一种新型醛糖还原酶抑制剂的合成

以对硝基苯甲酸为原料,经氯化、酰化、还原制得对氨基苯甲酰甘氨酸,再与苯甲酰氯进行酰化反应,合成了一种新型醛糖还原酶抑制剂——对苯甲酰胺基苯甲酰甘氨酸。     

一种新型醛糖还原酶抑制剂的合成(Ⅱ)

以对硝基苯甲酸为原料,先制成酰氯,然后经酰化,还原反应制得中间产物对氨基苯甲酰甘氨酸,再与乙酰水杨酰氯进行酰化反应,合成一种新型醛糖还原酶抑制剂—对乙酰水杨酰胺基苯甲酰甘氨酸。     

精氨酸脱羧酶和谷酰胺转移酶活性的测定方法

介绍了一种测定精氨酸脱羧酶和谷酰胺转移酶活性的方法－苯甲酰化－紫外检测,并鉴定了该方法的灵敏性。     

植物体内微量多胺的分离和测定

目前对植物组织内多胺的含量主要是将植物材料的直接提取液和苯甲酰氯或和丹磺酰氯反应后,利用高效液相色谱仪测定。此方法在测定多胺含量较高的胚、芽和幼果时尚可,但对含量较少的材料如开花后一个月的果实,则无法测定。本文采用阳离子交换树脂来分离和浓缩多胺。对Flores和Galston的方法作了改进,用以测定梨果实中微量的多胺,减少了干扰,提高了灵敏度。     

云南红豆杉紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶基因的克隆及定性

通过RACE技术,克隆了云南红豆杉紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶基因(TyTBT),该酶催化2-去苯甲酰-7,13-二乙酰巴卡亭Ⅲ生成7,13-二乙酰巴卡亭Ⅲ,是紫杉醇合成途径中的关键酶之一.TyTBT基因cDNA全长1481 bp,含有1 320 bp的开放读码框,编码440个氨基酸的多肽,分子量为50 050 Da,等电点为6.17.氨基酸序列比对表明TyTBT同植物酰化酶家族的其它成员有较高的相似性,超过67%,同东北红豆杉和曼地亚红豆杉的紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶氨基酸序列的一致性和相似性达到最高,分别为95%和96%.广泛地比对分析证明这种较高的相似性在红豆杉属的其它酶家族中具有普遍性,进化树分析表明同东北红豆杉和曼地亚红豆杉的紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶(TBT)的相似性高于紫杉醇合成途径中的其它酰化酶.     

紫杉醇酰化酶多基因家族成员克隆时的引物设计与PCR参数优化

紫杉醇酰化酶多基因家族是催化红豆杉紫杉醇合成过程中的各酰化酶基因的总和。该基因家族的不同成员之间具有很高的保守性,本实验以该基因家族中的紫杉烷2α-O-苯甲酰转运酶（TBT）基因克隆为例,从引物设计与PCR参数优化角度,总结了针对类似高保守性多基因家族的基因克隆的经验,表明分别在保守性极高部位设计第一次扩增引物及在保守性极低部位设计巢式引物,并采用touchdown PCR程序及高效能的Zaq DNA聚合酶是成功的关键。     

一株产多种β-内酰胺类抗生素酰化酶菌株的筛选

为了从大量的候选菌株中快速筛选头孢菌素酰化酶产生菌,设计并合成了一系列头孢菌素酰化酶的底物类似物。这些酰胺类的底物类似物由二部分组成,一部分为与头孢菌素相同或相似的侧链,另外一部分为发色基团或便于检测的基团。它们被酰化酶水解酰胺键以后可以方便快速的检测,因此用于对大量菌株进行快速筛选。采用这些化合物筛选到6株酰化酶阳性菌株。其中菌株ZH0650能够同时水解GL7ACA和多个底物类似物。进一步研究表明,该菌至少产生3种酰化酶,ADNABA酰化酶,青霉素G酰化酶和头孢菌素C酰化酶。我们初步纯化了ADNABA酰化酶和青霉素G酰化酶,并对头孢菌素C酰化酶的活力进行了鉴定。这是首次报道的可以产生青霉素G酰化酶和头孢菌素酰化酶等多种酰化酶的菌株,具有良好的应用前景。     

一株产多种β-内酰胺类抗生素酰化酶菌株的筛选

为了从大量的候选菌株中快速筛选头孢菌素酰化酶产生菌,设计并合成了一系列头孢菌素酰化酶的底物类似物。这些酰胺类的底物类似物由二部分组成,一部分为与头孢菌素相同或相似的侧链,另外一部分为发色基团或便于检测的基团。它们被酰化酶水解酰胺键以后可以方便快速的检测,因此用于对大量菌株进行快速筛选。采用这些化合物筛选到6株酰化酶阳性菌株。其中菌株ZH0650能够同时水解GL-7ACA和多个底物类似物。进一步研究表明,该菌至少产生3种酰化酶,AD-NABA酰化酶,青霉素G酰化酶和头孢菌素C酰化酶。我们初步纯化了AD-NABA酰化酶和青霉素G酰化酶,并对头孢菌素C酰化酶的活力进行了鉴定。这是首次报道的可以产生青霉素G酰化酶和头孢菌素酰化酶等多种酰化酶的菌株,具有良好的应用前景。     

人源色氨酰tRNA合成酶H130R突变体的酶活和初步晶体学分析（英文）

色氨酰t RNA合成酶(tryptophanyl-t RNA synthetase,Trp RS)催化色氨酸的活化及其特异性t RNA的氨酰化,为蛋白质合成提供原料。在IFN-γ刺激下,人源细胞中的Trp RS通过结合血红素增强其氨酰化活性,以调节吲哚胺2,3-双加氧酶表达水平增高所引起的色氨酸缺失。体外研究发现,锌离子和血红素竞争性结合人源Trp RS以增强其氨酰化活性。然而,由于一个氨基酸位点H130R的突变,牛和鼠的Trp RS以及人的H130R突变体都不再受锌离子和血红素的影响,并具有高氨酰化活性。H130R Trp RS模拟了一种结合着锌离子或血红素的高活性构象,但目前还没有对这种构象的结构描述。为了阐明H130R决定Trp RS氨酰化活性种属特异性的原因,以及锌离子和血红素的结合位点,作者对人H130R Trp RS进行了活性分析和初步晶体学研究,此工作将为锌离子和血红素调节Trp RS氨酰化活性的机制研究奠定基础。     

高效液相色谱法测定茶鲜叶中游离多胺含量

建立高效液相色谱测定茶鲜叶中腐胺(Put)、亚精胺(Spd)和精胺(Spm)3种游离多胺的方法。样品经过67 g/L聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)吸附茶多酚,5%(体积分数)高氯酸低温提取,苯甲酰氯衍生后进行色谱分析,采用Wondasil C18(4.6 mm×150 mm)色谱柱,以甲醇和水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 m L/min。结果表明:3种多胺在5~60 nmol/L浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数r0.980,检出限为0.11~0.41 nmol/L,定量限0.55~2.05 nmol/L,加标回收率为88.5%~105.5%,相对标准偏差(RSD)为0.99%~7.20%。利用此方法分别对茶鲜叶中芽、叶和茎的多胺含量进行测定,发现3种样品中多胺均有检出。该方法准确、灵敏度高且重现性好,为茶鲜叶中多胺含量的研究提供检测手段。