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1.  绵羊体外受精卵的体外发育及冷冻保存研究  
   刘东军 张锁链《细胞生物学杂志》,1993年第15卷第2期
   将体外成熟、体外受精的绵羊卵子,在体外培养至桑椹胚—襄胚期并进行冷冻保存,观察了培养卵的体外发育和冷冻保存效果。从采自屠宰场的绵羊卵巢中抽取卵母细胞,用含有10%FCS(或NSS)、HCG、E_2和Hepes的M199培养24—26小时,再以经Ionophore A23187诱导获能的新鲜精子进行授精。授精后6—8小时移入发育用培养基内进行培养,发育用培养基为含有10%FCS(或NSS)、丙酮酸钠、Hepes的M 199。授精72小时后,FCS组和NSS组的卵裂率分别为36.9%和45.2%,后者显著高于前者。继续培养7—10天后,桑椹胚~囊胚的发育率分别为11.6%和23.4%,两者间差异极显著。将桑椹胚和囊胚冷冻保存于PBS+20%FCS+10%乙二醇冷冻液内,解冻后的胚胎形态正常率分别为82.0%和71.9%。    

2.  体细胞核移植克隆民猪: 培养液对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响  被引次数:2
   刘忠华  田江天  郑重  王振坤  宋军  尹智  高力  马海鹍  孔庆然  孙爽  李玉田  王洪斌《中国科学C辑》,2007年第37卷第6期
   体外培养成熟的卵母细胞是进行克隆猪研究所需受体卵母细胞的主要来源, 卵母细胞成熟质量与体细胞核移植胚胎发育能力关系密切. 为提高卵母细胞体外成熟率和成熟质量, 进而提高体细胞核移植猪的成功率, 本实验以改进的TCM199培养液为基础液(T), 分别添加10%的猪卵泡液(T+pFF)和 10%的胎牛血清(T+FBS)后进行卵母细胞成熟培养, 以成熟率和体细胞核移植胚胎发育率等重要指标为标准, 研究了pFF和FBS对卵母细胞成熟及核移植胚胎发育能力的影响. T, T+pFF和T+FBS组在成熟培养后42 h卵母细胞成熟率分别为(53.2±3.8)%, (69.7±3.8)%和(70.2±3.7)%, 添加10%的pFF和FBS显著(P<0.05)提高了卵母细胞成熟率; 3组不同成熟培养液获得的成熟卵母细胞在体细胞核移植后囊胚发育率差异不显著, 但T+pFF组的囊胚细胞数(34.5±2.24)显著(P<0.05)高于T组的囊胚细胞数(26.6±1.25). 来自T+pFF组的体细胞核移植胚胎经手术法移植入发情周期为第0天或第1天的18头受体母猪输卵管, 其中有3头受体母猪妊娠发育到期, 获得克隆民猪14头, 其中有6头健康成活至今. 实验结果表明, 培养液中添加10%pFF可以有效提高卵母细胞成熟比例和成熟质量, 在含有10% pFF培养液中获得的成熟卵母细胞具有支持核移植胚胎全程发育的能力.    

3.  体细胞核移植克隆民猪: 培养液对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响  
   刘忠华  田江天  郑 重  王振坤  宋 军  尹 智  高 力  
马海鹍
  孔庆然  孙 爽  李玉田  王洪斌
《中国科学C辑》,2007年第37卷第06期
   体外培养成熟的卵母细胞是进行克隆猪研究所需受体卵母细胞的主要来源, 卵母细胞成熟质量与体细胞核移植胚胎发育能力关系密切. 为提高卵母细胞体外成熟率和成熟质量, 进而提高体细胞核移植猪的成功率, 本实验以改进的TCM199培养液为基础液(T), 分别添加10%的猪卵泡液(T+pFF)和 10%的胎牛血清(T+FBS)后进行卵母细胞成熟培养, 以成熟率和体细胞核移植胚胎发育率等重要指标为标准, 研究了pFF和FBS对卵母细胞成熟及核移植胚胎发育能力的影响. T, T+pFF和T+FBS组在成熟培养后42 h卵母细胞成熟率分别为(53.2±3.8)%, (69.7±3.8)%和(70.2±3.7)%, 添加10%的pFF和FBS显著(P<0.05)提高了卵母细胞成熟率; 3组不同成熟培养液获得的成熟卵母细胞在体细胞核移植后囊胚发育率差异不显著, 但T+pFF组的囊胚细胞数(34.5±2.24)显著(P<0.05)高于T组的囊胚细胞数(26.6±1.25). 来自T+pFF组的体细胞核移植胚胎经手术法移植入发情周期为第0天或第1天的18头受体母猪输卵管, 其中有3头受体母猪妊娠发育到期, 获得克隆民猪14头, 其中有6头健康成活至今. 实验结果表明, 培养液中添加10%pFF可以有效提高卵母细胞成熟比例和成熟质量, 在含有10% pFF培养液中获得的成熟卵母细胞具有支持核移植胚胎全程发育的能力.    

