地龙蛋白对人增生性瘢痕细胞增殖抑制作用机制研究

目的:研究地龙蛋白对人增生性瘢痕细胞增殖抑制作用机制。方法:培养人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF),将传代好的HSF细胞分为四组,分别加入地龙样品浓度为0 mg/m L(对照组)、0.3125 mg/m L(低剂量组)、0.625 mg/m L(中剂量组)、1.25 mg/m L(高剂量组)。应用MTS法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR法和Western-blot法测定Cyclin D1、Caspase-3、TGF-β1的表达,Western-blot法测定Bcl-2、Mcl-2的表达。结果:地龙蛋白对HSF细胞的增殖活力有抑制作用。浓度0.625mg/m L、1.25 mg/m L样品组作用细胞48 h后凋亡率为分别为31.5%和69.2%,(P0.01);RT-PCR显示,浓度0.625 mg/m L、1.25mg/m L样品组能够增加Caspase-3的基因表达,降低Cyclin D1的基因表达,降低TGF-β1的基因表达,(P0.01);浓度0.3125mg/m L样品组与空白对照组比较有显著性差异(P0.05)。W-B方法显示,各样品组能够增加Caspase-3的蛋白表达量,降低Cyclin D 1的蛋白表达量,降低TGF-β1的蛋白表达量,(P0.01);浓度0.625 mg/m L、1.25 mg/m L样品组能够降低Bcl-2蛋白表达量,(P0.01);浓度0.3125 mg/m L样品组Bcl-2的蛋白表达量与空白对照组比较有显著性差异(P0.05)。结论:地龙蛋白诱导细胞死亡,作用机制与下调Cyclin D1的基因和蛋白表达,上调Caspase-3的基因和蛋白表达,下调TGF-β1的基因和蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达量有关。     

绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤成纤维细胞凋亡及Caspase-3信号通路的影响

目的:探讨绞股蓝总皂苷(Gyp)对光老化人皮肤成纤维细胞(HSF细胞)凋亡以及Caspase-3信号通路的影响。方法:分别以80、160、320 mg/d剂量的Gyp生理盐水溶液灌胃大鼠7d后取血并分离血清,长波紫外线(UVA)照射方法(照射剂量36 J/cm3)构建光老化HSF细胞模型以得到低剂量组、中剂量组、高剂量组,同时以空白对照组(未照射细胞)、UVA模型组、正常组为对照。UVA诱导的细胞活性氧表达采用二氯荧光素(DCF)法测定,细胞凋亡情况采用TUNEL法测定,HSF细胞活性采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)测定,Bax、Bcl-2、Caspase-3基因和蛋白表达分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blotting方法进行测定。结果:与空白对照组比较,其余5组的OD值、HSF细胞凋亡数、活性氧(平均荧光强度)、活性氧水平、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平差异具有统计学意义(P0.05);与UVA模型组和正常组比较,低、中、高剂量组OD值、HSF细胞凋亡数、活性氧(平均荧光强度)、活性氧水平、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平差异具有统计学意义(P0.05);低、中、高剂量组随着剂量增加OD值、Bcl-2mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,细胞凋亡数、活性氧(平均荧光强度)、活性氧水平、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平逐渐降低(P0.05)。结论:Gyp通过抑制细胞内活性氧的产生以及Bax的表达,以及激活Bcl-2、Caspase-3信号通路而逆转UVA诱导的HSF细胞凋亡,进而延缓HSF细胞的光老化现象。     

