灰葡萄孢交配型基因的分析与检测

通过生物信息对灰葡萄孢的MAT1‐1‐1与MAT1‐2‐1氨基酸序列进行了系统进化与结构域保守氨基酸分析,表明灰葡萄孢的交配型蛋白与核盘菌的亲源关系最近,结构域氨基酸比对结果表明该基因具有保守氨基酸的一致性与部分氨基酸的相似性。应用PCR技术检测灰葡萄孢交配型基因MAT1‐1‐1与MAT1‐2‐1,结果表明各种植区交配型菌株所占比例有较大的差异,多数种植区灰葡萄孢同时存在MAT1‐1与MAT1‐2两种交配类型,快速检测灰葡萄孢的交配型等位基因对于灰葡萄孢种群结构分析非常有意义。     

华重楼灰霉病菌灰葡萄孢ITS分型及SSR遗传多样性分析

华重楼灰霉病在湖北和湖南两省多有发生,己对华重楼药材生产构成了严重威胁.为明确该病菌的遗传多样性水平,本研究对分离自两省10个地区的92株华重楼灰霉病菌进行了 rDNA-ITS分子鉴定,同时采用SSR-PCR技术进行了遗传多样性分析.rDNA-ITS分子鉴定结果表明92株病原菌均为灰葡萄孢Botrytis cinere...     

害虫抗药性分子检测技术

PCR-限制性内切酶法(PCR—REN)、等位特异性PCR技术(PASA)、单链构型多态性分析(SSCP)和微测序法(minisequencing)等技术被应用于害虫靶标抗性的位点突变检测中,并已有成功的先例。然而,对代谢抗性的分子检测研究较少涉及,作者对此进行了分析和展望。     

信号分子AI-2的检测方法研究进展

很多细菌在生长过程中会产生一些小分子量的自诱导分子,也称为信号分子,当其随着细胞数量增加而积累到一定阈值时能够调控细菌特定基因的表达,这个过程称为群体感应(Quorum sensing,QS)。多数自诱导分子具有物种特异性,但很多种属的细菌都会产生一种共同的自诱导分子AI-2,AI-2被认为是细菌种间交流的通用语言。定量检测AI-2对于研究与其相关的生理生化过程是非常必要的。然而,目前还没有一种标准的定量检测AI-2的方法。因此,本文就目前关于AI-2的检测方法进行综述,为后续研究者提供参考。     

耐多药结核病的分子机制及其检测方法

结核病发现已有 1 0 0多年历史 ,人们曾乐观地预言 2 0世纪末即将消灭结核病。然而不合理的联合用药、管理不善、药物供应不足质量不佳以及间断用药等 ,使结核分支杆菌不能及时被杀死 ,产生耐药性。当前耐药性结核病已成为结核病疫情上升和难以控制的一个重要原因。目前约有 50 0 0万人感染了耐药结核分支杆菌。耐多药结核病是耐药结核病中后果最严重的一种 ,给结核病的防治带来很大困难。1　耐多药结核病的定义及其分类有关耐多药结核病 (ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ -ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ,ＭＤＲ-ＴＢ)的定义 ,国际上目前…     

拟南芥灰霉病抗性相关转录因子

病原菌的侵染激发植物大量防御响应基因的表达, 其中转录因子在协调庞大的抗病防御网络中发挥重要作用。灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)是最具破坏力的死体营养型病原真菌之一, 在农业生产上造成严重的经济损失。文章综述了ERF(Ethylene response factors)、WRKY、MYB等家族中参与灰霉病防御反应的转录因子的功能研究进展。转录因子通过复杂的mRNA或蛋白水平的互作方式构成了精细的调控网络, 以激活下游防卫基因的表达, 从而诱导抗病反应。一部分转录因子是协调不同激素信号通路交叉响应的重要节点和调节器, 将植物抵御不同类型病原菌的分子机制联系起来。对这类转录因子的研究将为研究植物其他病原菌防御机制提供线索, 另外深入理解抗病机制将有助于研究者在作物改良和保护中更高效地利用抗病基因。     

灰葡萄孢琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂抗性的等位基因特异性PCR快速检测

【背景】灰葡萄孢(Botrytis cinerea)是引起植物灰霉病的病原菌,严重威胁着各种重要经济作物的产量。化学防治是最有效的一种防治措施,其中,琥珀酸脱氢酶抑制剂类(succinate dehydrogenase inhibitor, SDHI)杀菌剂是防治灰霉病的一类常用杀菌剂,但目前灰葡萄孢已对其产生抗性。【目的】建立一种能快速检测对SDHI杀菌剂产生抗性的灰葡萄孢菌株的方法。【方法】以SdhB^P225F点突变为材料,通过设计特异性引物,优化PCR体系退火温度和内参引物浓度、评价等位基因特异性PCR (allele-specific PCR, AS-PCR)的灵敏度和特异稳定性,最后以快速提取的田间菌株的DNA为模板进行AS-PCR检测,并将检测结果与测序结果进行比对。【结果】AS-PCR引物对P225F-3F/P225F-R在退火温度为58 ℃,内参引物浓度为2.5 μmol/L时可稳定区分抗性和敏感菌株,灵敏度为10 fg/μL,粗提田间菌株的AS-PCR检测结果与测序结果一致。【结论】该AS-PCR检测方法操作简单、灵敏度高、特异性强,可为田间灰葡萄孢对SDHI抗性菌株的快速检测提供一种较为可行的方法。     

