右旋糖酐40制备过程中细菌内毒素含量的影响因素

右旋糖酐40生产中分离纯化采用乙醇沉淀和超滤方法，将细菌内毒素作为分离纯化的一项指标，对影响因素进行探究，将细菌内毒素含量引入右旋糖酐40原料药产品标准，并且达到国际标准。随着乙醇浓度的增加，相应沉淀产品的细菌内毒素含量逐渐降低；在乙醇分步沉淀中，随着乙醇浓度逐级提高，分离产品的细菌内毒素含量也在降低。分离纯化用水和环境因素均会影响右旋糖酐40分离纯化的细菌内毒素指标。乙醇沉淀分离纯化的右旋糖酐40产品，细菌内毒素含量均＜6.00 EU/g，最低含量＜3.00 EU/g，优于国际标准（≤10 EU/g），重均分子量和分子量均符合《中国药典》质量标准。100 kDa+20 kDa二膜组合超滤分离纯化的右旋糖酐40的细菌内毒素含量可以达到10 EU/g以下。100 kDa＋20 kDa+50 kDa三膜组合超滤分离纯化，右旋糖酐40的细菌内毒素含量达到3 EU/g以下，重均分子量及分子量分布达到《中国药典》标准。改进右旋糖酐40生产工艺，提高产品品质，细菌内毒素含量引入右旋糖酐40原料药质量指标，使其达到和超过国际最高质量标准。     

洋虫成虫脱脂蛋白酶解液的抗氧化作用

对洋虫Martianus dermestoides Chevrolat成虫脱脂蛋白酶解液的抗氧化作用进行了研究。用木瓜蛋白酶水解洋虫成虫脱脂蛋白,用截留分子量分别为10 kDa和6 kDa的超滤膜将其分离成3个组分,用邻苯三酚 鲁米诺发光法、DPPH自由基清除法、Fenton法和Oyaizu法,分别测定不同分子量的洋虫成虫脱脂蛋白酶解液清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基及羟基自由基的能力。结果表明：洋虫成虫蛋白酶解液3个组分都有很好的清除自由基能力,且还原性较强,以分子量＜6 kDa的组分清除效果最佳(P＜0.05)。结果揭示洋虫成虫脱脂蛋白酶解液具有很好的抗氧化作用。     

超滤过结合密度梯度离心纯化鲍曼不动杆菌噬菌体方法的建立

目的 探讨获得低浓度内毒素和高滴度鲍曼不动杆菌噬菌体的方法,为制备安全的噬菌体生物制剂提供参考.方法 用可截留100 kD以上分子量的超滤离心管浓缩噬菌体裂解液并滤出分子量约为10 kD的内毒素,然后用蔗糖密度梯度离心纯化噬菌体浓缩液;分别测定超滤前、超滤后和纯化后的噬菌体滴度,采用鲎试验测定超滤前后内毒素的浓度,通过SDS-PAGE分析超滤前后和纯化后噬菌体蛋白的纯度.结果 经超滤离心法噬菌体滴度从3.9×1010 PFU/mL提高至1.68×1012PFU/mL,并可去除99.2％的内毒素;超滤过结合密度梯度离心后的SDS-PAGE可清晰呈现7种蛋白,分子量为29～100 kD.结论 超滤过结合密度梯度离心是一种简便、快速浓缩和纯化噬菌体的方法,并可有效地去除裂解液中的内毒素.     

超滤膜分离纯化加纳籽中5-羟基色氨酸的研究北大核心CSCD

研究了超滤膜从加纳籽中分离纯化5-羟基色氨酸的相关膜工艺条件及参数,并筛选出适合的聚砜超滤膜。研究结果表明,截留分子量为50 K的超滤膜分离纯化5-羟基色氨酸的效果要优于截留分子量分别为10 K和100 K的超滤膜。超滤膜分离纯化5-羟基色氨酸优化工艺条件:操作压力0.10 MPa、操作温度35℃、料液质量浓度1.141 mg/m L、p H值7.0,在此条件下5-羟基色氨酸转移率为83.5%,纯度可达90.5%。     

超滤膜分离纯化加纳籽中5-羟基色氨酸的研究

研究了超滤膜从加纳籽中分离纯化5-羟基色氨酸的相关膜工艺条件及参数,并筛选出适合的聚砜超滤膜。研究结果表明,截留分子量为50 K的超滤膜分离纯化5-羟基色氨酸的效果要优于截留分子量分别为10 K和100 K的超滤膜。超滤膜分离纯化5-羟基色氨酸优化工艺条件:操作压力0.10 MPa、操作温度35℃、料液质量浓度1.141 mg/m L、p H值7.0,在此条件下5-羟基色氨酸转移率为83.5%,纯度可达90.5%。     