桃叶珊瑚苷对光损伤HaCaT细胞Bax, Bcl-2, Caspase-3表达的影响

目的:探讨桃叶珊瑚苷对紫外线B诱导的HaCaT细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响,进一步阐明桃叶珊瑚苷抗光老化的作用机制。方法:将指数生长期HaCaT细胞随机分为正常对照组、模型对照组、10~(-7)、10~(-6)、10~(-5) mol·L~(-1) AU处理组,采用64 m J·cm~(-2)的UVB照射建立细胞光损伤模型,以终浓度10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol·L~(-1)AU处理光损伤细胞,试剂盒检测ROS含量、Caspase-3活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达量。结果:UV照射的HaCaT细胞ROS含量、细胞凋亡率、Caspase-3活性、Bcl-2、Bax蛋白表达量均升高(P0.01),Bcl-2/Bax值降低(P0.01);不同浓度桃叶珊瑚苷处理后,ROS含量、Caspase-3活性、Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量、Bcl-2/Bax值升高,10~(-6)、10~(-5) mol·L~(-1)桃叶珊瑚苷组与模型对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05,0.01)。结论:桃叶珊瑚苷通过清除ROS,下调Bax、Caspase-3表达,上调Bcl-2表达,抑制细胞凋亡,保护受损的HaCaT细胞,拮抗光老化。     

当归多糖对辐射损伤小鼠骨髓单个核细胞凋亡的影响

目的探讨当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cell,BMNC)凋亡的影响,旨在阐明APS对辐射性造血损伤保护作用的分子机制。方法结果结论方法 C57BL/6小鼠随机分为10组,正常组不作任何处理,其余9组经X射线(4.0Gy)照射后分别给予不同剂量APS或生理盐水,并于照射后第1、3、7d处死小鼠,流式细胞术检测BMNC凋亡率、Bcl-2表达率,Western Blot法(WB)检测P53蛋白、Caspase-3蛋白的表达。结果与正常组相比,生理盐水组BMNC凋亡率、P53蛋白、Caspase-3激活片段(12+17KD)的表达升高,Bcl-2及Caspase-3全长片段(35KD)的表达降低。与生理盐水组相比,2mg/kg APS组和8mg/kg APS组均能降低凋亡率,P53蛋白及Caspase-3激活片段的表达,升高Bcl-2和Caspase-3全长片段的表达。结论 APS对辐射引起的细胞凋亡具有一定的保护作用。     

Akt/HIF-1α信号通路在二氧化硒诱导PC12细胞损伤中的作用

该文主要探讨Akt/HIF-1α(hypoxia inducible factor-1α)信号通路在二氧化硒(Se O2)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤中的作用。将PC12细胞暴露于不同浓度的Se O2(40、80、160μmol/L)24 h以诱导细胞发生损伤。采用噻唑蓝还原法和乳酸脱氢酶漏出率检测法测定细胞损伤程度,倒置显微镜观察细胞形态的变化,用丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测细胞内活性氧类活性氧类(reactive oxygen species,ROS)水平,Hoechst 33342单荧光染色法观察细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞HIF-1α、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、PI3k、p53和Caspase-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3)的表达。结果显示,二氧化硒可呈剂量依赖性地诱导PC12细胞损伤,导致细胞内ROS增多和细胞凋亡,引起细胞皱缩,轴突变短。p-Akt、HIF-1α、p53、Caspase-3表达上调,Bax/Bcl-2表达比例显著增加。由此说明,二氧化硒诱导PC12细胞损伤,导致细胞凋亡,与其激活细胞Akt/HIF-1α信号通路,进而促进p53、Bax/Bcl-2、Caspase-3的表达及胞内ROS增加有关。     

维生素C联合替莫唑胺对胶质瘤细胞的毒性作用及其机制*

目的:探讨维生素C(VC)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤细胞活力的毒性作用及其机制。方法:在体外条件下培养人胶质瘤细胞BMG-1和SHG44细胞,设对照组(不施加VC与TMZ)、TMZ组(0.2 mmol/L)、VC(0.5 mmol/L)+TMZ(0.2 mmol/L)组,TMZ(0.2 mmol/L TMZ)+U0126(10 μmol/L)组,每组实验重复3次。采用MTT实验检测细胞生存率;流式细胞术和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况; ROS检测试剂盒检测活性氧簇(ROS)水平, Western blot检测与凋亡、自噬及ERK通路相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,TMZ组胶质瘤细胞的存活率显著下降(P＜0.05)。与TMZ组比较,VC+TMZ组胶质细胞瘤细胞的存活率显著下降(P＜0.01),VC+TMZ组中细胞凋亡率显著升高,且Bax、Cleaved caspase-3及Cleaved PARP蛋白表达显著增加,Bcl-2表达显著降低,而ROS水平及细胞自噬率显著降低,LC3-II/LC3-1表达显著降低,p62表达显著增加(P均＜0.05)。同时,联用可降低BMG-1和SHG44细胞中的p-ERK1/2相关蛋白的表达水平,且提高细胞凋亡率(P均＜0.05)。结论:VC联合TMZ能够增强对胶质瘤细胞的毒性,而这一作用是通过ERK信号通路来促进细胞凋亡并抑制替莫唑胺所介导的自噬作用。     