芳樟醇对灰葡萄孢生长的影响及对番茄灰霉病的防控效果

通过平板抑菌试验和孢子萌发试验研究了芳樟醇对灰葡萄孢的生长抑制作用,并通过盆栽试验进一步验证了芳樟醇对番茄灰霉病的防控效果。结果表明: 芳樟醇能够显著抑制灰葡萄孢菌丝的生长,半最大效应浓度(EC₅₀)值为0.581 mL·L^-1。孢子萌发试验中,芳樟醇能够有效抑制灰葡萄孢孢子的萌发,并表现出浓度依赖性。芳樟醇处理提高了灰葡萄孢菌菌丝体的相对电导率和丙二醛(MDA)含量,说明芳樟醇可引起氧化损伤效应导致灰葡萄孢菌的膜系统被破坏;芳樟醇处理后灰葡萄孢菌中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性较对照组分别下降了27.4%、68.9%和26.0%,说明芳樟醇抑制了灰葡萄孢菌体内的抗氧化系统。盆栽试验结果显示,芳樟醇处理的病斑直径较对照组显著降低;番茄叶片中的SOD、CAT、POD、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶活性均显著高于对照组;而MDA含量下降了41.5%,说明芳樟醇可减轻灰葡萄孢菌对番茄植株造成的氧化损伤以提高植物抗病性。综上,芳樟醇对灰葡萄孢的生长有显著抑制作用并对番茄灰霉病有较好的防治效果,研究结果可为开发新型植物源抑菌剂防控番茄灰霉病提供理论依据。     

脱落酸产生菌的遗传育种

从南京蔬菜研究所植物致病株中分离到3株脱落酸（ABA）产量较高菌株,经初步鉴定均为灰葡萄孢（BolrytiscinereaPers．）。分别命名为A23,A101,A160通过紫外诱变及菌株生长状况比较,选出一株菌A101作为出发菌,经紫外,硫酸二乙酯多次诱变,在ANA合成代谢关键酶抑制剂平板上定向选育出一株ANA高产菌UUD－1,该菌固体发酵可产生ABA374μg／ml,是出发菌株产量的14倍,且其产量连续培养5代稳定。     

分子信标核酸检测技术研究进展

介绍了分子信标设计和分子信标核酸检测原理、技术特性和在基因突变大规模自动化检测中的应用. 分子信标是一种基于荧光共振能量转移现象设计的发卡型寡核苷酸探针,空间结构上呈茎环结构, 环序列是与靶核酸互补的探针,茎序列由与靶序列无关的互补序列构成,茎的一端连上荧光分子,另一端连上淬灭分子.通过空间结构改变决定分子信标发射荧光特性,从而对核酸进行定量检测. 分子信标技术具有操作简单、敏感、特异、可对核酸进行液相实时检测和对活体内核酸动态进行检测等特点,已应用于HIV辅助受体基因等基因突变的大规模自动化检测,是一种新型核酸定量检测技术.     

应用特异等位PCR快速鉴定灰霉病菌抗苯莱特与乙霉威菌株*

根据灰霉病菌Botrytis cinerea对苯并咪唑类（苯莱特）及N－苯氨基甲酸酯类（乙霉威）杀菌剂的抗性与其β－微管蛋白的198和200位密码子的单碱基突变紧密相关的原理,建立了一种同时检测灰霉病菌对这两类杀菌剂抗性表型的特异等位聚合酶链式反应（ASP,Allele-specific Polymerase Chain Reaction）方法,即将突变的单碱基作为正引物的3'末端,与之对应的未突变的单碱基作为负引物的3'末端, 自行设计了LP4～LP8等五个等位点特异性引物,应用包括这五个引物在内的七组引物,对生测为BenSNPCR、BenHRNPCS和BenHRNPCR菌株进行了ASP扩增,结果表明：该方法可以检测出相应抗药表型的菌株,并能有效地检测田间灰霉病菌的抗药性,从而该方法克服了生物检测方法费时和准确性差等缺点。该方法还能鉴定出生测法确定为同一表型如BenHRNPCR 中的BenSNPCR异核菌丝,或灰霉病菌侵染寄主后所产生的回复突变,因此其方法的灵敏度极高,可应用于灰霉病菌抗药性分子生态学机理研究和田间抗性菌株的快速鉴定。由于未发现BenMRNPCR型菌株,其适用性有待进一步验证。     

