一株肺炎克雷伯菌的分离鉴定及生物学特性分析

【背景】肺炎克雷伯菌是一种人兽共患机会致病菌,可引起多种动物感染且防治难度大。【目的】调查某犀牛驯养场病原菌存在情况。【方法】对随机采集到的6份犀牛粪便进行细菌分离鉴定、耐药情况及相关耐药基因、毒力基因筛查、小鼠致病性试验。【结果】分离到一株肺炎克雷伯菌,分离率为16.67%。分离株对强力霉素、多黏菌素B、杆菌肽等6种抗生素耐药,且携带有五大类共6种耐药基因。检出kfuBC、fimH、ureA、uge、wabG和wcaG这6种毒力基因。在致病性试验中接种浓度为1×10¹⁰ CFU/mL时小鼠死亡率高达80%,死亡小鼠肝脏、肺脏和小肠组织有不同程度的病变。【结论】该犀牛驯养场分离到的肺炎克雷伯菌耐药情况严重,耐药基因与耐药表型的复合率低,耐药机制复杂;毒力基因携带情况与致病性试验结果较符合,研究数据可为驯养场防治该菌的潜在感染提供参考。     

大熊猫肺炎克雷伯氏菌出血性肠炎病例报告

出血性肠炎是危害大熊猫的疾病之一,冶疗不当可造成重大损失。从以往大熊猫出血性肠炎病例中分离到的病原有大肠杆菌[1-3],普通变形杆菌,克雷伯氏菌族的产气夹膜杆菌[4]等。笔者在日本从事大熊猫研究工作期间,从两例出血性肠炎病例中,均分离到了肺炎克雷伯氏杆菌（Klebeie     

一株多重耐药鳗源肺炎克雷伯菌的分离鉴定

从患病花鳗鲡(Anguilla marmorata)的肝脏分离纯化到一株革兰氏阴性杆菌HM2。人工感染试验结果显示, HM2具有较强的致病力, 96h的LD50为9.98107 CFU/mL。经细菌培养特性、生理生化特性和ATB Expression半自动细菌鉴定仪鉴定, 结果符合肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的特征。以细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增, 获得大小为1393 bp的部分16S rRNA基因序列(Genbank登录号为JX282908), 将所测序列与GenBank中的序列进行BLAST比对并构建系统进化树, 结果表明其与肺炎克雷伯菌的同源性最高(100%), 在系统发育树上与肺炎克雷伯菌聚为一簇, 进一步确定菌株HM2为肺炎克雷伯菌。药物敏感性试验显示, HM2对亚胺培南、链霉素、阿米卡星3种药物敏感, 对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩、头孢曲松、头孢噻肟、头孢西丁、复合磺胺、磺胺甲基异恶唑/甲氧苄啶、利福平、萘啶酸、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、呋喃妥因、四环素、多西环素、氯霉素17种药物具有耐药性。研究结果为指导临床合理用药提供了科学依据。     

肺炎克雷伯氏菌VBNC状态转化突变株的筛选与特性研究

采用双亲本接合法对从文山湖富营养化水体中分离得到肺炎克雷伯氏菌进行Tn5转座子插入诱变,在含四环素和卡那霉素的LB培养基上获得接合子,利用饥饿冷冻高渗透压法对接合子进行细菌VBNC状态转化突变株的筛选和特性的研究。结果表明,带有卡那霉素基因的Tn5成功地插入到了肺炎克雷伯氏菌的染色体中,在双抗性培养基上获得约2.3×104 cell/mL的接合子,转座效率为6.58×10-4。对多个接合子和对照肺炎克雷伯氏菌的诱导、筛选及比较,发现KPQT-7是最快进入VBNC状态的突变株,该突变株在胁迫诱导9d后超过30%的细胞都进入了VBNC状态,而对照的肺炎克雷伯氏菌至少要在诱导21d后才大部分进入VBNC状态。在此基础上,对VBNC转化突变株KPQT-7作进一步的遗传学分析将会为细菌VBNC状态分子机理的研究奠定坚实的基础。     

呼吸道感染肺炎克雷伯氏菌的质粒图谱分析

从临床住院病人痰及咽拭标本中分离出肺炎克雷伯氏菌９８株,占培养菌１０．６％。对该菌抽样做质粒图谱分析显示,患者主要为携带有三种即３２．７×１０６ｄａｌ、１×１０６ｄａｌ、０．５×１０６ｄａｌ质粒的肺炎克雷伯氏菌引起的。此方法简便,快速可靠,对进行病源菌流行病学调查有一定参考及实用价值。     

利用15N稀释法研究小麦接种肺炎克雷伯氏菌联合固氮作用

利用15N稀释法研究小麦接种肺炎克雷伯氏菌(Ktebsiella pneumoniae)43菌株的联合固氮作用。在小麦种子萌动后播种于土盆中,用43菌株接种,定苗后每盆施人15N丰度为30％的标记硫酸铵25rag,培育70d后测定根、茎的干物质重、含氮量和15N％原子趣,并用乙炔还原法测定根系存在的固氮酶活性。结果表明,小麦根系存在固氮有机体,直接为植株提供氮素占其总氮量的15.3—22．1％,干物质重和15N％含量与对照相比差异显著。     