CD47-siRNA通过调控ROS诱导食管癌细胞SEG-1凋亡

目的:探讨CD47-siRNA对食管癌细胞SEG-1凋亡的影响及其机制研究。方法:Western blot法检测食管癌细胞SEG-1中CD47蛋白、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达;CCK-8法检测食管癌细胞SEG-1细胞活力;DCFDA细胞ROS检测试剂盒检测食管癌细胞SEG-1中ROS水平。结果:CD47-siRNA转染组食管癌细胞SEG-1中CD47蛋白明显低于空载对照组(P0.05);CD47-siRNA转染组食管癌细胞SEG-1细胞活力显著低于空载对照组(P0.05);CD47-siRNA转染组食管癌细胞SEG-1中促凋亡蛋白Bax表达显著高于空载对照组(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达低于空载对照组(P0.05);CD47-siRNA转染食管癌细胞SEG-1组ROS水平明显高于空载对照组(P0.05);与CD47-siRNA转染组比较,CAT (ROS抑制剂,5 m M/L, 6 h)预处理增加了细胞活力;与CD47-siRNA转染组比较,CAT (ROS抑制剂,5 m M/L, 6 h)预处理显著降低食管癌细胞SEG-1中Bax蛋白表达以及增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结论:CD47-siRNA转染通过上调食管癌细胞SEG-1内ROS水平促进食管癌细胞SEG-1凋亡。     

黄芪甲苷后处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的作用研究

目的:观察黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AsⅣ)后处理对缺氧复氧损伤(simulated ischemia reperfusion injury,SI/RI)的SD乳鼠心肌细胞是否具有保护作用。方法:将乳鼠原代心肌细胞平均分为五组,即空白对照组(Control)、缺氧复氧处理组(SI/RI)、黄芪甲苷预处理(5,10、20μM)+SI/RI组(AsIV+SI/RI)。各组细胞经处理后,四氮唑溴盐比色法(MTT)检测各组细胞存活率;TUNEL染色法测定各组细胞凋亡率;SOD测试盒检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)含量,总嘌呤氧化酶(XOD)测试盒检测丙二醛(MDA)含量。Western blot法检测各组细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果:与空白组相比,缺氧复氧损伤组细胞活力显著下降(P0.05),凋亡率显著上升(P0.05),其培养液中SOD水平显著降低(P0.05),MDA水平显著升高。而不同浓度AsⅣ后处理组的心肌细胞存活率显著上升,凋亡率显著下降,培养液中SOD水平显著上升,MDA水平显著下降(P0.05),且呈浓度呈依赖性。Western blot结果显示AsⅣ后处理组细胞中的Bcl-2表达明显上升,Caspase-3明显下降。结论:黄芪甲苷后处理对缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤具有显著的保护作用,能够显著上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,下调促凋亡蛋白Caspase-3的表达。     