应用特异等位PCR快速鉴定灰霉病菌 抗苯莱特与乙霉威菌株

根据灰霉病菌Botrytiscinerea对苯并咪唑类（苯莱特）及N－苯氨基甲酸酯类（乙霉威）杀菌剂的抗性与其β－微管蛋白的198和200位密码子的单碱基突变紧密相关的原理,建立了一种同时检测灰霉病菌对这两类杀菌剂抗性表型的特异等位聚合酶链式反应（ASP,Allele-specificPolymeraseChainReaction）方法,即将突变的单碱基作为正引物的3'末端,与之对应的未突变的单碱基作为负引物的3'末端,自行设计了LP4～LP8等五个等位点特异性引物,应用包括这五个引物在内的七组引物,对生测为Ben     

Phenylpyrrole Fungicides: Mitotic Instability in Aspergillus nidulans and Resistance in Botrytis cinerea

The somatic recombinogenic activity of the phenylpyrrole fungicide fludioxonil, in diploid Aspergillus nidulans was found similar to that caused by aromatic hydrocarbon and dicarboximide fungicides (AHDFs), such as iprodione, chlozolinate and tolclofos–methyl. All these fungicides not only increased the number of mitotic recombinants but also provided similar appearance, small sectors, of white and yellow mitotic recombination products. Fludioxonil highly resistant strains (resistant factor approximately 5000) of Botrytis cinerea were isolated at high frequency (1.08 × 10⁻⁵). Study of cross-resistance patterns of mutant strains to other fungicides, revealed cross-resistance of fludioxonil with dicarboximides (iprodione, procymidone, and chlozolinate) and aromatic hydrocarbons, such as tolclofos–methyl, pentachloronitrobenzene (PCNB), tecnazene and chloroneb. The positive cross-resistance relationships found between phenylpyrroles and members of the AHDFs and their ability to increase mitotic instability in diploid A. nidulans , indicate that phenylpyrroles should be included with AHDFs. A study of fitness parameters in wild-type and representative fludioxonil-resistant mutants of B. cinerea , showed that the mutation(s) leading to fludioxonil resistance may or may not affect some fitness-determining characteristics, such as sensitivity to high osmolarity, growth rate, conidial germination and germ-tube elongation. Pathogenicity tests on cucumber seedlings showed that an osmosensitive representative strain of B. cinerea , resistant to fludioxonil, was as virulent as the wild-type strain. The phenylpyrrole fungicide was ineffective, even in high concentrations, to control grey mould caused by this isolate.     

Organic hydroponics induces systemic resistance against the air-borne pathogen,Botrytis cinerea (gray mould)

Here, we propose that organic hydroponics trigger induced systemic resistance (ISR) in lettuce against air-borne Botrytis cinerea, which causes gray mold. We compared effects of organic and chemical hydroponics, assessed presence of ISR elicitors in the hydroponic nutrient solution, and investigated molecular mechanism of ISR. Organic hydroponics significantly reduced gray mold lesions in lettuce (cultivated hydroponically) and cucumber (cultivated in soil and foliar sprayed with nutrient solution). The 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase gene in lettuce and lipoxygenase and ethylene receptor-related gene in cucumber showed heightened expression, suggesting that the jasmonic acid/ethylene (JA/ET)-signaling pathway was involved in ISR for both crops. Low salicylic acid β-glucoside levels confirmed role of the ISR signaling pathway. ISR in both lettuce and cucumbers indicated that elicitors in organic hydroponics were nonhost-specific and that the JA/ET pathway was activated without microbe–root interaction. Thus, organic hydroponics can be an effective method for both soil-borne and air-borne disease control.     

两种葡萄孢属真菌对不同品种百合花瓣和叶片的侵染能力比较

为明确两种葡萄孢属真菌对不同百合品种叶片和花瓣的侵染能力,采用离体叶片接种法测定灰葡萄孢Botrytis cinerea和椭圆葡萄孢Botrytis elliptica对4个百合品种叶片和花瓣的侵染时间和病斑扩展速度。结果表明,供试百合花瓣接种灰葡萄孢病斑出现时间明显早于叶片,而不同品种花瓣接种椭圆葡萄孢病斑出现时间差异显著。此外,百合品种‘木门’叶片接种椭圆葡萄孢96 h后仍没有病斑出现,而花瓣接种后48 h病斑出现,说明‘木门’叶片对椭圆葡萄孢抗性较强,而花瓣较易感病。