宁夏枸杞体细胞胚发生过程中对金属离子的吸收速率和游离氨基酸含量的变化

采用多重示踪技术研究宁夏枸杞 (Lyciumbar barumL .)体细胞胚发生中对多种金属离子的吸收动态及其与游离氨基酸含量变化之间的关系。结果表明 :(1)在枸杞体细胞胚发生中对一些金属离子具有选择吸收特性 ,而且在体细胞胚发育不同时期对同一种金属离子的吸收量也不同 ;(2 )在枸杞体细胞胚发生早期对多数金属离子吸收量迅速增加 ,而后下降。到球形胚期吸收量达到第二个峰值 ,而且金属离子被吸收后提高了体细胞胚发生的频率 ;(3)枸杞体细胞胚发生中游离氨基酸总量从胚性细胞启动期开始下降 ,到胚性细胞形成期到达谷底 ,然后开始上升 ,到多细胞原胚期达到峰值 ,多数游离氨基酸含量变化与金属离子被吸收的量相交叉 ;(4 )外加RbCl和SrCl2 对枸杞体细胞胚发生具有促进作用 ,而且加大了几种游离氨基酸含量变化的幅度。文章讨论了它们之间的关系及其可能的作用机理     

稀土元素对枸杞体细胞胚诱导频率的影响

本文系统研究了稀土元素对枸杞体细胞胚发生额率的影响,企图为建立高频率体细胞发生体系提供参考资料。实验以宁夏枸杞(Lycium chinense)叶片为外植体,材料离体后接种在附加2,4-D 0.2mg/L 和水解酪蛋白500mg/L 的 MS 培养基上,首先诱导愈伤组织,所得愈伤组织经多次继代培养和筛选,使其具有胚性愈伤组织的特征。然后,转移到附加不同稀土元素成分和浓度的 MS培养基上诱导体细胞胚。十五天后,取出愈伤组织,置实体显微镜下,剥离与统计体细胞胚的     

白杄体细胞胚胎发生及其植株再生

白杄(Picea meyeri Rehd.et Wils.)的成熟胚在4～6℃低温下保存1个月后,接种于改良LP 2mg/L 2,4-D 1mg/L 6-BA的培养基上,黑暗条件下培养1个月便可产生白色半透明的胚性愈伤组织。整体染色封片观察表明,胚性愈伤组织由很多很长的胚柄细胞及其顶端的胚细胞团组成,这种愈伤组织培养物称为胚性胚柄团。胚性胚柄团在MS 1mg/L 2,4-D 1mg/L KT的继代培养基上黑暗条件下可保持旺盛的增殖能力和分化潜力。当胚性胚柄团转到MS 5mg/L ABA 5mg/L AgNO_3的分化培养基上,1个月后可产生大量正常的体细胞胚。体细胞胚成熟以后转到含0.5％活性炭的无激素1/2MS基本培养基上约40d后可长出1.5～2.5cm的根,约60d后可长出真叶。光、ABA、蔗糖及AgNO_3浓度是影响体细胞胚发生的主要因素。     

白刺花胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生和萌发

探讨不同因素对白刺花下胚轴、子叶2种外植体胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生和萌发的影响。以B5和MS为基本培养基,研究2,4-D、6-BA和TDZ对白刺花下胚轴和子叶胚性愈伤组织的诱导;在MS培养基上添加不同浓度2,4-D,研究胚性愈伤组织增殖情况;采用ABA,探究对体细胞胚发生的影响。结果表明:下胚轴比子叶更易诱导胚性愈伤组织,筛选出2种外植最佳的胚性愈伤组织诱导培养基均为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L 6-BA,胚性愈伤组织诱导率分别为77.3%和41.0%。15.0 mg/L ABA、0.2 mg/L 2,4-D和2.0 mg/L 6-BA有利于体细胞胚发生,1/3MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+2.0 g/L活性炭+25 g/L蔗糖+7 g/L琼脂的培养基可使体细胞胚萌发率达80%以上,再生植株移栽成活率高达90%。白刺花外植体种类及培养基类型均会影响胚性愈伤组织的诱导,其中下胚轴诱导效果优于子叶;MS培养基较适合启动细胞脱分化形成愈伤组织,2,4-D对胚性愈伤组织的增殖保持有调控作用,ABA有利于体细胞胚的发生。     