黄芪甲苷对高剂量S-氯胺酮诱导PC12细胞损伤的保护作用

以高剂量S-氯胺酮(S-ketamine, SK)诱导PC12细胞构建体外神经损伤模型,探究黄芪甲苷(astragaloside IV,ASⅣ)对高剂量SK诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制。采用CCK-8法测定细胞活力,并以此确定SK的最佳造模浓度和ASⅣ的最佳治疗浓度;流式细胞术测定细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)的含量;qPCR法检测目的基因的表达;Western blot技术检测目的蛋白的表达。结果显示,SK的最佳造模浓度为450μg/mL,ASⅣ的最佳治疗浓度为25μmol/L;与对照组相比,SK组细胞凋亡率、ROS含量、Caspase-9和Cytochrome C mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Bax、Pro-Caspase-9、Cleaved-Caspase-9和Cytochrome C蛋白表达量同样显著上升(P<0.05),而Bcl-2/Bax mRNA表达水平比值、Bcl-2蛋白表达量显著下降(P<0.05);ASⅣ治疗后,明显逆转了高剂量SK诱导引起的各项指标变化(P<0.05)。这说明黄芪甲苷...     

川楝素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及其机制

目的: 本研究旨在探讨川楝素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及其机制。方法: 将人胃癌MGC-803细胞分为5组,每组3个复孔,采用氟尿嘧啶(5-FU)和0 nmol/L川楝素(TSN)分别作为阳性对照和阴性对照。其余3组分别加入终浓度为30 nmol/L、50 nmol/L、70 nmol/L的川楝素。川楝素处理细胞48 h后,利用激光共聚焦显微镜观察细胞形态结构变化;流式细胞术检测线粒体膜电位变化;酶标法检测Caspase-3和Caspase-9活性;利用qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Cyt c和APAF-1 mRNA和蛋白水平。结果: 与0 nmol/L TSN组相比,30 nmol/L、50 nmol/L、70 nmol/L的川楝素作用于人胃癌MGC-803细胞48 h,可见细胞体积缩小,细胞核裂解,部分染色质凝集等形态学变化;Caspase-3和Caspase-9活性升高(P＜0.05);而线粒体膜电位明显下降(P＜ 0.05);Bax、Cyt c和APAF-1 基因mRNA及蛋白表达量显著升高(P＜0.05),Bcl-2 基因mRNA及蛋白表达量显著降低(P＜0.05)。结论: 川楝素通过上调Bax、Cyt c和APAF-1的表达,下调Bcl-2基因表达,增强Caspase-3、Caspase-9活性诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡。     

蛋白酶体抑制剂MG132的浓度对人白血病细胞K562凋亡的影响

探讨蛋白酶体抑制剂MG132 在诱导人白血病K562细胞凋亡过程中作用.分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132 处理人白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用Annexin Ⅴ和PI 双染的细胞流式法检测K562细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS) 水平,应用酶标仪法检测K562细胞内Caspase- 3活性变化的情况.结果表明,随着MG132浓度的增加,各个指标与对照组比较差异均有显著性(P<0.05):K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当MG132浓度为900 nmol/L时,细胞凋亡率达36.5 %;同时,ROS 水平和caspase- 3活性明显升高.因次,蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制人白血病细胞K562增殖并促进其凋亡.     

三七总皂甙对人急性髓系白血病细胞株U937 的抑制增殖及诱导凋亡作用

目的:观察三七总皂甙(panax notoginsenosides,PNS)对人急性髓系白血病细胞株U937凋亡的影响,并探讨PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:将处于对数生长期的U937细胞分为5组:正常对照组及PNS组(5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40mg/L),药物作用12 h、24 h、48 h后,CCK-8比色法检测PNS对肿瘤细胞的相对细胞活力的影响;流式细胞术检测PNS促进细胞凋亡的能力;RT-PCR和Western blot法分别检测不同浓度的PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:CCK-8分析显示,PNS在低浓度(≤40 mg/L)能明显抑制肿瘤细胞的活力,40 mg/L处理组较正常对照组细胞活力在3个时间点分别下降47%、72%、85%;与对照组相比,处理组的凋亡率显著增加,10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L实验组凋亡率分别上升7%、10%、43%;PNS能明显增加细胞内Bax mRNA及蛋白的表达,抑制Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结论:PNS具有抑制人急性髓系白血病细胞株U937的增殖抑制及凋亡诱导作用,并能影响Bax和Bcl-2蛋白的表达。文章探讨了PNS抑制肿瘤发展可能存在的作用机制,为将来进一步研发PNS作为白血病治疗药物奠定基础。     