4.  不同卵龄小鼠卵母细胞激活和受精的比较研究(英文)  
   曹佐武  钟瑜  潘善培  刘学高《基因组蛋白质组与生物信息学报》,1997年第2期
   本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探讨卵母细胞激活和受精的机制。向NIH雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)7.5单位,48小时后注射人绒毛膜促性激素(HCG)7.5单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体(OCC)。从注射HCG后到取OCC的时间视为卵母细胞的卵龄。将OCC置于含8%酒精的M2中7分钟,再在M16中培养5小时后,用0.3mg/mL的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志。将OCC加入已获能的精子悬液中,5小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到M16中,次日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为20h,其激活率为81.6%,速即卵裂率为48.0%;而卵龄进一步增加到24h,激活率和卵裂率转为下降(Table1)。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为15h,卵母细胞的体外受精率为45.4%;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降(Table2)。Fig.1显示:新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结#0;    

5.  斑马鱼卵母细胞的体外成熟及成熟卵的受精发育  
   李书鸿 毛钟荣 韩文 孙志远 闫维 陈惠萍 严绍颐《生物工程学报》,1993年第9卷第4期
   采用体外培养的方法,研究斑马鱼卵母细胞的成熟过程。Ⅳ时相初级卵母细胞在o.5μg/m1 17a-羟基孕酮的EM-199培养液中,80%氧气,25℃的体外培养条件下,在40min内,胚泡(GV)逐渐由卵母细胞中央至动物极边缘l/2处移到动物极边缘,进八V时相卵母细胞。30min后胚泡破裂(GVBD),胚泡破裂率为59%。此种卵母细胞继续培养2h才完全成熟。成熟卵不能从滤泡膜中自然排出。冷开水中剥离其外边的滤泡膜后加入具有受精能力的精子,即能使成熟卵受精,受精膜举起,胚盘在动物极形成。其后受精卵的分裂、发育等与自然成熟受精卵相同。以发育至囊胚为受精标准,这种体外成熟卵受精率为78%。这是斑马鱼卵母细胞体外培养成熟的首例报道。鱼类卵母细胞体外成熟技术的建立,为外源基因卵母细胞胚泡内转移奠定了基础。    

6.  牛胚胎在BRL/mTCM199和HECM-6/mTCM199培养体系中发育潜能的探讨  被引次数:3
   王红  季维智《动物学研究》,2000年第21卷第6期
   在两种培养体系下对牛胚胎早期发育进行了比较研究。把屠宰场收集的牛卵本外培养至成熟,然后进行体外受精。将受精卵置于下列两种培养体系中进行体外培养:①Buffalo rat liver细胞与改进的TCM199培养液共同培养系统(BRL/mTCM199);②半确定培养液两步培养系统「无血清的金黄地鼠培养液与改进的TCM199培养液(HECM-6/mTCM199)」。结果表明:后者的囊胚率(50%)明显高    

7.  处理方式不同的颗粒细胞和卵泡液对牛卵母细胞体外受精后卵裂率和囊胚率的影响  
   邓雯  禹学礼  庞有志  昝林森《分子细胞生物学报》,2008年第41卷第5期
   将牛的卵母细胞置于添加有不同预处理颗粒细胞及含有卵泡液的培养液或不舍有卵泡液的培养液中进行体外成熟、受精及胚胎发育培养,研究了颗粒细胞、卵泡液及颗粒细胞与卵泡液交互作用对牛卵母细胞成熟、受精后卵裂率、囊胚率的影响。2178枚卵母细胞体外成熟受精后胚胎发育的对比观察结果表明:颗粒细胞、卵泡液及颗粒细胞与卵泡液交互作用对卵母细胞成熟受精后胚胎的卵裂具有显著影响(P〈0.05);颗粒细胞对囊胚的发育有显著影响(P〈0.05);卵泡液及颗粒细胞与卵泡液交互作用对囊胚的发育无显著影响(P〉0.05)。不同因素对卵裂率、囊胚率的影响表现为:颗粒细胞因素〉培养液因素〉培养液&#215;颗粒细胞交互作用。结论:TCM199培养液中添加卵泡液和单层颗粒细胞组成的培养系统用于牛卵母细胞体外成熟及胚胎发育的效果较好。共培养体系中的单层颗粒细胞用经酶消化分散处理后在培养箱中孵育10min的颗粒细胞替代时,胚胎的发育效果并不受影响。    

