靶向转录因子AP-2的Decoy核酸对肿瘤细胞增殖的抑制作用

ecoy核酸是与靶转录因子具有高亲和性的双链寡聚核酸 ,通过竞争性抑制转录因子与调控区域的结合 ,调控转录来改变下游基因的异常表达 ,从而抑制肿瘤恶性增殖 .用MTT比色法 ,体外筛选结合转录因子AP 2的decoy核酸药物 ,结果K2 0 6对多种肿瘤细胞生长有显著的抑制作用 ,在异植人肿瘤细胞NCI H4 6 0的裸鼠模型中 ,静脉注射高中低三剂量组的decoy核酸K2 0 6 ,抑瘤率分别达 71 8%、6 4 4 %及 5 7 3% (V V) .通过凝胶阻抑试验 ,验证了K2 0 6与转录因子产生特异性结合 .实验结果为decoy核酸转录调控药物的研究提供了依据     

转录因子AP-2α调控SOX9基因的表达

肝癌是肝脏中最常见的恶性肿瘤,是全球癌症相关死亡的第三大主要原因。肝癌发病具有隐蔽性、细胞异质性、耐药性的特点,且肿瘤易侵袭、转移和复发,使得其临床治疗效果欠佳。转录因子AP-2α在肝癌中作为肿瘤抑制因子发挥作用,其表达与肝癌患者的预后呈现正相关。SOX9在细胞分化、性别决定和肿瘤发生中起主要作用。在肝癌细胞中,SOX9异常增加可以促进癌细胞的生长。本研究利用JASPAR软件预测到SOX9的启动子区域含有潜在的AP-2α结合位点,通过萤光素酶和凝胶迁移试验（EMSA）证实了AP-2α可以与SOX9的启动子区域直接结合,抑制SOX9的转录活性。通过实时定量PCR和蛋白质免疫印迹发现,AP-2α抑制了SOX9的mRNA和蛋白质水平表达。这些结果提示了AP-2α可与癌基因SOX9的启动子区域结合,负调控肝癌细胞中SOX9的表达。     

转录因子AP-2及其在癌症中的作用

本文综述了关于AP-2基因家族的最近期研究进展。AP-2是一个分子量为52-kDa的转录因子,有其独特的蛋白质分子结构,其N端是富含脯氨酸和谷氨酸的转录激活域,C端的helix-span-helix结构可以形成二聚体并与特异的DNA序列结合。AP-2家族都能以同源或异源二聚体的方式与一段保守序列5’-GCCNNNGGC-3’结合。AP-2α是最早被鉴定和研究的家族成员,很多研究表明AP-2α是一个抑癌基因。     

转录因子YY1的作用机制

转录因子Ｙｉｎ Ｙａｎｇ 1 (ＹＹ1 ,又称ＮＦ Ｅ1、δ、ＵＣＲＢＰ、ＣＦ1 )是锌指类转录因子ＧＬ1 Ｋｒ櫣ｐｐｌ家族中的一员 ,广泛地存在于人、鼠、非洲爪蟾中[1、2 ] 。ＹＹ1蛋白含有 41 4个氨基酸残基 ,分子量为 6 5ｋＤ。在靠近Ｎ 末端处有一个酸性区域 ,紧接着是连续 1 2个组氨酸的序列和一段富含Ｇｌｙ和Ａｌａ的区域 ,在Ｃ 末端含有与ＲＥＸ 1蛋白相似序列的Ｃ2 Ｈ2 锌指结构。ＹＹ1因子最初是作为腺伴随病毒(ＡＡＶ)的Ｐ5 启动子和免疫球蛋白 (Ｉｇ)ｋ3′增强子的阻抑因子分离到的 ,后来又相继证实ｃ ｆｏｓ、ｃ ｍｙｃ、ｓｕｒ…     

转录因子AP-4基因真核表达载体构建及表达分析

本研究利用生物信息学分析AP-4与胃癌患者临床病理信息的相关性,根据GenBank中人AP-4基因cDNA序列设计并合成特异性引物,以胃癌细胞总RNA逆转录的cDNA为模板,利用高保真酶扩增AP-4基因CDS (Coding DNA sequence)序列并构建入pcDNA3.1+载体,并通过限制性内切酶酶切分析和测序法进行进一步验证;脂质体法将AP-4重组表达载体及对照pcDNA3.1+载体转染胃癌细胞,qRT-PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction)和Western blotting检测分别检测AP-4在m RNA和蛋白水平的表达。生物信息学分析发现,AP-4的表达与胃癌分期及预后显著相关;酶切及测序分析表明,转录因子AP-4真核表达载体构建成功,并能够在胃癌细胞中实现转录和蛋白水平的高效表达。此研究为深入研究转录因子AP-4在胃癌等肿瘤发生发展中的作用及分子机制奠定了基础。     

