鸭各级卵泡中抑制素α和抑制素／活化素βA亚基信使RNA表达丰度的研究

采用非常灵敏的定量竞争RT朠CR技术对鸭各级卵泡中抑制素π和ρA亚基的mRNA表达丰度作了研究,发现在各级卵泡中均有此两亚基mRNA的表达,大卵泡中的π亚基表达量要高于ρA亚基.π亚基mRNA在小黄卵泡(SYF)中表达量最高,以其mRNA的平均相对丰度为1.00,则F1、F2、F3、F4/5、LWF(大白卵泡)中π亚基mRNA的平均相对含量分别为0.26±0.05、0.28±0.07、0.57±0.12、0.98±0.09、0.026±0.006.ρA亚基mRNA在F1中表达量最高,以其mRNA的平均相对丰度为1.00,则F2、F3、F4/5、SYF、LWF中ρA亚基mRNA的平均相对含量分别为0.218±0.09、0.111±0.03、0.058±0.011、0.053±0.013、0.005±0.002.结果显示,随着卵泡的增大π亚基表达量降低,ρA亚基却增加,说明在卵泡发育过程中,π和ρA亚基的表达是独立调节的,另外,ρA亚基在F1中的大量表达,说明F1可能是形成二聚体抑制素/活化素的主要场所.     

GH受体、IGF-I型受体、FSH受体和LH受体mRNA在绍鸭各级卵泡颗粒层和膜层中的表达

采用相对定量反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法,以β-actin为内标,测定绍鸭排卵前卵泡F1、F3、F5及大白卵泡(LWF)颗粒层与膜层中GH受体(GHR)、IGF-I型受体(IGF-IR)和FSH受体(FSHR)、LH受体(LHR)mRNA表达水平,以分析生长轴和生殖轴激素对绍鸭卵泡发育的协同调节作用。结果表明：在所测定的各级卵泡中,GHR mRNA在膜层的表达水平均显著高于颗粒层,膜层中大白卵泡表达量最高,而颗粒层中GHR mRNA水平在各级卵泡之间没有明显差异;相反,IGF-IR mRNA在同级卵泡颗粒层的表达水平显著高于膜层,颗粒层和膜层中IGF-IR mRNA表达在各级卵泡之间的差异均不显著,只是大白卵泡的膜层与其他等级卵泡的膜层相比,IGF-IR的表达量呈现较高的趋势;FSHR mRNA表达的变化趋势类似于IGE-IR,同级卵泡颗粒层中的表达量高于膜层;LMR mRNA在各级卵泡膜层中表达没有明显差异,而颗粒层中IMR mRNA随着卵泡发育成熟逐级显著增加,且F5和LWF卵泡膜层的IMR mRNA显著高于颗粒层,与GHR mRNA的表达相似。结果提示,GH和IGF-I调节卵巢功能的优势作用位点和机制不尽相同;GHR和LHR协同表达与IGF-IR和FSHR协同表达可能对卵泡发育起到精细的调节作用;而IMR在卵泡颗粒层中表达的逐级显著增加可能与卵泡等级的建立和排卵有关。     

仙居鸡抑制素α亚基成熟区的cDNA克隆及其在卵泡中表达的研究

根据发表的鸡抑制素α亚基序列设计引物,用RT－PCR技术从仙居鸡卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出了抑制素α亚基成熟区序列,并进行了克隆和测序,结果显示,仙居鸡成熟α亚基是由113个氨基酸(aa)残基组成的蛋白质,具有1个糖基化位点和7个半胱氨酸残基,与发表的鸡和哺乳类相应序列对比,其核苷酸序列的同源性分别为98％和61．4％－68．7％,其预测氨基酸序列的同源性分别为97．3％和64．6％－69％,且所测鸡α亚基成熟区的糖基化位点及半胱氨酸殖基的数目和位置与发表的鸡和乳类相似,说明该亚基的序列及结构在不同物咱间具有高度保守性,提示其可能具重要的生理功能,鸡各级卵泡中α亚基mRNA表达丰度的定量分析显示,从SYF到F1中,随着卵泡的成熟α亚基的表达量降低,其在SYF和F6－8中表达量最高,在LWF中表达量很低,说明α亚基在卵泡的吸收,选择及优势化过程中起重要调节作用。     