枸杞体细胞胚发生中对痕量金属离子吸收的动态研究

以药用植物宁夏枸杞（Lycium barbarum L.)愈伤组织为材料,离体培养诱导体细胞胚发生,采用多重示踪技术和γ射线能谱分析法研究枸杞研究枸杞体细胞胚发生中对多种痕量金属离子的吸收动态,结果表明：（1）体胚发生中对多种痕量金属离子的吸收呈选择性。对多重示踪剂溶液中的23种核素,只吸收了其中的16种（Mn-52,Zn-65,Co-56,Co-60,As-74,mTc-95,Rh-99,V-48,Rb-83,Rb-84,Sr-85,Y-87,Y-88,Zr-88,Zr-89),而对另7种未吸收（Be-7,Tc-96,Ru-97,mRh-101,Sc-46,Ga-67和Cr-51)。（2）吸收呈动态变化,在同一发育期对不同的金属离子吸收率不同,如第10天,大部分金属离子的吸收率在5％／g左右,而se-75,Rb-83,Sr-85,Zr-89的则是10％－30％/g,在不同发育期对同一种金属离子的吸收率不同,如对Se-75的吸收总体呈上升趋势。第5天达第1峰值14％/g。随后缓慢下降,基本稳定,第15天后急剧上升,至第20天达第2个峰值20％／g;随着胚性细胞的分化与分裂,吸收既存在一致性,也存在非一致性。Se-75,Rb-83,Sr-85,Co-56和V－48等核素的吸收趋势相似,基本上呈上升曲线,而Mn-52的吸收趋势则类似正态分布曲线。     

防风组织培养中畸形胚状体的发生和控制

采用组织培养和石蜡切片法,分析多种因素对防风畸形胚状体发生和发育过程的影响及控制。结果表明,诱导正常体细胞胚高频发生的培养基组合是：启动胚性愈伤组织的培养基是MS 0．5mg／L 2．4-D,蔗糖浓度3％;分化培养基是MS 1mg／L 6-BA 0．2mg／L NAA 0．5mg／L ABA,蔗糖浓度4％～5％;成熟培养基是MS培养基,蔗糖浓度3％。结论：一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素,细胞分裂素在体细胞胚的分化和发育过程中起协同作用;蔗糖浓度、ABA、接种方法以及适宜的培养条件和培养容器等均可有效降低畸形胚状体的发生率。     

几种匍匐翦股颖成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

利用成熟种子作为外植体,分析了2,4-D对匍匐翦股颖胚性愈伤组织诱导与植株再生体系的影响,并对体细胞胚的发生过程进行了观察.实验结果表明,在2.0 mg/L 2,4-D 0.1 mg/L 6-BA时胚性愈伤组织的诱导频率最高.随着2,4-D浓度的增加,愈伤组织的诱导和分化能力明显下降.在再生过程中采用1.0 mg/L的6-BA达到了比较好的效果,愈伤组织的再生频率大部分在90%以上.同时发现适当提高肌醇浓度可以使苗长得较为粗壮.在实验中发现匍匐翦股颖的体细胞胚发生过程为球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚.     

枸杞髓组织培养中体细胞胚胎发生与过氧化物酶同工酶分析

枸杞髓组织在 MS+6 - BA0 .1mg/ L+NAA0 .5mg/ L培养基上诱导愈伤组织发生。在 MS+6 - BA0 .1mg/ L+NAA0 .5mg/ L+CH50 0 mg/ L培养基上继代培养 ,再转入 MS+6 - BA2 mg/L +NAA 0 .5mg/ L的分化培养基上进行分化培养。显微观察表明 ,在培养过程中愈伤组织细胞由非胚性细胞转变为胚性细胞 ,直至发育成体细胞胚胎和完整植株 ;电泳结果显示 ,体细胞胚胎发生的各阶段 ,其过氧化物酶同工酶发生相应的变化。     

