黑斑蛙小观察

黑斑蛙小观察吕秀芬,李春林（首都师范大学生物学系１０００３７）张兰萍,邢俊（北京崖头镇邹家完小学）黑斑蛙是青蛙的一种,在我国分布很广,是教学和科学研究的好材料。引导学生做些这方面的实验和观察,既能巩固所学知识,又能培养搞科学实验的兴趣。现就黑斑蛙胚胎...     

野生黑斑蛙与驯食黑斑蛙的舌组织学比较研究

由于环境污染以及人工捕杀等因素,野生黑斑蛙（Rana nigromaculata）的数量已远不能满足人们的需求,因此,人工驯食蛙养殖逐渐兴起。但是,要保证驯食蛙的产量,第一步就是解决食物的摄取问题。而舌头是一个重要的摄食和味觉器官,直接影响了其对食物的摄取与否。因此,本研究采用光学显微技术、扫描电子显微技术及透射电镜超微技术对野生黑斑蛙和驯食黑斑蛙的舌背表面及内部超微结构进行了研究。石蜡切片研究表明,野生黑斑蛙与驯食黑斑蛙二者都有角质化的丝状乳头和菌状乳头。丝状乳头分布在整个舌背表面,并由主乳头和次级乳头构成。菌状乳头呈圆形,位于舌尖和舌缘;去除上皮后,菌状乳头的上皮细胞呈火山状,顶部有一个味蕾腔。但二者在舌组织学结构上也存在一定的差异：野生黑斑蛙舌表面的丝状乳头相对更加发达,且角质化程度比驯食黑斑蛙更明显。通过扫描电镜超微结构的比较发现,在野生和驯食黑斑蛙中都可以观察到位于背表面尾部区域舌侧的大尺寸轮廓乳头,以及由上皮褶皱组成的叶状乳头,并由平行的凹槽分隔开。二者的舌组织扫描亚显微结构也存在一定的差异：野生黑斑蛙舌表面的丝状乳头更加发达,其角质化程度比驯食黑斑蛙更大,这与石蜡切片研究...     

黑斑蛙繁殖期血浆性激素浓度变化的研究

本文研究了黑斑蛙在繁殖期血浆性激素的变化,得到如下结果:1.雄蛙在繁殖期吋,精巢饱满,活动精子多、血浆雄激素含量高;繁殖期过后,精巢萎缩,活动精子数少、血浆雄激素含量低。说明雄激素影响精子的形成与成熟;2.雌蛙在排卵前,卵巢较重、有不同发育阶段的卵泡、血浆雌激素含量高;排卵后,卵巢较轻,有残留小卵和残留物,血浆雌激素含量低。说明雌激素对卵和副性征的发育有关。     

黑斑蛙乳酸脱氢酶和酯酶同功酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了黑斑蛙肝脏和眼球中的乳酸脱氢酶（LDH）和酯酶（EST）同功酶,乳酸脱氢酶有3个遗传位点,Ldh-2和Ldh-3在肝脏和眼球中均表达,而Ldh-1仅在眼球中表达,这3个位点均为单态。酯酶共有10个点,其中Est-2、Est-4和Est-8为多态位点,Est-1、Est-2和Est-3在肝脏中表达,且活力很高,而在眼球中不表达。     

棘胸蛙、虎纹蛙、黑斑蛙血细胞的比较

应用Giemsa染色法对棘胸蛙、虎纹蛙和黑斑蛙的血细胞进行显微观察和各形态参数测定,并对各类细胞作了图示和描述。结果表明,红细胞和白细胞的形态和数量比例有一定属和种的特征,并与其生长环境和进化地位有一定联系。     

沈阳地区黑斑蛙早期胚胎发育研究

黑斑蛙Rana nigromaculata是中国大陆分布最广的两栖类之一,对沈阳地区黑斑蛙的胚胎发育进行观察,并拍摄各期图片,对各时期的形态特征进行描述。结果表明:在19～20℃的水温条件下,从受精卵期至鳃盖完全愈合期胚胎发育可分为26期,胚胎发育历时258.66h,胚体长10.315mm±0.893mm,有整齐的孵化期。本研究中的黑斑蛙胚胎发育和前人报道差异较大,可能与不同地区黑斑蛙的群体遗传组成、生态环境及试验中的水质和光照等其它条件的差异有关。     

黑斑蛙肾的组织结构

应用组织学和组织化学方法研究了黑斑蛙(Rana nigromaculata)肾的显微结构。结果表明,黑斑蛙的肾除具有肾单位和集合小管外,还见有淋巴样组织分散于肾实质中。在肾腹侧发现有与真骨鱼类斯坦尼斯小体相似的结构,其中聚集有较多的肥大细胞。说明黑斑蛙的肾具有多种生理功能。     