AP-1在腋臭患者发病过程中的作用

目的：腋臭是美容整形外科的常见病,目前发病机制尚不明确,已证实人体大汗腺中的载脂蛋白D（ApoD）在腋臭患者大汗腺中高表达,并且与腋臭的发生密切相关。探明ApoD在大汗腺细胞中的信号转导通路,可以进一步明确其在腋臭发病过程中的作用机制。JNK信号转导通路与多种疾病的发生有关。课题组前期已经做了JNKl对ApoD调控作用的相关研究,证明了在腋臭发病过程中JNK1是通过调控ApoD的转录来上调ApoD的表达。本实验在课题组前期研究基础上,探讨JNKl下游转录因子AP-1是否在JNKl上调ApoD通路中发挥作用。方法：取腋臭志愿者腋区皮肤组织,进行汗腺细胞培养。把汗腺细胞分为5．二氢睾酮处理组、5-二氢睾酮联合姜黄素处理组和空白对照3个组,用姜黄素抑制AP-1的活性,通过Real．timePCR实验方法检测ApoD在姜黄素抑制下的表达变化。结果：在姜黄素的抑制下,ApoD表达明显降低。在体外培养汗腺细胞加入5．二氢睾酮联合姜黄素处理后,ApoD的表达量在mRNA水平低于单独的5-二氢睾酮处理组和正常对照组（P〈0．05）。结论：姜黄素抑制了AP．1的活化导致ApoD的表达降低。在腋臭的发病过程中,JNKl的下游转录因子AP-1对ApoD有明显的上调作用。AP-1可能在JNKl上调ApoD这条通路中扮演了很重要的角色,它可能是JNK1和ApoD的中间转录因子。     

转录因子OCT-4对靶基因AP-2γ表达调控的研究

OCT-4和AP-2γ是近年来睾丸生殖细胞瘤诊断过程中研究的热点基因.作为一个在胚胎发育中起着重要作用的转录因子,OCT-4基因在发育的不同时期、不同分化过程中发挥着多种生物学功能,其作用是通过对靶基因的调控来实现的.本研究运用多种软件分析,发现AP-2γ启动子区域的序列部分有OCT-4的结合位点.利用CHIP-PCR方法鉴定AP-2γ是OCT-4调控的靶基因.应用Luciferase assay、免疫荧光实验、小鼠隐睾模型等实验进行验证,OCT-4基因抑制AP-2γ转录活性和影响其蛋白质水平的表达.这一新发现,有利于从分子水平上研究睾丸生殖细胞瘤的发生机制.     

以胰岛素样生长因子受体1基因为靶的反义寡核苷酸体内外抗肿瘤研究

以胰岛素样生长因子受体－1基因为靶筛选抗肿瘤药物.根据IGF1RmRNA的二级结构设计了9条反义寡核苷酸药物,以脂质体介导进行转染,MTT染色计算细胞生长抑制率,从中筛选出一条序列并对之进行优化,最后以最佳序列进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率分析.结果表明该序列在体内外具有良好的抗肿瘤活性,具有剂量依赖性关系,且对荷瘤裸鼠无明显的毒性.IGF1R可作为肿瘤治疗的新靶点.     

转录增强因子－1研究进展

转录增强因子－１研究进展雷霆雯,贾弘（贵阳医学院生化教研室,贵阳５５０００４）（北京医科大学生化与分子生物学系,北京１０００８３）关键词转录增强因子－１转录增强因子１（ＴＥＦ－１）是一种细胞特异性转录激活因子,由Ｄａｖｉｄｓｏｎ等首次在Ｈｅｌａ细胞中...     

pNEgr-mIL-12真核表达载体的体外和体内生物学活性检测

肿瘤的基因-放射治疗是近年来发展起来的新技术.分别于体外和体内检测含辐射敏感启动子和mIL-12基因的真核表达载体（pNEgr-mIL-12）的生物学活性.体外经酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测转染pNEgr-mIL-12重组质粒的COS-7和B16细胞可经辐射诱导mIL-12 p70表达,于1.5～2.0 Gy照射后表达增高最明显,COS-7细胞于照后4 h 达峰值,B16细胞的表达水平随照射后时间延长而逐渐增高;pNEgr-mIL-12重组质粒联合电离辐射治疗小鼠移植肿瘤,单次或多次注射pNEgr-mIL-12重组质粒,联合局部照射能够抑制小鼠移植肿瘤生长,与单纯照射组比较肿瘤生长速度减慢,瘤重降低,尤以多次给予质粒治疗组效果明显.为进一步探讨最佳治疗方案及临床肿瘤病人的基因放射治疗提供了初步依据.     