紫叶酢浆草体细胞胚诱导和发育条件研究

通过组织培养方法,探讨生长素和细胞分裂素在紫叶酢浆苹体细胞胚诱导和发育过程中的作用。结果表明0．5mg／L NAA是诱导胚性愈伤组织最适宜的生长素浓度,添加一定比例的6-BA可有效促进体细胞胚的发生;在附加激素浓度分别低于0．1mg／LNAA和0．5mg／L6-BA的MS培养基上,体细胞胚能发育成完整的植株。因此,一定浓度的生长素是诱导紫叶酢浆草胚性愈伤组织的关键因素,细胞分裂素在体细胞胚的发生和发育过程中起增效作用。     

秦艽(Gentiana macrophylla Pall.)离体培养再生过程中体细胞胚的发生(简报)

本文以秦艽叶片和茎段作为外植体,通过离体培养对秦艽植株再生途径进行研究。愈伤组织在添加2mg/L 2,4-D和0.5mg/L BA的MS培养基上诱导,两周内可出现愈伤组织。愈伤组织在相同激素配比并附加500mg/L LH的MS培养基上继代。愈伤组织的分化在添加有0.1mg/L 2,4-D和0.5mg/L BA的MB培养基上进行。通过显微观测,疑似体细胞胚可以在叶片和茎段的愈伤组织上产生。形态学和组织学的分析进一步证实了秦艽离体再生过程中体细胞胚发生的现象。体细胞胚和合子胚一样,也经历球形、心形、鱼雷和子叶胚等发育时期。相对独立的结构说明秦艽的体细胞胚可能是单细胞来源。体细胞胚在愈伤组织的表面和内部都有出现。在本实验中,体细胞胚发生途径是在秦艽愈伤组织形成后观察到的唯一再生途径。     

枸杞体细胞胚发生过程中Ag^＋对痕量金属离子吸收的影响

We used callus of medical plant, Ningxia Lycium barbarum. L as material to induce somatic embryo genesis, and used multitracer technique and gamma-ray energy spectrum analytical method to study different concentration of AgNO3 on some absorption of trace metal ions during the somatic embryogenesis of Lycium barbarum. L. The results show that (1) when the concentration of AgNO3 is less then 50 mg/L, with the increase of AgNO3 concentration, the absorption rate of some metal ions is increasing, but when the concentration is excess of such concentration, the effects on the absorption rate are different. Ag+ has the effect of coordination, resistance or competition on the absorption of metal ions. (2) AgNO3 in suitable concentration will promote cell differentiation and somatic embryogenesis. When the concentration of AgNO3 is less then 50 mg/L, along with the increase of the concentration, the frequency of somatic embryogenesis is increased, and Ag+ has the promotion on the somatic embryogenesis of Lycium barbarum. L. While the concentration is up to 50 mg/L, it will mostly raise somatic embryogenesis in calli, the amount of callus is about 3 times as much as that of contrast group (in which AgNO3 is not added). When excess of this concentration point, Ag+ has toxic effect, and the somatic embryogenesis is inhibited remarkably.     

枸杞体细胞胚发生中Ca2+和ATPase的超微结构定位研究

研究2,4-D诱导枸杞体细胞胚发生中的作用及其与Ca~(2+)含量和ATPase活性时空分布动态之间的关系,以探讨2,4-D诱导植物体细胞胚发生的作用机理。采用超微细胞化学定位的方法,跟踪分析了体细胞胚发生与发育的不同时期,Ca~(2+)和ATPase活性的时空分布动态。结果表明:2,4-D是诱导离体培养的枸杞体细胞进入胚胎状态的关键激素。在含有2,4-D和不含2,4-D的培养条件下,分别诱导枸杞体细胞脱分化后,再转入除去2,4-D的MS培养基上,进行分化培养,结果前者可分化形成体细胞胚,因而称为胚性愈伤组织。后者在相同条件却不能分化形成胚,故称为非胚性愈伤组织。在2,4-D诱导枸杞的胚性愈伤组织中,胚性细胞分化早期的细胞间隙和细胞壁上均有Ca~(2+)沉淀。随着胚性细胞的分化、分裂和多细胞原胚形成,这时Ca~(2+)在细胞内的分布主要集中在细胞膜和液泡膜上;球形胚期在细胞核中Ca~(2+)呈弥散性分布。在此过程中,ATPase活性时空分布与Ca~(2+)的定位变化具有高度一致性,仅仅稍滞后于Ca~(2+)出现的时间。而在胚性细胞分化早期,ATPase活性同样位于质膜上,随后在液泡和细胞核都可见ATPase活性分布。而在非胚性愈伤组织中,则未见Ca~(2+)和ATPase活性呈时空动态分布,而且随着非胚性细胞的液泡化,无论是Ca~(2+)含量,还是ATPase活性都呈逐渐降低的趋势。表明Ca~(2+)和ATPase活性变化与2,4-D诱导的胚性细胞分化和发育密切相关。并由此推测,Ca~(2+)和ATPase的时空分布对胚性细胞分化中的信息传递和调控相关基因表达起着关键性作用。     