几种农药对黑斑蛙黑斑蛙胚胎及蝌蚪的毒性

本文报道了常用的几种农药对黑斑蛙胚胎及蝌蚪发育的毒性影响。结果表明 :农药对黑斑蛙胚胎、蝌蚪期的毒性大小依次为使它隆 >多效唑 >多菌灵 >异丙隆 >甲胺磷。胚胎期死亡时表现为胚体腐烂 ;蝌蚪期死亡时则表现为头部膨大 ,尾部缩小 ,弯曲。畸形在两个时期都表现为腹部膨大呈透明状和尾部弯曲     

黑斑蛙骨髓细胞染色体标本制备的新方法

染色体标本制备是黑斑蛙分子细胞遗传学研究的基础。为了简化操作程序,缩短实验周期,建立了黑斑蛙染色体制备的一种新方法——骨髓细胞体外短时培养与秋水仙素同步处理法。该方法操作简便,重复性较好,可在较短时间里制备出分裂相较多且形态良好的蛙染色体标本,适用于核型分析、染色体荧光原位杂交、染色体显微分离和单染色体文库构建等多个方面的研究。     

镉对黑斑蛙蝌蚪生长发育的影响

两栖动物幼体的生长发育过程对环境变化和化学污染物都很敏感,为研究镉对两栖动物幼体生长发育的影响,将37—38期黑王证蛙（Rana．nigromaculata）蝌蚪暴露于含不同浓度镉的水中饲养,直至完全变态,观察幼体生长发育过程,记录蝌蚪完全变态所需时间,平均体重和平均长度增长率的测定。结果表明,随着Cd^2＋浓度的升高,蝌蚪的啤均体重和平均长度的增长率降低,完全变态所需时间增长。说明Cd^2＋污染可抑制黑斑蛙蝌蚪的生长发育,延缓变态。     

壬基酚对雄性黑斑蛙生殖毒性的研究

通过研究壬基酚对雄性黑斑蛙(Rana nigromaculata)成体的精子和精巢的影响,探讨壬基酚对黑斑蛙的生殖毒性.用不同剂量的壬基酚对雄性黑斑蛙进行处理,对黑斑蛙的精巢系数、精子数、形态结构、畸形率和精巢显微结构等分别进行研究.结果表明,与对照组相比,随着壬基酚浓度的升高,染毒组黑斑蛙的精巢系数下降,精子数减少,精子畸形率明显增大;畸形精子主要表现为其头部出现肥大、弯曲和圆形等现象;精巢显微结构发生变化,表现为生精小管萎缩,生精细胞层次减少,间质区不明显.说明壬基酚对雄性黑斑蛙生殖系统具有毒性效应.     

黑斑蛙3个Sox基因HMG-box区的序列分析

参照人SRY基因HMG-box保守区的序列,设计一对兼并引物,扩增了黑斑蛙Sox基因并对扩增产物进行了克隆及测序.结果在雌雄个体中共筛选出三个不同的Sox基因,rnSox3,rnSox21,rnSox4其序列与人相应SOX基因的相似性分别为86%、82%、83%,与人类相应SOX基因编码氨基酸的一致性分别为94%、93%、78%.本研究为探索黑斑蛙的性别决定机制提供了分子资料.     

宁波地区黑斑蛙的繁殖生态和产卵地选择

黑斑蛙是我国分布最广的两栖动物之一,但目前有关其繁殖生态和产卵地选择还所知甚少,而且多局限于定性描述。2004—2006年在宁波地区黑斑蛙的繁殖期,对黑斑蛙的繁殖生态研究分析表明,该蛙在繁殖期的种群密度为0.0903±0.0029只/m(n=11);该蛙是雌雄二形性的蛙类,雌性蛙类的体重和体长都显著大于雄性;该蛙窝卵数的变化幅度较大(1546—7897个),平均窝卵数为4643.04±235.96个(n=50);卵径范围为1.50—1.74mm,平均卵径大小为1.6050±0.0046mm(n=226)。对黑斑蛙产卵地选择的研究结果表明,产卵地在水域比率、裸地比率、植被盖度、水深、水温和水的透明度等方面与随机样方不同;该蛙偏爱在水域比率和植被盖度较高的生境产卵,而避免在水体较深的生境产卵。为了更好地保护黑斑蛙的产卵栖息地,今后应优先保护水域比率和植被盖度较高而水体不深的生境。     

