从干扰素诱导蛋白MxA筛选抗乙肝病毒活性肽

黏病毒抗性蛋白A（myxovirus resistance protein A,MxA）是由干扰素诱导的具有重要抗乙肝病毒（hepatitis B virus,HBV）功能的蛋白质,我们前期工作发现,MxA主要依赖其中心互作结构域（central interactive domain,CID）与病毒直接相互作用发挥功能,但其具体的抗病毒功能区以及功能区是否具有独立的抗病毒活性仍不清楚。本研究拟鉴定MxA蛋白上的抗乙肝病毒活性肽。首先从全长MxA构建缺失突变体ΔCID和截短体CID,以HepG2-2-15细胞为病毒模型,分别转染空载质粒、MxA、ΔCID和CID,免疫荧光法检测转染效率,Western印迹法检测质粒表达,酶联免疫法测定细胞培养液中HBsAg、HBeAg的量及荧光定量PCR法测定乙肝病毒 DNA的量,评估CID段的抗乙肝病毒活性。根据CID段的晶体结构,缩短肽段长度,构建α1、α2、α3等9段肽段质粒,鉴定各段的抗乙肝病毒活性和细胞毒性（MTT法）。运用计算生物学手段--分子对接法预测MxA蛋白与病毒相互作用的模式和位点。结果显示,ΔCID、CID和9段肽段质粒的序列及表达正确,9段肽段的表达量未见显著性差异,无显著的细胞毒性。CID组和黏病毒抗性蛋白A组较对照组乙肝病毒的复制水平显著降低,CID组细胞上清中HBsAg、HBeAg及乙肝病毒 DNA的量分别减少了55.57%±8.48%、68.37%±6.24%、66.67%±6.40%,P＜0.01;MxA组的3个指标分别减少了61.63%±3.11%、70.77%±7.25%、73.73%±6.18%,P＜0.01;ΔCID组较对照组无明显变化。9段肽段中α1组较对照组HBsAg、HBeAg及乙肝病毒 DNA的量有显著下降,分别减少了48.33%±1.70%、70.67%±3.30%、68.95%±2.55%,P＜0.001,表明α1对乙肝病毒具有强抑制活性。分子对接的结果显示,384 ～ 408位氨基酸是MxA蛋白与病毒互作的关键位点,该区域落在α1肽段上,验证了α1是MxA蛋白抗乙肝病毒及与乙肝病毒相互作用中的关键区段。本研究筛选并鉴定出人干扰素诱导蛋白MxA上最有效的抗乙肝病毒活性肽α1,研究结果为抗乙肝病毒多肽类新药的研发奠定了基础。     

红树木榄生境中可培养细菌物种多样性及其体外抗乙肝病毒活性研究

红树生境中微生物菌群丰富，其次生代谢产物结构新颖，是挖掘新型药物的重要来源。该研究利用纯培养技术和16S rRNA分子生物学技术确定细菌种属，并进行物种多样性分析；以HepG2.2.15细胞株为模型，通过MTT和PCR技术测试细菌代谢产物的抗乙肝病毒活性；使用LC-HRMS技术对活性菌株代谢产物进行初步分析，初步评价木榄沉积物、根、叶以及胚轴的可培养细菌多样性以及细菌代谢物生物活性，寻找抗乙肝病毒的药源菌株。结果表明：(1)共获得细菌59种，分属于4门5纲14目23科36属，其中芽孢杆菌为优势菌属；菌株GXIMD07402、GXIMD07665、GXIMD07384分别为Pseudooceanicola属、Thioclava属和Aestuariibaculum属的潜在新种。(2)抗乙肝病毒活性结果显示GXIMD07366、GXIMD07616、GXIMD07384、GXIMD07550、GXIMD07445X提取物能显著降低HepG2.2.15细胞上清液中HBV DNA水平(P<0.05),抑制率分别为51%、47%、63%、52%、47%。(3)初步鉴定强活性菌株GXIMD07...     

从几次国际会议看干扰素对慢性乙型肝炎的临床研究

一、一般情况近来采用干扰素抗乙型肝炎病毒的研究进展较快。单从几次国际会议的论文来看,已将基础研究与临床科研结合起来,并将干扰素的临床科研提到一个较重要的地位。会议论文也逐年增多,1986年于加拿大召开的国际第七届病毒学会议,抗乙肝病毒的临床科研论文只有3篇,1988年在美国召开的第二届国际抗病毒研究会议,抗乙肝病毒的论文有8篇,1988年在日本召开的国际干扰素学术年会,抗乙肝病毒研究报     

深海宏基因组文库克隆子发酵产物的生物活性筛选

目的:对前期构建的深海宏基因组文库克隆子发酵产物进行生物活性筛选.方法:利用CCK8法及琼脂扩散法和双层琼脂法进行了细胞毒活性及抗菌活性筛选,利用荧光定量PCR法进行了抗乙肝病毒活性筛选.结果:筛选发现3个具有细胞毒活性的混合克隆子.HPLC指纹图谱分析表明这3个混合克隆子具有与大肠杆菌宿主对照不同的指纹图谱,其活性与...     