应用３１１—Ａ最优回归设计研究ＡＢＡ、ＰＥＧ４０００及AgNO3对落叶松体

采用三因素多项式回归３１１－Ａ最优设计方法对影响落叶松体细胞发生数量的ＡＢＡ、ＰＥＧ４０００和ＡgNO3的用量进行了研究,建立了华北落叶松正常体细胞胚发生数量与ＡＢＡ、ＰＥＧ４０００和ＡgNO3的数学模型,分析了落叶松体细胞 生数量试验因子的主效应和互作效应,优选了落叶松体细胞胚发生数量最佳结果的最佳技术组合方案为ＡＢＡ１８．９１３８mg/L,PEG400088.8007g/L与ＡgNO310.7513mg/L时,最佳体细胞胚数量应为１０７．５２７８个子叶胚／g.callus。实验结果表明,该方法是针对叶树体细胞胚胎发生过程中,主要激素种类与浓度配比,处理组合,科学、合理的培养基优化途径。     

ABA对枸杞体细胞胚发生的调节作用

Using Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) method, we determined the ABA contents of different stages in somatic embryogenesis. The results showed that endogenous ABA contents increased to maximum value twice during somatic embryogenesis. After first maximum value of ABA contents embryogenic cells were observed in callus, and simultaneously, there was a specific protein of somatic embryogenesis investigated by SDS-PAGE. This protein accumulates preferentially in embryogenic callus but not in transferred callus. So it is suggested that ABA could promote the expression of specific genes and the synthesis of embryogenic protein during somatic embryogenesis in Lycium barbarum L. and ABA play an important role in globular stage as well. In addition, treatment of non-embryogenic activity callus with 4 mumol/L exogenous ABA could stimulate somatic embryogenesis. And the ABA function mechanism in relation to somatic embryogenesis was discussed.     

激素对枸杞体细胞胚发生及可溶性蛋白质含量和组分的影响

以宁夏枸杞无菌苗叶片为材料,对体细胞胚发生过程中激素作用、可溶性蛋白质变化及体细胞胚发生频率进行了研究。发现不同激素处理、可溶性蛋白质含量、组分和体细胞胚发生频率均有一定的差异,三者之间存在着相关性。结果如下：（１）ＭＳ＿１、ＭＳ＿２和ＭＳ＿３三种培养基上继代的愈伤组织难以诱导形成体细胞胚,为非胚性愈伤组织;而从ＭＳ＿１、ＭＳ＿２和ＭＳ＿３分别转到ＭＳ＿０和ＭＳ＿４培养基上的愈伤组织体细胞胚发生频率高,属于胚性愈伤组织。其中以ＭＳ＿３转至ＭＳ＿０后的体细胞胚发生频率最高。（２）可溶性蛋白质ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明：非胚性愈伤组织有特异性蛋白质６７ｋＤ,胚性愈伤组织有特异性蛋白质３５ｋＤ和４４ｋＤ;蛋白质３３ｋＤ和６７ｋＤ受２,４－Ｄ调控,蛋白质４９ｋＤ、５７ｋＤ受６ＢＡ调控,而蛋白质３７ｋＤ、５１ｋＤ受２,４－Ｄ和６ＢＡ协同调控。     

