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相似文献
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1.
高效、快速地将外源DNA导入根癌土壤杆菌   总被引:16,自引:0,他引:16  
室温下用50mmol/LCaCl_2处理根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)以制备感受态细胞,然后经0℃冰浴及28℃热击处理,成功地将Ti质粒中间载体(>10kb)导入了根癌土壤农杆菌中。转化效率每个活细胞可达10~(-4)~10~(-5)转化子或10~6转化子/μgDNA。探讨了该菌细胞生长状态、CaCl_2滚滚浓度、温度、液氮、热击、复苏时间以及感受态细胞于4℃或—20℃(加15%甘油)下保存时间对根癌土壤杆菌转化的影响。  相似文献   

2.
三亲交配方法分别将载有褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)呈组成型表达的nifAC的质粒pCK5和肺炎克氏杆菌(Kldosiella pneumoniae)含有nifAc和nifA—ntrc基因的质粒pcK3.pSZ36和pSZ23-CA导入根癌土壤杆菌Agrobacterium tumefaciem)C58/pGV3850,所得转移接合子的生长速率和野生型相似。在10mmol/L,NH4+浓度下,Western blotting测出A.Tumefaciens C58/pGV3850(pCK5)有固氮酶合成,乙炔还原法测定固氮酶活性恢复分别为73%.24%,11%和62%。这些结果表明,褐球固氨菌和肺炎克氏杆菌的固氮调节基因对土壤杆菌同氮基因表达有调节作用。其中.褐球固氮菌nifAc的调节功能最强(73%),其次是肺炎克氏杆菌nifA和nrrC的融合子(62%),肺炎克氏杆菌nifAc的调节功能较弱(24%。11%)。  相似文献   

3.
从我国北方8个毛白杨根癌病发病苗圃分离到根癌土壤杆菌(Agrobacterlum tume[actena)8株。经质粒型、生物型、寄主范匿和对土壤秆菌素agfocin 84和D286的敏感性测定,证明5株系nopaline质粒型,其中生物I型2株,生物|I型2株,I—II中间型1株,3株系agroplne质粒型,其中生物I型2株,生物II型1株。所有分离菌株均系宽寄主群,其中1株经回接能侵染单子叶植物美人蕉(Canna inaiea),水仙(Narcissus)和吊兰(Chlorophytum)。分离菌株中,5株nopaIine质粒型菌榫对土壤杆菌素84敏感,3株agropine质粒和3株生物I型nopali 质粒菌株对土壤杆菌素])286敏感。在温室中,合并使用两种土壤杆菌素产生菌——放射土壤杆菌(A.Radiobaccer)K84和D286的菌体悬浮液,预浸毛白杨和向目荚幼苗根部 或与致病的毛白杨根癌土壤杆菌共接种枝茎,降低根瘟病诱发率达94%以上。表明放射土壤扦菌K84和D286可以控制毛白杨根癌病。  相似文献   

4.
将IL-1023-57-PE40基因与pelB信号肽融合置于pET-20b构建分泌表达质粒pET-20b-IL-1023-57-PE40,然后将pET-20b-IL-1023-57-PE40分别转化至BL21(DE3),BL21(DE3)pLysS,Rosetta(DE3),E.coliK12TB1,ER2566中。无论是在37℃或是在26℃,亦或在培养基中添加葡萄糖的情况下,IPTG诱导后,IL-1023-57相似文献   

5.
人三叶因子3在毕赤酵母中表达条件的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
为提高人三叶因子 3 (HumanTrefoilfactor 3 ,hTFF3 )在毕赤酵母中的表达量 ,研究了转化子生长的培养条件 ,包括不同碳源对转化子生长的影响和接种量、甲醇浓度、pH值、摇瓶转速及不同诱导时间对人三叶因子 3表达的影响。结果表明转化子在生长阶段加入葡萄糖生长旺盛 ,培养 14h后OD600 就可达到 50。在 100mL生长培养基上的菌液以 1∶1接入诱导培养基时蛋白表达量最高 ;转化子在 1%的甲醇、pH60、摇瓶转速240r/min的条件下诱导4 8h ,菌体密度OD600为 15 ,目的蛋白表达量达到 20mg L。用 5L发酵罐进行了高密度发酵 ,经2%甲醇32h诱导 ,最终菌体密度OD600 达到 120 ,每升发酵液中含目的蛋白100mg。  相似文献   