C-myc-siRNA通过调控ROS诱导子宫内膜癌细胞凋亡

为探讨原癌基因C-myc-siRNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响,本研究利用细胞计数盒(cell counting Kit-8, CCK-8)法分别检测C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)的子宫内膜癌细胞活力;蛋白免疫印迹法(Western blotting)分别检测C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)的子宫内膜癌细胞凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2的变化;流式细胞仪分别检测C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的变化;蛋白免疫印迹法(Western blotting)分别检测预处理NAC (ROS抑制剂)后,C-myc-siRNA转染组和空载体转染组(Vector-NC)的子宫内膜癌细胞凋亡相关蛋白Bax以及Bcl-2的变化。结果表明:C-myc-siRNA转染子宫内膜癌细胞后,促凋亡相关蛋白Bax的表达显著高于空载体转染组,且抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显低于空载体转染组(p<0.05);C-myc-siRNA转染子宫内膜癌细胞后,细胞ROS水平明显增加(p<0.05);NAC预处理显著减弱C-myc-siRNA对子宫内膜癌细胞凋亡的促进作用(p<0.05)。本研究结论表明,C-myc-siRNA能够通过调控ROS诱导子宫内膜癌细胞凋亡。     

SIRT2抑制对MPP+诱导的帕金森病细胞模型凋亡和线粒体动态平衡的影响*

探究siRNA敲减沉默信息调节因子2(SIRT2)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP⁺)诱导的帕金森病细胞模型细胞损伤的影响和机制。CCK-8法检测不同浓度MPP⁺处理对体外培养小鼠海马神经元HT-22细胞生存率的影响。将细胞分为对照组、MPP⁺最佳浓度处理组(1 mmol/L MPP⁺处理组)、阴性转染组(对照组基础上转染SIRT2阴性序列)、SIRT2 siRNA处理组(损伤组基础上转染SIRT2 siRNA)。观察各组细胞凋亡情况,检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-9)、线粒体分裂及融合相关蛋白(Drp1、Fis1、OPA1、Mfn1、Mfn2)。与对照组相比,MPP⁺处理组细胞抑制率均升高,细胞抑制率随MPP⁺浓度增加而逐渐增加(P<0.05)。与SIRT2 siRNA转染组相比,损伤组Bax、Caspase-9、Drp1、Fis1蛋白表达和细胞凋亡率升高,Bcl-2、Mfn1、Mfn2蛋白表达降低(P<0.05)。SIRT2在MPP⁺诱导帕金森病细胞模型中表达升高,抑制SIRT2可减轻MPP⁺诱导帕金森病细胞模型中细胞凋亡并促进线粒体融合,从而对神经元具有一定的保护作用。     

半边旗二萜类成分PAG通过ROS诱导肝癌细胞凋亡的作用研究

探讨半边旗二萜类成分Pteisolic acid G(PAG)对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及作用机制。用不同浓度的PAG处理HepG2细胞后,采用MTT法检测细胞存活率;采用PI单染法检测细胞周期分布;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;采用RT-PCR和Western Blotting检测细胞内mRNA和蛋白表达情况;采用DCFH-DA法检测细胞内ROS水平,采用ROS抑制剂乙酰半胱氨酸(NAC)评价PAG细胞增殖抑制作用对ROS的依赖性。结果表明,在24 h、48 h和72 h时,PAG可剂量依赖性地抑制HepG2细胞的增殖(p0.05),IC_(50)分别为64.8μmol/L,38.5μmol/L和24.8μmol/L;用药24 h时PAG可剂量依赖性地使HepG2细胞阻滞在G_2/M期,同时增加HepG2细胞凋亡率(p0.05);PAG可剂量依赖性地降低HepG2细胞内Bcl-2 mRNA和caspase 3、PARP、Bcl-2蛋白的表达(p0.05),增加Bax mRNA和actived-caspase 3、cleaved-PARP、Bax蛋白的表达(p0.05)。当使用1 mmol/L的ROS抑制剂NAC预处理HepG2细胞时,PAG对HepG2细胞增殖抑制作用被显著阻断。上述结果表明,半边旗二萜类成分PAG可提高Bax/Bcl-2的基因和蛋白表达比值,从而诱导肝癌细胞HepG2凋亡,该作用可能是通过升高细胞内ROS水平来实现的。     