活化素和卵泡抑素对绍鸭卵泡颗粒细胞FSH受体mRNA表达作用的研究

分别用活化素（Activin）、卵泡抑素（FSP）及其组合（Activin FSP）来处理培养的鸭未成熟卵泡颗粒细胞,发现在FSH存在与不存在的情况下,Activin均能促进FSH受体mRNA的表达,且随着Activin浓度的增大,其刺激作用增强。FSP自身对FSH受体产生无显著作用,但能中和Activin对该受体产生的促进作用。这说明FSP和Activin对颗粒细胞具有自分泌作用,二者通过调节FSH受体mRNA的表达而在卵泡的生长发育过程中起着重要作用。     

转基因高表达卵泡抑素1对斑马鱼肌肉生长促进作用研究

抑肌素是转化生长因子β超家族成员,其主要功能是对肌肉的生长发育起负调控作用.在哺乳动物中,抑肌素信号是通过其特异性的与激活素受体ⅡB亚基结合而发挥作用.因此,其信号传递作用可以被其结合蛋白以及ActR ⅡB的结合蛋白卵泡抑素所抑制.在小鼠肌肉组织中,高表达卵泡抑素可以导致肌肉组织肌纤维的增生和肥大.为了研究鱼类卵泡抑素...     

籽鹅不同等级卵泡生殖相关激素受体基因的表达

目的:检测籽鹅不同等级卵泡不同生殖相关激素受体mR NA的表达。方法:选用1只8月龄产蛋期籽鹅,处死后分离各级别卵泡(F1、F2、F3、F4、F5、SYF、LWF),采用实时荧光定量PCR方法检测促卵泡激素受体(FSHR)、促黄体生成素受体(LHR)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)6种生殖相关激素受体mR NA的表达量变化。结果:SYF和LWF中LHR、GHR和IFGBP-1 mR NA表达量较低,而F1-F5级卵泡中表达量较高;SYF和LWF中ERβmR NA表达量较高,而等级卵泡中表达量较低。结论:本实验研究了不同等级卵泡FSHR、LHR、ERα、ERβ、GHR和IGFBP-1 mR NA的变化规律,为研究禽类产蛋机制提供基础数据。     

猪卵泡抑素基因接拼形式克隆、表达及分析

猪卵泡抑素基因（Follistatin,FS）具有调控动物生殖活动和肌肉生长的生物功能,但对猪的研究报道很少。本研究克隆了猪卵泡抑素基因两种接拼形式、比较分析其蛋白结构特征、进化关系和组织表达特性。研究结果表明,通过两对引物成功克隆了猪卵泡抑素基因的1045bp（FS—L）和964bp（FS-L）的两种接拼形式;与Genbank中的序列比对表明FS-L和FS-L的CDS序列与人、牛、家鼠、沟鼠、斑马鱼的卵泡抑素基因序列相似性在80％以上。对两种蛋白质结构域的比较发现,FS-L蛋白相比FS-L蛋白而言缺失了一个FS结构域。同源性分析表明,猪与牛的亲缘关系较近,与人、小鼠、沟鼠和斑马鱼的关系相对较远。组织表达分析表明,两种拼接形式在梅山猪不同组织中的表达存在差异,FS-L基因在梅山猪肌肉及生殖系统等组织中均有表达,而FS-L基因则主要在生殖系统中表达。表明FS-L在肌肉生长中发挥作用,而FS-L主要调控动物的生殖功能。     