6.
我国葡萄根癌土壤杆菌的生化型与质粒类型的初步研究   总被引:9,自引:3,他引:6  
从我国内蒙古、辽宁、吉林、北京、山东等地采集的49份葡萄冠瘿标本中,分离到根痛土壤杆菌(Agrobacterium tumefactens)67株,经鉴定有生化1型21株,生化II型4株,生化III型42株。葡萄根癌土壤杆菌中以生化ill型占优势。生化111型有97%、生化I型有24%的菌株能使葡萄或向日葵致瘤。鉴定了2S株生化l型和生化[I]型菌株所致冠瘿中的opines,其中有2株生化III型菌株合成nopaline,3株生化III型菌株合成精氨酸,其余菌株合成octopine。  相似文献   

7.
高兴喜  杨谦 《微生物学报》2005,45(1):129-131
根癌农杆菌介导的遗传转化系统是植物基因工程常用方法,目前已将这一转化系统应用到酵母、丝状真菌以及人类细胞的转化。利用这一转化系统,成功地实现了丝状真菌球毛壳菌(Chaetomium globosum)的遗传转化,转化率约为60~180个转化子/10.7个孢子 。通过对转化子的PCR检测和Southern 杂交分析表明,TDNA已整合进毛壳菌基因组中,而且在所检测的转化子中都是以单拷贝的形式整合,转化子都能够稳定遗传。根癌农杆菌介导的遗传转化具有转化率高、低拷贝、遗传稳定、操作简便等优点,因此有可能成为丝状真菌遗传转化和功能基因组研究的有力工具。  相似文献   

8.
耐热酵母与酿酒酵母原生质体融合的研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)396是利用甘蔗糖蜜生产酒精的生产菌株,假丝酵母(Candida sp·)C6是我们从云南温泉底泥中筛选到的一株能在45℃生长良好的耐热酵母,我们应用原生质体融合技术进行了两菌株属间融合的研究。通过亚硝基胍(NTG)诱变得到的营养缺陷型菌株396(arg)和C6(lys-),其融合频率为O.91×10-5。从检出的融合子中挑选6株进行考核、其细胞体积平均为亲株的1.3倍,DNA含量平均为亲株的1.6倍,培养特征、形态、大小和生理生化特征表现不一,特别是糖类的同化试验。除F2、F14外,其他4株可以排除异核体形成的可能性。比较了在28℃,40℃和45℃培养条件下出发亲株396、C6、直接亲株396(arg-)C6(lys-)和融合子F1、F7、F12,F13的生长曲线、基质利用率和乙醇产率等,得到一株在40℃培养条件下糖的利用率为94.3%、乙醇产量为59.7g/L的属间融合株F13。  相似文献   

9.
樱桃根癌土壤杆菌及其对土壤杆菌素84敏感性的研究   总被引:12,自引:1,他引:11  
从山东、河北、辽宁等地樱桃园的樱桃冠瘿瘤和土壤样品中分离到46株根瘤土壤杆菌。经鉴定有4株是Agrobacteriumtumefaciens(原生物型1),其余42株是A.rhizogenes(原生物型2)。这些菌株所诱导的冠瘿瘤中均合成胭脂碱(nopaline),属胭脂碱型Ti质粒的根癌土壤杆菌,并对放射土壤杆菌K84菌株所产生的土壤杆菌素84敏感。由于K84菌株对含胭脂碱Ti质粒的根癌土壤杆菌有很好的抑制效果,因此,用K84菌株防治樱桃根癌病是有应用前景的.  相似文献   

10.
张前前  胡启武  冯哲  文旻  吴琴  徐健 《生态学报》2020,40(21):7659-7667
采集鄱阳湖沉水植物区0-10 cm和10-30 cm土壤样品,通过设置2个温度(18℃和28℃)和2个水分(淹水2 cm和土柱取出水面后的实际土壤水分含量)处理组合,进行持续2年的甲烷(CH4)排放室内培养实验,以探讨不同深度土壤CH4排放对温度、水分变化的响应差异,以及温度、水分和土层对湿地土壤CH4排放的交互影响。结果表明:0-10 cm和10-30 cm土壤CH4排放速率变化范围分别为0.01-3.63 μgCH4-C kg-1d-1、0.02-1.99 μgCH4-C kg-1d-1;均值分别为0.72和0.15 μgCH4-C kg-1d-1。温度、水分和土层3因素及其交互作用均对土壤CH4排放有显著影响(P<0.01),且土层的影响最大。两水分处理下的CH4排放对温度变化的敏感性均表现为0-10 cm(Q10为1.78、3.26)高于10-30 cm土层(Q10为1.04、1.08)。CH4平均排放速率及累计排放量均表现为0-10 cm显著高于10-30 cm土层,且培养前期高于培养后期,显示基质有效性对土壤CH4排放的重要影响。  相似文献   

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