夏枯草诱导人甲状腺乳头状癌细胞K1增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的:探索夏枯草对人甲状腺乳头状癌细胞(K1)增殖和诱导K1细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT比色法测定2~200 mg/mL夏枯草作用24 h对K1细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和流式细胞术(Annexin V-FITC/PI联合标记)观察0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 mg/mL夏枯草作用24 h K1细胞凋亡的影响;采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定1.2、2.4、4.8 mg/mL夏枯草作用24h对K1细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果:在2~200 mg/mL的浓度范围内夏枯草作用24 h对K1细胞增殖有明显抑制作用(P0.05),IC50值为2.427 mg/mL。流式细胞术检测结果显示夏枯草可诱导K1细胞凋亡,2.4、4.8 mg/mL组K1细胞总凋亡率分别为(11.35±0.92)%、(44.57±3.07)%,与对照组相比明显升高(P0.05);与对照组相比,1.2、2.4、4.8 mg/mL夏枯草作用24 h胞浆内凋亡蛋白Bax、细胞色素C(Cyto C)、Caspase-9、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)表达增多。结论:夏枯草能抑制人甲状腺癌K1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与活化线粒体凋亡通路有关。     

肝细胞生长因子抑制糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡作用

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)抑制糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及其相关分子机制。方法体外培养ECV-304人脐静脉内皮细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定HGF对AGEs作用后ECV-304细胞生长抑制率的影响;通过Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学改变、流式细胞术测定AnnexinV-FITC/PI双染标记的细胞凋亡率,检测HGF对AGEs诱导ECV-304细胞凋亡的影响;Western印迹法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果HGF能明显降低AGEs对ECV-304细胞生长的抑制作用;AGE诱导培养的ECV-304细胞出现明显的凋亡形态学改变,在一定浓度范围内,ECV-304细胞凋亡率与AGEs的浓度和作用时间呈依赖关系,加入HGF处理后可显著降低不同时间的内皮细胞凋亡率;HGF作用ECV-304细胞后Bcl-2蛋白表达明显升高,而Bax蛋白表达无明显变化。结论AGEs能诱导内皮细胞凋亡,而HGF能部分抑制AGEs诱导的内皮细胞凋亡,其作用机制可能与上调Bcl-2蛋白的表达水平有关。     

红花多糖可显著抑制HT29结直肠癌细胞增殖

本研究采用MTT法检测红花多糖对HT29结肠癌细胞增殖的抑制作用,观察大肠癌细胞凋亡的形态,采用Annexin V和PI双染流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,采用蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白的表达,试图研究红花多糖对HT29结肠癌细胞增殖的抑制作用及其相关机制。研究结果表明各浓度组的抑制率均明显高于对照组(p0.05)。随着药物浓度的增加,抑制率更显著,IC50=201.908 mg/L。实验组的浓度分别为160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L。HT29细胞周期的影响主要体现在HT29细胞G2/M期和S期。在实验组的浓度为160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L时细胞凋亡率显著高于对照组(p0.05)。在160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L组Caspase-3蛋白表达显著高于对照组(p0.05)。随着浓度的增加,表达量增加。说明红花多糖能显著上调Caspase-3蛋白。本研究初步得出结论:红花多糖能显著抑制HT29结肠癌细胞,其诱导HT29细胞凋亡的机制可能与阻滞细胞G2/M期,S期,及上调Caspase-3蛋白的表达有关。     