8.  不同卵龄小鼠卵母细胞激活和受精的比较研究  
   曹佐武 钟瑜 等《发育与生殖生物学报》,1997年第6卷第2期
   本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探索卵母细胞激活和受精的机制。向NIH雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)7.5单位,48小时后注射人绒毛膜促性激素(HCG)7.5单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体(OCC)。从注射HCG后到取OCC的时间视为卵母细胞的卵龄。将OCC置于含8%酒精的M2中7分钟,再在16中培养5小时后,用0.3mg/mL的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志,将OCC加入已获能的精子悬液中,5小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到M16中,将日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为20h,其激活率为81.6%,速即卵裂率为48.0%;而卵龄进一步增加到24h,激活率和卵裂率转为下降(Table1)。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为15h ,卵母细胞的体外受精率为45.4%;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降(Table2)。Fig.1显示:新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结构、功能及对外界刺激的敏感状态都在发生一些规律性的变化,而激活和受精的机制不完全,还不能精对卵龄的要求要严格。    

9.  试管牛繁殖能力的观察  
   旭日干  张锁链  庞也非  薛晓先  刘东军  廛洪武《动物学杂志》,1991年第4期
   利用屠宰母牛卵巢卵母细胞经过体外培养成熟、体外受精和体外发育后,以非手术移卵技术移植给受体母牛,于1989年8月15日出生的我国第一胎试管牛(雄性),现已达到繁殖年龄。为检测试管牛的繁殖能力,我们根据其自然交配情况以及采精后进行体外受精结果对其繁殖能力进行了研究评价。经过与5头母牛的情    

10.  昆明小鼠卵子的体外受精及发育的研究  被引次数:2
   庞也非  旭日干《细胞生物学杂志》,1990年第4期
   为建立稳定有效的昆明小鼠卵子的体外受精和体外培养系统,研究中以成熟雄鼠附睾尾部精子与超排得到的卵子在TYH培养液中进行体外受精,并对精子的穿入情况以及受精卵中精子头部及卵细胞核的形态变化进行了连续观察。将小鼠输卵管上皮或卵丘细胞加至培养液中与受精卵共同培养,克服了“2细胞阻滞”现象,分别有72.3%和69.9%的胚胎发育为桑椹胚。将培养得到的桑椹胚和囊胚移植给受体雌鼠后,得到了产仔的结果。证明本研究建立的昆明小鼠卵子的体外受精和培养系统是可行的。    

11.  绵羊体外受精卵的发育及冷冻保存的研究  
   刘东军  张锁链  庞也非  薛晓先  廛洪武  海青兰  斯琴  旭日干《动物学杂志》,1992年第1期
   本研究主要探讨了绵羊体外受精卵在不同培养条件下的发育能力,并对体外发育至桑椹胚或囊胚的体外受精胚进行了冷冻保存。 从采自屠宰场的绵羊卵巢中采集卵母细胞,用含有10%FCS(或NSS)、hCG、E_2和Hepes的M199培养24—26小时,再以用IonophoreA23187诱导获能的新鲜精子进行授    

12.  小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精的效果观察  被引次数:2
   乌日琴  邓新燕  陈颖青  都同功  陈系古《中国实验动物学报》,1999年第7卷第2期
   目的 研究不同培养条件对小鼠卵母细胞体外成熟及体外受精率的影响。方法 小鼠卵母细胞分别在含有FSH、BSA和胰岛素的培养液中体外成熟,在Whitten 氏液中体外受精,比较体外成熟率、体外受精率。结果 1- 裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率(81-4% ,31-0 % ) 均高于卵丘卵母细胞复合体(COC)(48-6 % ,27-1% ) 。2- 在培养液中添加FSH、胰岛素和BSA,卵母细胞的体外成熟率为77-9 % ,82-3% 、60-7% ;体外受精率为77-2 % 、72-6 % 、26-7% ;2 - 细胞率为49-2 % 、34-2 % 、10-0% 。胰岛素组的卵母细胞IVM 率最高,但IVF率、2 - 细胞率低于FSH 组。3- 添加BSA的两组的体外受精率只有26-7 % 、25-8 % ,显著低于其他组,其体外成熟率也较添加FSH 和胰岛素的组成。4- 排出第一极体(PbI) 的卵母细胞的体外受精率和2 - 细胞率(85-9 % ,22-4% ) 均高于GV期卵母细胞(71-1 % ,12-9 % ) 。结论 1- 卵丘卵母细胞(COC) 较裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率都低,差异显著(P成熟< 0-01;P受精< 0-05) 。2-FSH 和胰岛素均能提高小鼠卵母细胞的体外成熟率、体外受精率。3-BSA可以降低小鼠卵母细胞体外受精率,差异极显著。4-GV 期卵母细胞的体外受精率显著低于体外培养的排出第一极体的卵母细胞(P2 - cell < 0-05,P受精<0-05)    

