),(2)组蛋白组分(2M NaCl解离的),(3)紧密结合的非组蛋白组分(2M NaCl/5M尿素解离的)和(4)很紧密结合的非组蛋白组分(5M尿素/4M盐酸胍解离的)。在离体条件下使部分纯化的雌二醇受体复合物(RE)与兔子宫内膜染色质结合,然后进行羟磷灰石层析,用四种溶剂解离四种染色质蛋白组分,此时RE也随同被解离下来,后者与染色质蛋白第1、2、3和4组分结合的相对结合量分别为0.33±0.10,0.10±0.03,0.32±0.03和0.21±0.05,表明RE主要与非组蛋白组分结合,占86%。当己烯雌酚受体复合物存在时,RE与染色质蛋白的结合受到抑制。又初步比较了雌三醇和雌二醇受体复合物与染色质蛋白的结合量,观察到雌三醇受体复合物的结合量小得多,这种现象符合于雌三醇作为一种较弱的雌激素的特性。     

D-(-)-苯甘氨酸酶法制造工艺研究

<正> D-(-)-苯甘氨酸为半合成抗生素中用量最大的侧链化合物,其制造工艺有化学法和酶法两种。酶法工艺是八十年代新工艺,具有工艺简便、收率较高、生产周期短、原材料成本低等特点,尤为重要的是一酶多用,开发了制造中性D-氮基酸的工艺路线。为了研究酶法制造D-(-)-苯甘氨酸工艺,我们在筛选获得了D-乙内酰脲酶产生菌巨大芽孢杆菌SIPI-     

红纹黄单胞菌α-氨基酸酯水解酶的分离纯化及酶学性质

【目的】从红纹黄单胞菌中分离纯化了胞内α-氨基酸酯水解酶(AEH),并进行了酶学性质研究。【方法】采用乙酸丁酯破碎细胞,并相继用磷酸钙凝胶沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE Sephadex A-50阴离子交换处理、CM Cellulose 52离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析纯化得到了电泳纯α-氨基酸酯水解酶,并研究了此酶的酶学性质。【结果】SDS-PAGE显示α-氨基酸酯水解酶的亚基分子量为70 kDa。酶促合成头孢克洛的最适pH为6.8,最适温度为42℃,在pH5.0-8.0和35℃以下,酶保持了良好的稳定性。Mn2+和Ca2+对酶活有一定的促进作用,Cu2+、Fe2+及高浓度的丙酮对酶活有强的抑制作用。AEH催化D-苯甘氨酸甲酯、D-对羟基苯甘氨酸甲酯和头孢克洛水解反应的kcat/Km分别为123.7±3.7 mmol-1.s-1.L、2.9±0.6 mmol-1.s-1.L和101.3±2.1 mmol-1.s-1.L,AEH对D-苯甘氨酸甲酯的催化效率最高。AEH催化双底物反应的机制为乒乓机制,催化合成头孢克洛的kcat为547.3±38.2 s-1。【结论】有关红纹黄单胞菌α-氨基酸酯水解酶的酶学性质研究相对较少,本文的研究将为该酶催化合成β-内酰胺类抗生素的工业化应用提供重要参数。     

大肠杆菌高效合成L-苯甘氨酸的研究进展

自然界存在着多种氨基酸,除用于蛋白质合成的20种外,大量用于合成具有生物活性的物质,广泛应用于食品、医药等多个领域。其中,非天然芳香族氨基酸L-苯甘氨酸作为一种重要的组成单元广泛的应用于盘尼西林、维吉霉素S、原始霉素I等β-内酰胺类抗生素的生物合成当中。目前L-苯甘氨酸主要通过化学法合成,但该方法合成收率低、污染大,且不易得到单一手性的化合物。由于生物合成L-苯甘氨酸具有反应条件温和、产物立体选择性好的优势,因此受到了广泛的关注。通过对L-苯甘氨酸两条生物合成途径的解析,合成所需相关酶的筛选及辅因子平衡再生等,逐步形成了以苯乙酮酸、扁桃酸和L-苯丙氨酸为底物的合成线路。主要对L-苯甘氨酸的生物合成途径及生物合成策略展开综述,为研究者提供优化方向,以期为高效工业化生物合成L-苯甘氨酸提供理论参考。     