西印度醋栗化学成分及活性研究进展

西印度醋栗为大戟科叶下珠属植物,民间广泛用于治疗高血压、糖尿病等,提取物具有抗菌、降血压、细胞毒等活性。化学成分主要是以倍半萜为主的萜类成分,具有较好的降血压、细胞毒、抗乙肝病毒等活性。因此,西印度醋栗的化学成分值得深入研究。     

抗乙肝病毒药物市场分析 *

乙型肝炎(乙肝)病毒(hepatitis B virus,HBV)是引起病毒性乙肝的主要病原体,依然是影响人类健康的全球性问题。干扰素和核苷(酸)类似物是国内外获批上市的主要抗乙肝病毒药物。替诺福韦和恩替卡韦在国外抗乙肝病毒药物市场上占据巨大的份额,而早期推出的拉米夫定和阿德福韦酯因其耐受性和安全性等原因所占市场份额逐年减少。国外有39种抗乙肝病毒新药正处于临床阶段。国内临床上使用更多的是口服核苷(酸)类似药物,尤其是恩替卡韦近年来占近一半抗乙肝药物市场。抗乙肝病毒药物城市零售前10的企业市场份额占整个零售的91.8%,市场集中度较高。虽然国内乙肝新药研发水平与欧美还存在较大差距,但是在国内创新政策推动下,出现了东阳光、正大天晴等20余家从事研发企业,并取得一定的成效。基于我国抗乙肝病毒药物发展困境,提出了继续完善抗乙肝病毒药物医保政策、部署和实施乙型肝炎重大专项等研发项目、推进产学研用深度融合等对策建议。     

中药胡黄连的研究进展

胡黄连为我国传统中药,一向依赖进口,原植物为印度胡黄连（ＰｃｒｏｒｈｉｚａｋｕｒｒｏｏａＲｏｙｌｅｅｘＢｅｎｔｈ）。本世纪６０年代,在西藏和云南发现西藏胡黄连（Ｐ．ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉｆｌｏｒａＰｅｎｎｅｌ）并栽培作为印度胡黄连的代用品。近年来,国外研究发现印度胡黄连根茎中环烯醚萜甙类成分具有显著抗乙肝病毒活性、保肝降酶等作用,引起了人们关注。本文对胡黄连研究作了系统回顾,为西藏胡黄连进一步开发利用提供参考     

西印度醋栗的化学成分及生物活性研究进展

西印度醋栗为大戟科叶下珠属常绿灌木或乔木,主产泰国、越南、缅甸、老挝等地,中国云南西双版纳和元江有引种栽培。该植物果实可食用,枝叶、根茎、果实等在东南亚各国被广泛用于治疗高血压、哮喘、糖尿病、皮炎、发烧、天花等,印度尼西亚、泰国、印度等地区亦用其叶做蔬菜食用。有关其化学和药理活性研究,主要集中于根、茎和枝叶,根、茎主要含倍半萜、二萜和三萜,叶则主要为黄酮类成分。部分化合物显示有显著的抗乙肝病毒、抗菌、抗炎、保肝和降压等活性,其中,多个降没药烷型倍半萜对乙肝病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）的IC50值为0.8-36 ?M。构效关系研究表明,倍半萜结构中C-5位的缩酮和C-13位的糖基取代可能对抗HBsAg和HBeAg的选择性有贡献。本文综述1966-2020年西印度醋栗的化学成分和药理活性研究进展,为该植物的深入研究和开发利用提供科学参考和依据。     

甘肃省1～59岁人群乙型肝炎病毒感染的血清流行病学调查

为了解甘肃省现阶段乙型肝炎病毒感染的现状,分析乙肝病毒感染血清学指标的变化,采用多阶段整群抽样的方法,抽取5个县区1~59岁人群共2200人进行调查。以ELISA方法对血清标本统一检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)、乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)。结果显示,甘肃省1~59岁调查人群HBsAg阳性率为3.59%,抗-HBs和抗-HBc阳性率分别为49.45%、16.33%;HBV总感染率为27.50%。比1992年HBV总感染率下降了36.48%,HBsAg阳性率下降了45.94%;1~4岁儿童HBsAg阳性率仅为1.13%,比1992年(5.34%)下降78.84%。甘肃省1~59岁人群乙肝病毒感染率下降,抗-HBs阳性率升高,尤其在1~4岁儿童变化更为明显;甘肃省乙肝感染逐步呈现由中高流行转向低流行区的趋势;乙肝疫苗免疫取得显著效果。     