超滤法浓缩谷氨酰胺转胺酶的影响因素研究

对微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)超滤浓缩的工艺条件进行了探讨及优化。实验采用截留分子量为30 kDa的聚醚砜(PES)膜,当发酵液初始pH为7,超滤浓缩倍数为4倍时,可以得到理想的MTG回收率。同时对超滤液中蛋白酶的变化进行了分析,发现随着超滤倍数的提高蛋白酶也逐渐提高,但在浓缩4倍以后达到较稳定的水平。聚醚砜(PES)超滤膜使用后用稀释的NaOH溶液浸泡清洗处理50 min后,膜通量可以恢复98.12%。     

用动态浊度法定量测定高聚生注射液中细菌内毒素

目的：探讨采用鲎试剂法对高聚生注射液进行细菌内毒素检查的可行性。方法通过试验确定高聚生注射液细菌内毒素检查的最大有效稀释倍数。结果：经干扰试验表明,内毒素的回收率在50％－200％之间。结论：高聚生注射液经最大有效稀释后进行细菌内毒素检查是可行的。     

天然橡胶乳清中白坚木皮醇的规模化提取技术研究

为了开发从天然橡胶乳清中规模化提取白坚木皮醇技术,课题组以膜分离技术替代传统的蒸发浓缩和柱层析工艺,对天然橡胶乳清进行除杂和浓缩,结合结晶法提纯,制备出高纯度白坚木皮醇成品。试验采用截留分子量为1000 Da的超滤膜处理乳清,最大化的去除了杂质,接着用纳滤膜对乳清进行浓缩,去除小分子无机盐,经过膜处理的乳清浓缩液极易结晶,大大提高了生产效率,实现了白坚木皮醇的规模化提取。提取样品经检测,各项指标与白坚木皮醇特征参数相符。     

乌龙茶水提物的膜分离制备及其体外抗氧化活性评价

为探究乌龙茶水提液的不同膜分离工艺对产品品质、生化成分及体外抗氧化活性的影响,采用陶瓷膜(500 nm)和超滤膜(20、10、5、3.5 kD)对乌龙茶水提液进行分离,经喷雾干燥制得茶粉。通过感官品质、物理性质等方面评价不同膜分离工艺所制备的茶粉品质,并对茶粉的主要生化成分进行分析比较。同时,通过DPPH自由基清除力、FRAP氧化还原力、羟基自由基清除力、抗超氧阴离子活力方法评价茶粉的体外抗氧化活性。陶瓷膜透过液的感官品质综合得分最高,体外抗氧化活性亦最高。500 nm陶瓷膜可有效分离与富集茶多酚 (TPs)、游离氨基酸 (FAAs)、咖啡碱(CAF)、可溶性糖 (SPS)等物质,还可达到除杂效果,经陶瓷膜分离后的乌龙茶水提液再经超滤膜分离,对TPs、CAF、SPS、儿茶素组分无分离与富集效果。截留分子量小于10 kDa的超滤膜可有效分离与富集游离氨基酸。500 nm陶瓷膜截留液的SPS含量最高,但综合感官品质最差,抗氧化活性最低。基于品质、功效、节能这3大要素考虑,500 nm陶瓷膜透过液制备的茶粉综合品质最优。     

蝶蛹金小蜂毒液蛋白不同提取分离方法的比较

为了建立蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum毒液抑制寄主血细胞免疫活性组分合适的分离纯化方法,就等电点沉淀法、乙醇沉淀法、75%硫酸铵沉淀法、75%硫酸铵沉淀法+40℃加热处理法,以及75%硫酸铵沉淀法分别与3种不同滤膜的分子大小截留法的组合等7种方法对毒液蛋白分离效果及活性的影响进行了比较。结果表明：等电点沉淀法获得的组分抑制寄主菜粉蝶Pieris rapae离体血细胞延展和包囊的活性最强,乙醇沉淀法次之,75%硫酸铵沉淀法最弱。从蛋白组分的SDS-PAGE图谱来看,等电点沉淀法获得毒液组分相对最纯,仅有3条主要谱带,分子量大小在45～116.2 kDa范围内;乙醇沉淀法次之,有5条主要谱带,分子量大小在24～116.2 kDa范围内;硫酸铵沉淀法的谱带组成与毒液蛋白粗提液相似。3种分子大小截留法获得的毒液组分的活性分析表明,强活性组分分子量大小可能都大于100 kDa。综合认为,7种方法中以等电点沉淀法提取分离蝶蛹金小蜂毒液蛋白相对为最适。