湿地松无性系松脂组分分析及评价

为从湿地松种子园现有的速生材用无性系中选择产脂力强、松脂品质高的优良无性系,并高效利用湿地松良种资源。该研究以湿地松第一代种子园内36个无性系为材料,测定其树脂质量流速以及胸径生长量,进一步采用GC-MS分析其松脂组分,并基于上述指标利用相关性分析、聚类分析对参试的36个无性系进行综合评价。结果表明：(1)共鉴别出了21种松脂成分,包括8种单萜成分和13种二萜成分。(2)相关性分析显示,树脂质量流速(RMR)与单萜含量显著正相关,与枞酸型树脂酸呈弱的负相关,与海松酸型树脂酸无明显关联。(3)从松节油含量、树脂质量流速、枞酸型树脂酸、海松酸型树脂酸4个维度对参试无性系进行聚类分析,可将36个无性系分为三大类,并且各类型间差异显著,第1类的表现要远好于其他两类。(4)在产脂力高的基础上,6-44、4-11-1、1-38、3-64四个无性系单萜含量高,4-11-1、3-64、2-0420、3-468四个无性系海松酸型树脂酸含量高,而无性系2-173枞酸型树脂酸含量较高。该研究定性分析了湿地松的松脂组分,定量评估了36个无性系的产脂力与组分含量,为湿地松脂用无性系的选择奠定了基础。     

苯甘氨酸氨基转移酶基因hpgt的原核优化表达与酶动力学特性研究

苯甘氨酸氨基转移酶(4-Hydroxyphenylglycine aminotransferase)是假单胞菌所产生的一种能够合成D-苯甘氨酸的重要转氨酶。利用密码子优化技术,合成苯甘氨酸转移酶基因。构建原核重组质粒pCDF-hpgt,转入感受态细胞E.coli BL21(DE3),优化表达His-HpgT蛋白。利用Ni-NTA柱纯化技术获得高纯度的His-HpgT融合蛋白。分别测定融合蛋白在正反向反应中的酶活力单位及最佳的反应温度、pH值及其他动力学参数,并对该酶特性作相关的机理分析。测定结果表明,正向反应和反向反应的酶比活力分别为749mU/mg、2 257mU/mg,此酶分解苯甘氨酸的能力要强于合成苯甘氨酸;正向反应的最适温度与pH分别是35℃和8.0;由米氏方程得出该酶对苯甘氨酸的亲和力远大于谷氨酸;较低浓度的苯乙醛酸即可抑制反应的进行。     

北京苜蓿花叶病毒H-10分离物的研究I．病毒的生物学测定、提纯及其理化性质

从苜蓿上经单斑分离得到H-10分离物,经生物学鉴定和电镜下形态、大小的观察以及理化性质的分析,确认为苜蓿花叶病毒(AMV)。在芸豆和豇豆上只产生局部坏死斑而无系统病状。致死温度50--55℃,l 0分钟,体外存活(室温下)12-24小时,稀释限点2×10-3一10-3,蚜虫传,等电点4．60。提纯制品在电镜下呈现五种颗粒,其宽度大致相等,约18—20nm, 但长度分别为58、45、37、29nm,第五种最小颗粒近球形,直径为18—20nm。病毒经分析超离心后出现四个主峰,其沉降常数分别为97S、87S、77S和675;经3％凝胶电泳后虽可检出16个组分,但其中四个组分是主要的。初步认为这四个组分即B M、T6和Ta。     

斜生褐孔菌多糖组分的纯化及其生物活性研究

对斜生褐孔菌子实体和菌丝体的多糖含量进行了测定,二者多糖含量分别为2.63%和2.12%。运用DEAE Sephacel和Sephadex G-200柱层析技术从子实体中纯化出B1、B2、B31和B32四种多糖组分,分别占子实体多糖总量的50.20%、32.25%、4.48%和6.61%;从菌丝体中纯化出M1、M2和M3三种多糖组分,分别占菌丝体多糖总量的48.23%、31.85%和10.91%。生物活性试验结果显示:七种纯化多糖组分的抗氧化性由强到弱依次为B1>M1>M2>B2>M3>B32>B31;B2和M2具有在体外抑制人体白血病细胞株K-562和肝癌SMMC772l细胞株生长的作用;B31、B32和M3具有降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用,而且对健康小鼠的血糖值并无影响。