西印度醋栗的化学成分及药理活性研究进展

西印度醋栗为大戟科叶下珠属常绿灌木或乔木,主产于泰国、越南、缅甸、老挝等地,中国云南西双版纳和元江有引种栽培。该植物果实可食用,枝叶、根茎、果实等在东南亚各国被广泛用于治疗高血压、哮喘、糖尿病、皮炎、发烧、天花等,印度尼西亚、泰国、印度等地区亦用其叶做蔬菜食用。有关其化学和药理活性研究,主要集中于根、茎和枝叶。根、茎主要含倍半萜、二萜和三萜,枝叶则主要为黄酮类成分。部分化合物显示有显著的抗乙肝病毒、抗菌、抗炎、保肝和降压等活性,其中,多个降没药烷型倍半萜对乙肝病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的IC₅₀值为0.8～36 μmol·L^-1,构效关系研究表明,倍半萜结构中C-5位的缩酮和C-13位的糖基取代可能对抗HBsAg和HBeAg的选择性有贡献。该文综述了1966—2020年西印度醋栗的化学成分和药理活性研究进展,为该植物的深入研究和开发利用提供科学参考和依据。     

Synthesis and antiviral evaluation of novel heteroarylpyrimidines analogs as HBV capsid effectors

New modifications to the scaffold of previously reported HBV capsid assembly effectors such as BAY 41-4109, HAP-12 and GLS4 were explored. The anti-HBV activity in the HepAD38 system, and cytotoxicity profiles of each of the new compounds has been assessed. Among them, five new iodo- and bromo-heteroarylpyrimidines analogs displayed anti-HBV activity in the low micromolar range.     

Colorimetric Assay System for Screening Antiviral Compounds against Hepatitis B Virus

A highly sensitive, rapid, and accurate assay system was developed for the in vitro evaluation of anti-hepatitis B virus (anti-HBV) agents. Chronic HBV-producing HB611 cells were used in combination with immunoaffinity purification, polymerase chain reaction (PCR), and hybrid capture detection. HB611 cells were incubated with putative anti-HBV agents for 7 days in 96-well microtiter plates. HBV was purified from HB611 cell culture media using immunoaffinity purification. The HBV DNA was extracted, amplified with PCR, and assayed using a hybrid capture colorimetric method. This assay provided quantitative detection of extracellular HBV DNA from 25 μl of cell culture media. Using the colorimetric method, we found that 50% effective concentration levels of several known anti-HBV agents (HPMPA, PMEDAP, PMEA and others) were similar to those reported in studies using Southern blot analysis. These results demonstrate that this new and easily automated colorimetric assay system can be used for the rapid and accurate assessment of anti-HBV compound selectivity.     

抗乙型肝炎病毒单克隆抗体药物的临床前药效学评价

由乙型肝炎病毒（HBV）感染导致的病毒性肝炎是世界范围内的一个重大公共卫生问题,抗HBV抗体药物乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）是阻断乙型肝炎母婴传播和移植性感染的主要用药。但HBIG本身存在一些问题,而重组抗HBV单克隆抗体能成为其有效替代物。在重组抗HBV抗体技术相对成熟的情况下,重组抗HBV单克隆抗体药物功能性评价体系的缺失成为阻碍抗HBV单克隆抗体药物研发的重要因素。本文就现有的抗HBV单克隆抗体药物的评价方法和体系进行综述。     

Fibronectin is essential for hepatitis B virus propagation in vitro: may be a potential cellular target?

Previous studies in our laboratory strongly suggested that fibronectin was upregulated by hepatitis B virus (HBV) in HepG2.2.15 cells. Report by Budkowska A also indicated that human liver fibronectin could bind HBV in a species-restricted manner. Therefore, it is reasonable to ask whether inhibiting fibronectin expression might have anti-HBV activity and whether fibronectin might be developed as a new potential cellular target for anti-HBV drugs. By using fibronectin antisense oligonucleotide (ASODN), fibronectin antibody, and Protocatechuic aldehyde (PA), we were able to show that HBV productions in HepG2.2.15 cell culture were reduced in a dose-dependent manner by fibronectin inhibition. In addition, we found that treatment with ASODNs, fibronectin antibody, and PA did not affect HepG2.2.15 cell viability. Furthermore, we observed that fibronectin inhibition sensitized HBV to anti-HBV drugs. In summary, this study demonstrates that fibronectin is essential for HBV propagation and also provides some evidences for the potential of fibronectin as a new cellular target for HBV infection therapy.     