13.  绵羊卵母细胞体外核成熟抑制及其对胚胎发育潜力的影响  被引次数:3
   周红林  马峻  季维智《动物学报》,2002年第48卷第6期
   本研究旨在探讨次黄嘌呤 +dbcAMP或IBMX +dbcAMP对绵羊卵母细胞体外成熟的可逆性抑制作用 ,以及这种抑制作用对卵母细胞胚胎发育潜力的影响。自绵羊卵巢分离卵丘 -卵母细胞复合物进行体外培养 ,培养基中分别加入或不加入上述抑制剂。培养 6h后各组取部分卵母细胞固定染色检查卵母细胞核成熟情况 ;将其余的卵母细胞分别移入无抑制剂的成熟培养基中继续培养 18h后 ,再次检查各组卵母细胞核成熟情况 ,并进行体外受精和胚胎培养。结果表明 :次黄嘌呤 +dbcAMP或IBMX +dbcAM都分别能使 6 0 %以上的绵羊卵母细胞抑制在GV期。这种抑制是可逆性的 ,去除抑制剂后卵母细胞能恢复减数分裂 ,并加快由GVBD到MⅡ的成熟过程。各处理组受精率、卵裂率和囊胚发育率与对照组相比无显著性差异 ,表明卵母细胞的胚胎发育潜力没有受损。上述物质对卵母细胞成熟的可逆性抑制可用于研究卵母细胞成熟及其胚胎发育潜力的调节机制。    

14.  卵巢运输温度及卵母细胞促成熟因子对山羊卵母细胞体外成熟和体外受精的影响  被引次数:1
   孙新明  戴彩华  罗婷《生物技术通报》,2010年第8期
   探讨山羊卵母细胞体外成熟培养的影响因素,为优化山羊体外受精程序奠定基础.比较从屠宰场采摘的山羊卵巢运输温度和体外培养促成熟因子对卵母细胞体外成熟培养和体外受精效果的影响. 结果表明,在运输温度接近室温(25±2)℃时的卵母细胞成熟率显著高于接近体温(36±2)℃时的运输温度(成熟率分别为53.8%,35.0%,P<0.01),两种运输温度的卵巢卵母细胞成熟培养后体外受精率无显著差异(分别为37.9%, 36.6%, P>0.05).与在体外成熟基础培养液(M1:M199 media+1 μg/mL E2 +10 μg/mL FSH+10 μg/mL LH+20%EGS)中进行成熟培养相比,在基础培养液中仅添加20 ng/mL EGF(M2)和另外添加10%GFF(M3) 进行体外成熟培养的卵母细胞成熟率均有明显提高,其中成熟率在M1为53.8%,极显著低于M2的69.5%和M3的72.6%,P<0.01;M2和M3间差异不显著;卵母细胞成熟培养后体外受精率在三者间无明显差异分别为37.9%,39.5%和40.6%,P>0.05.山羊体外受精时从屠宰场采摘的卵巢宜在室温条件下进行运输,在体外成熟培养体系中加入EGF和GFF均可有效促进山羊卵母细胞的体外成熟,但EGF起关键作用.    

15.  绵羊卵母细胞体外核成熟和抑制及其对胚胎发育潜力的影响  被引次数:4
   周红林 马峻 等《动物学报》,2002年第48卷第6期
   本研究旨在探讨次黄嘌呤+dbcAMP或IBMX+dbcAMP对绵羊卵母细胞体外成熟的可逆性抑制作用,以及这种抑制作用对卵母细胞胚胎发育潜力的影响。自绵羊卵巢分离卵丘-卵母细胞复合物进行体外培养,培养基中分别加入或不加入上述抑制剂。培养6h后各组取部分卵母细胞固定染色检查卵母细胞核成熟情况;将其余的卵母细胞分别移入无抑制剂的成熟培养基中继续培养18h后,再次检查各组卵母细胞核成熟情况,并进行体外受精和胚胎培养。结果表明,次黄嘌呤+dbcAMP或IBMS+dbcAM都分别能使60%以上的绵羊卵母细胞抑制在GV期。这种抑制是可行性的,去除抑制剂后卵母细胞能恢复减数分裂,并加快由GVBD到MⅡ的成熟过程。各处理组肥精率,卵裂率和囊胚发育率与对照组相比无显著性差异,表明卵母细胞的胚胎发育潜力没有受损。上述物质对卵母细胞成熟的可逆性抑制可用于研究卵母细胞成熟及其胚胎发育潜力的调节机制。    