枸杞组织培养中过氧化物酶和可溶性蛋白质的变化

枸杞(Lycium barbarum L.)叶组织切块接种在附加6-BA 0.5毫克/升和NAA 0.5毫克/升的MS固体培养基上可大量诱导产生愈伤组??织,培养至30天分化出芽,到50天长成小苗。过氧化物酶活性和可溶性蛋白质的含量分别在大量分生细胞团形成和芽形成时出现两个峰值,酸性蛋白质的种类也在这两个时期迅速增加。过氧化物酶同工酶阳极端出现的四条酶带中,A_2、A_3较稳定,A_1、A_4则在不同发育时期呈现规律性的变化。     

枸杞胚性细胞分化的超微结构和ATP酶的细胞化学定位研究

枸杞的胚性细胞多由愈伤组织表层的薄壁细胞分化而来,与愈伤组织中未分化的细胞相比,胚性细胞呈卵圆形,细胞核大,核仁明显,细胞质浓厚并含有丰富的细胞器,细胞壁较薄,细胞间有胞间连丝相通;胚性细胞发育到晚期细胞壁加厚,胞间连丝逐渐消失,细胞核向一端偏移,有大液泡形成;胚性细胞的第一次分裂多为均等分裂,形成二细胞原胚,继续分裂形成多细胞原胚;组成多细胞原胚胚体的细胞核大,核形状不规则,细胞质浓厚,细胞器丰富,在质体中出现淀粉的积累。在胚性细胞发育的早期,ATP酶活性主要位于质膜上,随后在液泡内和细胞核中都出现ATP酶活性的分布;随着胚性细胞壁的加厚,细胞壁加厚处和细胞间隙中也出现ATP酶活性反应;当多细胞原胚形成后,ATP酶活性反应主要定位于液泡膜上。由此分析了结构特征、ATP酶活性定位变化与胚性细胞分化的关系。     

Uptake Rate of Tracer MetalIons by a?Lycium barbaruma?Somatic Embryogenesis

The callus of medical plant Lycium barbarum L. in Ningxia was used as the materials for inducing somatic embryogenesis, and multitracer technique and γ-ray energy spectrum analysis were used for studying the rates of uptake of several tracer metal ions during embryogenesis. The results were: 1) Of 23 radionuclides, only 16 (Mn-52, Zn-65, Co-56, Co-60, As-74, Se-75, mTc-95, Rh-99, V-48, Rb-83, Rb-84, Sr-85, Y-87, Y-88, Zr-88 and Zr-89) were selectively absorbed, the other 7 (Be-7, Tc-96, Ru-97, mRh-101, Sc-46, Ga-67 and Cr-51) were not absorbed. 2) The rates of absorption of different metal ions were different at the same developmental stage. In 10 day culture, the rates of uptake of most metal ions were 5%/g, but that of Se-75, Ab-83, Sr-85 and Zr-89 were 10%-30%/g. The rates of absorption of the same metal ion were different at the same developmental stage, e.g. the rates of uptake of Se-75 were increasing in the course of development, two peaks of absorption appeared in the 5-7th and 15-20th days, being 14%/g and 20%/g. But, around 10th, the uptake rate decreased somewhat. The maximum uptake rate was 20%/g in 20th days. The uptake rates of some metal ions were with the somtimes keeping pace differentiation of embryonic cells. But sometimes not and division. The tendencies of the uptake rates of Se-75, Rb-83, Sr-85, Co-56 and V-48 were similar, indicating that the metal ions were accumulated in the callus during somatic embryogenesis. The uptake rate of Mn-52 was not only similar to other elements, but the variation was like normal distribution.     

枸杞体细胞胚发生中DNA代谢动态的立体计量

本文以宁夏枸杞无菌苗叶片为材料,离体培养,并诱导体细胞胚胎发生。根据细胞形态计量学原理,应用数学图像处理软件计量由光学底片经Ａ／Ｄ转换成的数学图像中的ＤＮＡ大分子,对枸杞体细胞胚发生过程中ＤＮＡ分子的代谢动态进行量化分析。结果表明：在整个体细胞胚发和过程中ＤＮＡ代谢呈现动态变化。非胚性细胞与胚性细胞期的量化值分别为１．８２％和１．９１％;在二细胞胚、四细胞胚、多细胞胚时期ＤＮＡ缓慢增长,随着胚性愈