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相似文献
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1.
通过有机试剂抽提,CF-11纤维素柱层析,从感染水稻齿叶矮缩病毒菲律宾分离株(RRSV-P)的水稻植株中获取该病毒的全基因组,即获得从Segment 1到Segment 10(S1-S10)的10条双链RNA(dsRNA),然后设计合适的引物,用RT-PCR方法得到S9的cDNA并将其克隆到pUC119质粒上扩增,以双链测序法测定该cDNA的全序列。同时又将此cDNA克隆到大肠杆菌表达质粒pGEX  相似文献   

2.
通过有机试剂抽提,CF-11纤维素柱层析,从感染水稻齿叶矮缩病毒菲律宾分离株(RiceRaggedStuntVirus,Philippineisolate,简称RRSV-P)的水稻植株中获取该病毒的全基因组,即获得从Segment1到Segment10(S1-S10)的10条双链RNA(dsRNA),然后设计合适的引物,用RT-PCR方法得到S9的cDNA并将其克隆到pUC119质粒上扩增,以双链测序法测定该cDNA的全序列。同时又将此cDNA克隆到大肠杆菌表达质粒pGEX-3X上,在大肠杆菌菌株DE3中用IPTG诱导表达,经超声波破菌、离心、Glutathione-sepharose4B亲和层析,得到纯化的分子量为64kD的融合蛋白。  相似文献   

3.
应用循环逆转录PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA   总被引:2,自引:0,他引:2  
陈燃  伍迪  唐榕  汪进  毛裕民 《病毒学报》2000,16(3):266-269
循环逆转录(circulatory reverse transcription,CRT)是线性增长逆转录cDNA产量的一种新技术。为了将该技术用于检测HCV RNA,通过改变CRT的循环次数,结合竞争PCR,作出标准曲线。采用16次CRT加34次循环PCR检测了136例HCV ELISA阳性、54例HCV ELISA阴性和108例临床可疑病人全血标本,并与逆转录PCR(RT-PCR)和巢式PCR(  相似文献   

4.
通过培养血管平滑肌细胞(VSMC)的直接细胞计数显示自发性高血压大鼠SHR的细胞增殖快于正常血压大鼠WKY;应用DNA-蛋白质凝胶漂移泳动技术比较SHR和WKY的VSMC核转录因子Ap1、Ap2、GRE、CREB、Sp1、CTF/NF1、NF-κB结合活性,发现SHR的CTF/NF1和NF-κB结合活性高于WKY,用P65和P50抗体证明了NF-κB结合的特异性;同时,LPS诱导VSMC和PDTC抑制LPS诱导的实验表明NF-κB结合活性增强是通过IκB磷酸化而激活。本研究提示核转录因子NF-κB对高血压VSMC异常增殖有重要作用。  相似文献   

5.
利用RT-PCR方法,首次从大鼠肝脏细胞总RNA中扩增出4.5S RNAs的cDNA。该cDNA被克隆到pGEM3Zf(+)质粒上,经酶切电泳鉴定,然后测序。与报道的小鼠和仓鼠4.5S RNAs序列进行了比较研究,并对该分子的结构特点进行了初步分析。  相似文献   

6.
雄激素受体与雄激素应答元件的相互作用   总被引:4,自引:2,他引:2  
将雄激素受体(AR)的cDNA1119bp片段(1105-2224)(其中包含其DNA结合结构域到部分激素结合结构域)克隆于表达南粒pGEX中,通过IPTG诱地,在E.coli中表达GST-AR融合蛋白,经谷胱甘肽-Sepharose-4B亲和层析得以部分纯化。利用一个有雄激素应答元件(ARE)活性的C3(1)DNA片段为阳性探针,通过凝胶阻滞分析和DNase1足迹法证明此表达产物具有牧民的DNA  相似文献   

7.
节丛孢属rDNA ITS区RFLPs分析   总被引:2,自引:1,他引:1  
祝明亮  张克勤 《菌物系统》2000,19(4):498-503
利用PCR-RFLP方法对捕食线虫真菌节丛孢属进行了系统发育研究。以ITS1和ITS4为引物对该属10种12个菌株的核糖体DNA转录间区(ITS)进行了PCR扩增,4种内切酶(AluⅠ、HaeⅢ、HpaⅡ、TaqⅠ)酶切。结果表明该属的ITS区长度没有明显差异,其长度范围在658-705之间,酶切图谱能体现不同种间的多态性,根据4种内切酶酶切结果,利用UPGMA法构建的节丛孢属分子系统树,基于体现  相似文献   

8.
采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒(HCV)5'端非编码区(5'NCR)302bp的cDNA片段,经补齐和提纯后插入pUC19质粒,获得的重组体pUN进行序列测定。将pUN的目的基因亚克隆进体外转录载体pSPORTI多克隆位点的EooRI和PstI切点之间,所得重组体pSN线性化后由T_7RNA多聚酶及SP6RNA多聚酶引导体外转录反应,产物经凝胶电泳及特异引物RT-PCR,证实SP6引导的是正义RNA,T7合成的是反义RNA,其大小分别力429bp和362bp。并证实所得RNA力HCV5'NCRcDNA转录而来。获得的HCV5'NCRcDNA和RNA在常规逆转录和PCR步骤中用于设立有效的模板对照,对消除假用性及评估试剂有重要意义。同时,HCV5'NCR体外转录载体的构建可用于制各RNA探针和反义RNA,改进后还可作为定量PCR的竞争性模板。  相似文献   

9.
设计一对PCR引物,其中上游引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列,以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该cDNA有2个碱基变异,以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其  相似文献   

10.
徐来祥  朱圣庚 《动物学报》2000,46(3):339-345
利用RT-PCR方法,从小鼠肝脏组织总RNA中扩增出4.5SRNA的cDNA。该cDNA被克隆到pGEM3Zf(+)质粒上,酶切鉴定并测序。然后将该序列插入以Luc基因作为报道基因的表达载体pSVluc20的PvuⅡ位点,构建了含4.2SRNA逆转座子的表达载体pSVluc20-4.5S。脂质转染法将表达载体导入小鼠骨髓瘤细胞NS-1、SP2/0和人乳腺癌细胞Bca61。结果表明,小鼠4.5SRN  相似文献   

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