Smac调控Caspase-3对耐药肺腺癌细胞株生物活性及相关信号的研究

摘要 目的：探讨Smac基因调控Caspase-3表达对紫杉醇耐药肺腺癌细胞株生物活性及经典凋亡信号通路的作用机制。方法：取构建好的耐药A549细胞,将其分为A549细胞（LC）组、A549细胞+Smac-NC（SN）组、A549细胞+Smac抑制剂（SI）组、A549细胞+Smac激动剂（SM）组、A549细胞+Caspase-3-NC（CN）组、A549细胞+Caspase-3抑制剂（CI）组、A549细胞+Caspase-3激动剂（CM）组、A549细胞+Smac激动剂+Caspase-3激动剂（MM）组;Real-time PCR法检测正常肺上皮细胞及4种肺腺癌细胞系中Smac、Caspase-3表达水平,将阴性对照、Smac、Caspase-3类似物转染至紫杉醇耐药肺腺癌细胞株,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹法检测经典凋亡信号通路表达,并分析Smac与Caspase-3的相关性。结果：肺腺癌细胞系中的Smac、Caspase-3 mRNA表达量显著低于正常肺上皮细胞系BEAS-2B（P＜0.05）,其中A549的Smac、Caspase-3 mRNA值最小（P＜0.05）,因此选取其作为此次实验细胞;LC组与SN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与SN组相比,SI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与SI组相比,SM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;LC组与CN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CN组相比,CI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与CI组相比,CM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;SM组与CM组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CM组相比,MM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;Smac与Caspase-3呈现正相关（r=0.470,P=0.002）,组间具有显著差异。结论：Smac基因可显著改善紫杉醇耐药肺腺癌细胞株细胞生物活性,并激活经典凋亡信号通路,其作用机制可能与调控Caspase-3表达有关。     

TSP1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响研究

目的探讨血小板反应蛋白1(TSP1)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法以肾小管上皮细胞为研究对象,通过转染TSP-1 shRNA(shTSP-1),沉默TSP-1基因,探讨下调TSP1对高糖条件下肾小管上皮细胞损伤的影响。肾小管上皮细胞依次分为:对照组(以5.6 mmol/L葡萄糖培养)、高糖组(以30 mmol/L葡萄糖培养)、NC+高糖组(对照慢病毒转染,以30 mmol/L葡萄糖培养)、干扰+高糖组(TSP1 shRNA慢病毒转染以30mmol/L葡萄糖培养)。Realtime PCR和Western Blot检测高糖对细胞中TSP1表达影响,同时检测TSP1 shRNA干扰效果。DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)水平,硫代巴比妥酸法检测培养液中丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)含量,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blot法检测细胞中活化的Caspase-3(c-caspase-3)蛋白水平。两组均数差异比较采用独立样本t检验,多组均数间差异比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果高糖组细胞中TSP1mRNA和蛋白水平高于对照组(P 0.05)。干扰+高糖组细胞中TSP1 mRNA和蛋白水平低于高糖组(P 0.05)。与对照组比较,高糖组细胞中ROS水平升高,培养液中MDA、TNF-α、IL-8含量升高[(2.36±0.21)nmol/ml、(45.91±2.87)ng/ml、(25.42±3.26) ng/ml:(1.05±0.13)nmol/ml、(20.14±1.36)ng/ml、(12.98±1.63)ng/ml],差异有统计学意义(F=18.595,F=43.825,F=21.155,P 0.05);细胞凋亡率升高(P 0.05),细胞中c-caspase-3蛋白水平升高(P 0.05)。与高糖组和NC+高糖组比较,干扰+高糖组细胞中ROS水平降低,培养液中MDA、TNF-α、IL-8含量降低[(1.63±0.10)nmol/ml、(34.20±2.06)ng/ml、(18.75±1.62)ng/ml:(2.36±0.21) nmol/ml、(45.91±2.87)ng/ml、(25.42±3.26)ng/ml和(2.30±0.42)nmol/ml、(46.32±5.24) ng/ml、(26.91±2.74)ng/ml],差异具有统计学意义(F=18.595,F=43.825,F=21.155,P 0.05);细胞凋亡率降低,细胞中c-caspase-3蛋白水平降低(P 0.05)。结论高糖诱导肾小管上皮细胞中TSP1表达,下调其表达可以减少细胞分泌炎症因子,抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。