16.  猪卵母细胞体外成熟与冷冻附睾精子的体外受精  被引次数:6
   江金益 钟声《动物学报》,1991年第37卷第3期
   由屠宰母猪卵巢分离得到505枚卵母细胞,经成熟培养,其中468枚卵丘细胞扩张,成熟率为92.7%。采用冷冻的附睾精子授精,受精率为41.9%(57/136),其中单精受精率36.8%(50/136),多精受精率5.1%(7/136)。授精卵体外培养24和48小时后的卵裂率分别为5.3%(15/258)和12.9%(30/232)。把35枚早卵裂期胚胎和250枚未见卵裂的1-细胞期受精卵移入4头受体母猪的输卵管内,其中2头妊娠,分别于1990年4月10日和29日正常分娩,共生产仔猪21头。    

17.  牛体内,外受精胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究初报  被引次数:2
   朱士恩  曾申明  李树静  余文莉  张忠诚  陈永福《生物技术通讯》,2000年第11卷第2期
   利用3种培养液即输卵管合成液(SOF)、TCM199和CRlaa对牛体外受精后的卵母细胞进行培养,结果卵裂率分别达85%、67%和72%,囊胚发育率分别为37%、21%和30%。对所获得的囊胚利用EFS玻璃化溶液进行冷冻保存。在10%EG中预处理5min后再移入EFS40平衡30s二步法冷冻保存的胚胎,其1解冻后继续发育率高达86%,与对照组91%相比无显性差异(P>0.05)。而EFS30二步    

18.  牛体外受精的程序及超微结构研究  被引次数:12
   孙青原 秦鹏春《动物学报》,1996年第42卷第3期
   牛体外成熟卵母细胞体外受精后3小时精子入卵,8小时原核形成,24小时的核多到卵中央。精子发生顶体反应的部位主要在透明表面,方式是顶体外膜自身囊经,发生顶体反应的粗子可斜向或垂直穿过透明带。卵丘细胞可吞噬大量精子,在阻多精受精中发挥重要作用。高尔基得合体,线料体、环状片层和滑面内质网等在原核周围形成细胞器集团。牛体外受精卵的雌雄原结合比体内受精的要延迟,胞吐到卵周隙中的皮质颗粒内容物扩散不完全。    

19.  碳水化合物对牛体外受精胚胎体外发育的影响  
   刘东军  旭日干《中国实验动物学报》,2003年第11卷第1期
   目的 在SOF +PVA(合成输卵管液 +聚乙烯醇 )这一化学成分明确培养系统条件下 ,观察了葡萄糖、丙酮酸和乳酸三种碳水化合物对牛体外受精胚胎体外发育的影响 ,以便为今后进一步探讨影响牛早期胚胎体外发育的因素提供实验依据。方法 牛卵母细胞体外成熟和体外受精后 ,在化学成分明确培养系统内进行体外发育培养。结果 实验 1将牛体外受精卵培养于不含有葡萄糖的SOF +PVA培养系统中 ,培养 12 0h后分别移入含有 0、1 5 0、3 30、5 0 0mmol L的SOF +PVA培养系统中 ,对照组胚胎一直在含有 1 5 0mmol L葡萄糖的SOF +PVA中培养 ,结果囊胚的发育率分别为 9 2 % a、12 1%、19 2 % b、18 9%和 11 7% (a    

20.  羊精子体外获能  被引次数:4
   石其贤 陈大元《动物学报》,1991年第37卷第1期
   本文发展了一种羊精子体外获能培养基——mTs或RSCM。羊精子在该培养基中(39℃.pH7.8和5% CO_2,95%空气)预先培养7小时,可使大部分精子获能。获能精子呈现超激活运动,并可穿透去透明带仓鼠卵,穿透率分别为78.5±14.3%和96.7±2.3%,这种作用可被同种精浆逆转。获能精子与同种卵的受精率为83.3%。16个受精卵等量移入2只假孕兔输卵管壶腹部中。72小时后回收到12个胚胎。其中6个胚胎已发育为4—8细胞阶段,将这些细胞等量移入2只受体母羊输卵管壶腹部。其中1只妊娠,并维持到2个月之久。    

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