肺炎克雷伯氏菌毒力因子的研究进展

摘要:肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)可天然合成1,3-丙二醇、2,3-丁二醇和3-羟基丙酸等大宗化学品,是近年来的研究热点,但其致病性限制了工业应用。本文综述了该菌的毒力因子,包括菌毛、受体、荚膜多糖、内毒素、铁载体,以及近年报道的其他因子。具体内容涉及毒力因子的编码基因、表达蛋白、参与的代谢活动,以及侵染宿主和抗宿主免疫反应的机制。此外,根据近年来代谢工程和合成生物学领域的新进展,提出了消除或弱化该菌毒性的策略,并对这些策略的可行性进行了讨论。     

PCR鉴定肺炎克雷伯菌的强毒性血清型

目的:了解肺炎克雷伯菌强毒性血清型K1、K2、K54和K57型菌株在我国重庆、北京、深圳三地的分布及流行趋势。方法:采用PCR对310株肺炎克雷伯菌临床分离株进行血清型K1、K2、K54和K57检测。结果:310株菌中,K1、K2、K54和K57血清型分别占14.2%、9.4%、6.5%和4.2%;来自呼吸系统标本分离株中的K1血清型菌株在4种检测的强毒血清型中占首位,为呼吸系统总数的17.4%。结论:310株肺炎克雷伯菌的4种强毒性血清型中,K1血清型菌株所占比例高,较为流行。     

以gfp为报告基因研究蛋白亚细胞定位

以gfp作为报告基因研究了烟草中蛋白亚细胞定位。就表达系统选择、蛋白亚细胞定位软件分析、载体构造、材料选择等问题作一简要总结。     

Identification and characterization of a cystathionine beta/gamma-lyase from Lactococcus lactis ssp. cremoris MG1363

This paper describes the nucleotide sequence of a gene encoding cystathionine beta/gamma-lyase from Lactococcus lactis ssp. cremoris MG1363, its overexpression in Escherichia coli and some functional characteristics of the purified recombinant protein.     

融合基因gfp-lacZ在克隆载体pGEM3Z-f(+)中高效表达

目的:将gfp基因克隆到pGEM3Z-f( )载体。方法:将PCR扩增得到的gfp基因插入到pGEM3Z-f( )质粒的SmaⅠ位点,构建重组质粒转化大肠杆菌DH5α。结果:含重组质粒的大肠杆菌在自然光下呈现黄绿色,而在涂X-gal的培养基上它不仅发出黄绿色荧光,而且还出现蓝色。结论:gfp基因的插入没有引起载体上lacZ基因的失活,而且形成的gfp-lacZ融合基因在大肠杆菌得到了表达。表达产物不仅具有GFP活性,而且保持了β-半乳糖苷酶的生物学活性。     

Bacterial endophyte-enhanced phytoremediation of the organochlorine herbicide 2,4-dichlorophenoxyacetic acid

2,4-Dichlorophenoxyacetic acid is a selective systemic herbicide for the control of broad-leaved weeds, which is widely used throughout the world. The persistence of its residues and its potential to migrate in the soil make it necessary to reduce its concentrations in contaminated soil and groundwater. The nature of this compound makes it particularly toxic to the broad-leaved plants, such as the poplar (Populus) and willow (Salix), which are often used in phytoremediation projects. We describe the inoculation of a model plant, the pea (Pisum sativum), with a genetically tagged bacterial endophyte that naturally possesses the ability to degrade 2,4-dichlorophenoxyacetic acid. The results showed that this strain actively colonized inoculated plants internally (and in the rhizosphere). Inoculated plants showed a higher capacity for 2,4-dichlorophenoxyacetic acid removal from soil and showed no 2,4-dichlorophenoxyacetic acid accumulation in their aerial tissues. This demonstrates the usefulness of bacterial endophytes to enhance the phytoremediation of herbicide-contaminated substrates and reduce levels of toxic herbicide residues in crop plants.     

用gfp基因标记法研究大豆根瘤菌在大豆根部定殖结瘤情况

采用三亲本杂交的方法,将绿色荧光蛋白基因(gfp)转入高效、抗逆、广适应性的快生大豆根瘤菌Sinorhizobium frediiCCBAU 01287中,获得含gfp基因的转基因菌株CBAU 01287(G);平板传代和共生检测表明:外源质粒在CCBAU 01287中能够自我复制,稳定遗传。进一步研究表明,gfp标记菌CCBAU 01287(G)可用于实时监测根瘤菌在大豆根部的早期定殖情况和定殖密度的测定;标记菌株对大豆的生长及生物量的积累与出发菌株的效果无显著差异。     

gfp基因标记的重组杆状病毒对棉铃虫幼虫的侵染历程

 用携带杆状病毒极晚期多角体蛋白基因启动子驱动gfp表达的重组病毒rHa FGP感染棉铃虫三龄幼虫 .在感染后不同时间取样 ,分离不同组织 ,制片 ,置于倒置荧光显微镜下观察基因的表达 .结果发现 ,随着感染时间的推移 ,荧光产生的部位出现更替 ,随后荧光强度也发生相应的变化 .从荧光出现的先后初步推断出杆状病毒对昆虫幼虫的侵染路线 :中肠上皮→血淋巴→气管系统→脂肪体 真皮 .在幼虫感染后 12h荧光即出现于中肠细胞中 ,表明此时已有极晚期蛋白表达 .说明利用杆状病毒极晚期基因启动子驱动苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因 (cry)表达 ,从而提高杆状病毒的杀虫毒力是可行的