壬基酚对黑斑蛙神经活动的影响

应用电生理的方法研究不同浓度壬基酚对黑斑蛙的坐骨神经干神经冲动产生和传导的影响。用不同浓度的壬基酚处理黑斑蛙,7 d后,观察其活动状态和体表特征,同时用生物信号采集处理系统分别测定壬基酚对黑斑蛙坐骨神经干的神经冲动传导速度、动作电位幅度、相对不应期和绝对不应期的影响。结果表明：随着壬基酚浓度的增加,黑斑蛙的活力减弱,其皮肤出现血斑的现象加重,说明壬基酚可引起黑斑蛙活力、精神和体表等发生异常;随着壬基酚浓度的升高,黑斑蛙坐骨神经干的神经冲动传导速度逐渐减慢,动作电位峰值降低,相对不应期和绝对不应期逐渐延长,与壬基酚浓度呈剂量-效应关系。说明在壬基酚作用下,黑斑蛙神经活动对刺激反应的灵敏性降低,动作电位的产生及传导受到一定程度的抑制和阻碍。在50 mg·kg^-1低浓度组,壬基酚对黑斑蛙神经活动影响不显著(P>0.05),说明黑斑蛙对低浓度的壬基酚有一定的耐受力。     

鲫鱼、黑斑蛙和家兔视网膜结构的比较组织学研究

为探讨鲫鱼Carassius auratus、黑斑蛙Rana nigromaculata和家兔Oryclagus cuniculus domestica视网膜组织结构与其生活环境的适应关系,测量了3种动物视网膜各层厚度、3个核层的胞核层数及胞核直径,并对数据进行了统计分析.结果表明:鲫鱼、黑斑蛙和家兔视网膜均由4层细胞构成,在光镜下分为10层.鲫鱼视网膜平均厚度为196.57μm,黑斑蛙为186.96 μm,家兔为200.90μm.黑斑蛙和家兔的视网膜内核层的细胞数目比外核层多,鲫鱼的外核层细胞数目大于内核层细胞数目.鲫鱼、黑斑蛙和家兔3种动物视网膜结构的差异,与其从水生到两栖再到陆牛的牛境迁移和捕食方式的变化相适应.     

黑斑蛙早期胚胎发育过程中乳酸脱氢酶同工酶的初步研究

本文采用聚丙烯聚酰胺凝胶电泳方法,对河南新乡地黑斑蛙（Ｒａｎａ ｎｉｇｒｏｍａｃｕｌａｔａ）早期胚胎发育过程中（受精后０－３２４ｈ）乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶进行了研究。结果表明：ＬＤＨ１自始至终存在,且活性一直占绝对优势;ＬＤＨ５于心跳期出现,该期以后其活性仅次于ＬＤＨ１;ＬＤＨ２于囊胚早期开始出现,其活性一直较弱;ＬＤＨ３和ＬＤＨ４均于开口期少量出现,以后前者为活性一直极弱,后者则呈现一定的活     

黑斑侧褶蛙的两性异形和雌性繁殖特征

测定了黑斑侧褶蛙成体的体长、体重、头长、头宽、眼径、鼓膜径、前肢长、后肢长等形态指标以及雌体的怀卵数量。黑斑侧褶蛙雌体的体长和体重显著大于雄体。其它局部形态特征指标与体长呈正相关,协方差分析表明,雄体的鼓膜径大于雌体,其余形态指标不存在明显的两性差异。黑斑侧褶蛙雌体怀卵数量与体长和体重皆成正相关关系,表明黑斑侧褶蛙通过增加个体大小增加繁殖输出。     

黑斑蛙和中华大蟾蜍精子的超显微结构研究

过去,在精子的超显微结构方面的研究虽然已积累了很多资料,但在无尾的两栖类,蛙和蟾蜍方面的研究却不多。施履吉等（1981）结合他们的生化工作,曾用液面铺片法研究了这两种两栖类染色质在超显微结构方面的异同。发现黑斑蛙的精子染色质保留了体细胞染色质的核小体的结构,而在蟾蜍染色质中则无核小体结构,取而代之的则为由精蛋白和DNA组成的纤维状结构。然而在原位的情况下,黑斑蛙（Rana nigromacu-lata）和中华大蟾蜍（Bufo bufo asiaticus）的染色质呈何形态尚需做进一步的研究。     

黑斑蛙消化系统蛋白酶的活力

用福林 酚试剂法对黑斑蛙 (Rananigromaculata)消化系统蛋白酶的活力进行了分析。结果表明 ,黑斑蛙食道、胃、前肠、后肠、直肠和胰脏蛋白酶的最适pH值分别为 1 5、1 5、7 4、7 4、7 4和 9 6 ,最适温度分别为 55、55、50、50、50和 50℃。在各自最适pH值和最适温度条件下 ,各部位蛋白酶活力由高到低的顺序为 :胰脏 >食道 >胃 >前肠 >后肠 >直肠。文中对黑斑蛙蛋白酶的特性进行了讨论 ,并对蛙的人工养殖提出了几点建议