靶向C—Raf-1基因的反义核酸抗乙型肝炎病毒活性研究

目的：通过体内外实验验证靶向c-Raf-1基因的反义核酸是否具有抑制乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法：设计靶向c-Raf-1基因的反义核酸,并在细胞水平进行体外抗HBV活性筛选,通过RT-PCR检测c-Raf-1基因mRNA水平的变化,通过体内药效学实验进一步验证反义核酸的抗HBV效果。结果：经体外筛选,靶向c-Raf-1基因的反义核酸Raf-3145具有相对明显的抑制HBV表面抗原（HBsAg）的作用,并可剂量依赖性地抑制c-Raf-1基因的表达;体内药效学结果显示,反义核酸Raf-3145在30 mg/kg剂量下对HBsAg的表达具有一定的抑制作用。结论：经体内外活性评价,初步确定了靶向宿主基因c-Raf-1的反义核酸具有一定的抑制HBsAg表达的活性,也进一步验证了c-Raf-1基因可以作为抗HBV药物设计的候选靶点。     

Synthesis, biological evaluation and structure-activity relationships of glycyrrhetinic acid derivatives as novel anti-hepatitis B virus agents

Fifty-seven derivatives of glycyrrhetinic acid (GA) were synthesized, and their anti-hepatitis B virus (HBV) activity was evaluated in HepG 2.2.15 cells. Among them, sixteen compounds showed greater anti-HBV activity than GA, especially, compounds 29, 32, 35, 41 exhibited significantly inhibitory activities against HBV DNA replication with IC(50) values of 5.71, 5.36, 8.90 and 9.08 μM, respectively. The structure-activity relationships (SARs) of GA derivatives were discussed for exploring novel anti-HBV agents.     

泛素特异性蛋白酶18抑制IFNα抗HBV活性但并不抑制IFNλ抗HBV的活性

干扰素α（IFN-α）是临床最常用的抗乙型肝炎病毒（HBV）药物之一。泛素特异性蛋白酶18（USP18）被证实是抑制IFN-α抗HBV活性的因子,但USP18是否对干扰素λ(IFN-λ)抗HBV有影响还尚未可知。为了明确USP18对IFNλ抗HBV活性的影响,本研究以HepG2.2.15细胞作为乙肝体外模型,采用脂质体转染法分别向细胞转染pEGFP-USP18、PEGFP-N1经 48 h,再经IFN-α和IFN-λ处理24 h,分为阴性对照组﹑USP18过表达+IFN-α组﹑空载组+IFN-α组﹑USP18过表达+IFN-λ组﹑空载组+IFN-λ组。采用Western印迹、RT-qPCR和ELISA检测各组的乙肝病毒标志物、STAT1/pSTAT1和下游的干扰素刺激基因(ISGs)的表达。结果显示,与阴性对照组和空载组相比,USP18蛋白在过表达组明显升高（P<0.05）,过表达细胞模型构建成功;在IFN-α处理的两组中,空载组中HBsAg、HBeAg、HBcAg及HBV-DNA的表达均低于USP18过表达组,差异有统计学意义（P<0.05）。而IFN-λ处理组中,乙肝病毒标志物的差异不明显。在IFN-α处理组中,空载组的ISG15、MxA、IFIT1和pSTAT1表达均高于USP18过表达组,差异有统计学意义（P<0.05）,而在IFN-λ处理组中ISGs和 pSTAT1的表达无明显差异。上述结果证实,USP18可通过抑制JAK/STAT信号通路的激活来减弱IFN-α抗HBV的活性。研究还证实,IFN-λ可发挥抗HBV的作用,USP18不通过JAK/STAT信号通路抑制其抗HBV活性。     

Amino acid prodrugs of NVR3-778: Design,synthesis and anti-HBV activity

A series of amino acid prodrugs of NVR3-778, a potent anti-HBV candidate currently under phase II clinical trial, were designed and synthesized as new anti-HBV agents. Except for 1e, all of them displayed roughly comparable anti-HBV activity (IC₅₀, 0.28–0.56 µM) to NVR3-778 (IC₅₀, 0.26 µM). Compound 1a, a l-valine ester prodrug of NVR3-778, was found to show significantly improved water solubility (0.7 mg/mL, pH 2) as we expected, and lower cytotoxicity (CC₅₀ > 10 µM) than NVR3-778 (CC₅₀, 4.81 µM). Moreover, 1a also exhibited acceptable PK properties and comparable in vivo efficacy in HBV DNA hydrodynamic mouse model to that of NVR3-778, suggesting it may serve as a promising lead compound for further anti-HBV drug discovery.