猪分离卵泡体外培养过程中Fas/FasL对颗粒细胞凋亡的作用

从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为3类：健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡。猪分离卵泡经眼观检查后再行石蜡切片和HE染色,形态学研究表明,眼观检查对于健康卵泡的判定准确率为92％。取健康卵泡按直径大小分为3组：直径＞5 mm大卵泡组、3～5 mm中卵泡组和≤3 mm小卵泡组。卵泡培养8、16和24 h,以Annexin-V FITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况,结果发现培养卵泡颗粒细胞的总凋亡率（早期凋亡＋晚期凋亡）在8 h时就已达到70%以上,至24 h则为81.1%～94.6%。收集无血清培养0、8、16、24、48和72 h的卵泡颗粒细胞,用real time PCR SYBRgreen法检测各组卵泡颗粒细胞FasL和Fas mRNA相对表达量。各级卵泡颗粒细胞中FasL mRNA水平随培养时间显著增加,培养至24 h达最大值（P＜0.05）;小卵泡颗粒细胞FasL mRNA水平均高于大、中卵泡组。各级卵泡颗粒细胞Fas mRNA相对表达量在培养前（0 h）差异不显著,8 h时显著增加,48 h达最大值。该实验表明,所用无血清卵泡培养体系可有效诱导卵泡颗粒细胞的凋亡,细胞凋亡是卵泡闭锁的主要诱因,但卵泡闭锁程度可因卵泡大小而异,小卵泡似乎更容易发生闭锁。     

绍鸭卵巢卵泡发育相关新EST的分离与表达

采用银染mRNA差异显示方法从绍鸭卵巢等级卵泡中分离并筛选到 3个差异表达序列标签 (ExpressedSequenceTags ,ESTs)SXDF0 2 0 1(2 71bp)、SXDF0 2 0 2 (2 0 0bp)和SXDF0 2 0 3(173bp) ,通过测序和BLAST检索 ,发现SXDF0 2 0 1与GenBank中登录的所有物种的所有序列均无同源性 ,是在绍鸭卵巢卵泡发现的新EST ,现已登录GenBank(GenBank登录号 :CB0 72 6 2 9) ,而SXDF0 2 0 2和SXDF0 2 0 3则分别与GenBank公布的鸡的EST和肌胃肌球蛋白重链高度同源。用 5′ RACE将SXDF0 2 0 1延伸至 5 4 4bp ,经过BLAST再次检索 ,仍然未发现中度同源序列采用相对定量RT PCR方法进一步研究SXDF0 2 0 1和SXDF0 2 0 2在绍鸭组织中的时空特异性表达 ,发现这两个EST在产蛋高峰期绍兴鸭的下丘脑、垂体、肌肉、肝脏、脂肪等组织都有表达 ;SXDF0 2 0 1在 30日龄卵巢的表达水平显著高于 6 0 (P <0 0 5 )和 90 (P =0 0 15 )日龄 ;而SXDF0 2 0 2在卵巢发育的不同阶段的表达水平没有变化 ;SXDF0 2 0 1在卵巢卵泡颗粒层中的表达总体高于膜层 ,SXDF0 2 0 2在颗粒层中的表达F3 >F5>Fw(P <0 0 1) ,而在F1卵泡降至最低 (P <0 0 1) ,膜层中以Fw 卵泡表达水平最高 (P <0 0 1)。     

c-src在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用初探

目的：研究原癌基因c-src在大鼠卵巢的表达,及其在原始卵泡启动过程中的作用。方法：取2日龄SD雌性大鼠卵巢,在Waymouth培养体系中培养0．4、8d后,首先采用RT-PCR方法证实大鼠卵巢中有c-src的表达,再体外合成其RNA小干扰片段（small interference RNA,siRNA）转染培养中的卵巢组织进行RNA干扰,用HE染色及RT-PCR筛选最佳干扰片断并用慢病毒包装后检测干扰效果。结果：随着培养天数的增加,原始卵泡在卵泡总数中所占比例逐渐减少;c—src mRNA在原始卵泡中有表达,经筛选用最佳干扰片断siRNA1慢病毒包装进行RNA干扰,发现干扰后,与空白组、空白载体组相比,最佳干扰组c—src mRNA含量明显下降,原始卵泡在卵泡总数中所占比例相对更多,原始卵泡发育受到抑制。结论：c-src在原始卵泡中有表达,并在一定程度上促进了原始卵泡的发育。