Caveolin-1抑制胰腺癌细胞PANC1的体内外生长和增殖

窖蛋白-1(caveolin-1)是胞膜窖(caveolae)中重要的结构和功能蛋白.Caveolin-1参与细胞的多种生命活动并与恶性肿瘤的发生相关.为探讨caveolin-1对胰腺癌细胞PANC1的体外增殖、迁移、侵袭以及裸鼠体内成瘤能力的影响,通过基因转染技术培育caveolin-1过表达细胞株PANC1/cav-1作为实验组,转染空载体细胞株PANC1/vector作为对照组,采用RT-PCR及Western blot方法检测caveolin-1的表达量,流式细胞术分析细胞周期,软琼脂细胞克隆实验检测细胞增殖能力,侵袭小室实验检测癌细胞迁移和侵袭的能力,建立裸鼠皮下种植瘤模型并检测肿瘤组织的增殖与凋亡.PANC1/cav-1中的caveolin-1表达稳定,表达量明显高于对照组细胞株和亲本细胞株(P<0.01),细胞周期检测显示大量PANC1/cav-1细胞被抑制于G0/G1期,caveolin-1抑制PANC1的增殖,迁移和侵袭能力.在裸鼠的体内实验中,caveolin-1显著抑制PANC1细胞在裸鼠体内的生长,Ki-67染色和TUNEL染色表明在PANC1细胞中过表达caveolin-1,可以抑制肿瘤增殖并诱导肿瘤凋亡.上述结果表明,caveolin-1可能通过对胰腺癌细胞周期的影响(抑制于G0/G1期),抑制胰腺癌PANC1细胞在体内外的增殖、迁移和侵袭,并导致肿瘤凋亡.     

In vivo andin vitro methylation of lysine residues ofEuglena gracilis histone H1

We have earlier identified and purified two protein-lysine N-methyltransferases (Protein methylase III) fromEuglena gracilis [J. Biol. Chem.,260, 7114 (1985)]. The enzymes were highly specific toward histone H1 (lysine-rich), and the enzymatic products were identified as -N-mono-, di- and trimethyllysines. These earlier studies, however, were carried out with rat liver histone H1 as thein vitro substrate. Presently, histone H1 has been purified fromEuglena gracilis through Bio-Rex 70 and Bio-Gel P-100 column chromatography. TheEuglena histone H1 showed a single band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and behaved like other histone H1 of higher animals, whereas it had a much higherR _f value than the other histones H1 in acid/urea gel electrophoresis. When theEuglena histone H1 was [methyl-³H]-labeledin vitro by a homologous enzyme (one of the twoEuglena protein methylase III) and analyzed on two-dimensional gel electrophoresis, three distinctive subtypes of histone H1 were shown to be radiolabeled, whereas five subtypes of rat liver histone H1 were found to be labeled. Finally, by the combined use of a strong cation exchange and reversed-phase Resolve C₁₈ columns on HPLC, we demonstrated thatEuglena histone H1 contains approximately 9 mol% of -N-methyllysines (1.40, 1.66, and 5.62 mol% for -N-mono-, di- and trimethyllysines, respectively). This is the first demonstration of the natural occurrence of -N-methyllysines in histone H1.     

氧化应激与cfos和cjun转录和AP－1激活

激活剂蛋白-1(activator protein-1,AP-1)是近年来受到关注的与氧化应激基因表达调控有关的转录因子.文章就氧化应激与cfos和cjun基因表达,AP-1的激活,AP-1对氧化应激反应的调控,AP-1与亲电子反应元件等有关内容作了简要的综述．     

In vivo transcription of two promoters, PTH4 and PTH270 involved in regulation ofStreptomyces differentiation

The promoters, PTH4 and P-TH270 involved in the regulation of Streptomyces coelicolor differentiation were subcloned into Streptomyces promoter, i.e. probe plasmid pIJ4083, and the recombinant plasmids, pIJ4470 and pIJ4471, were constructed. Two promoters could drive the expression of reporter gene encoding catechol dioxygenase when pIJ4470 and pIJ4471 were introduced into some white mutants (C85, C70, C71, C17 and C119). The total RNA was isolated from these strains containing recombinant plasmid. Probes were prepared by labelling 5 -ends of PTH4 AND PTH270 DNA fragments using radioisotope. DNA - RNA hybridization was carried out with the probes and RNAs isolated from different strains. The S1 mapping result showed that all RNAs from strains of C85/pIJ4470, C85/4471, C70/pIJ4470, C70/pIJ4471 and C17/pIJ4470 as well as C17/pIJ4471 gave rise to strong positive hy-bridization signal, whereas RNAs from C71/pIJ4470 and C71/pIJ4471 did not give any positive signal. RNAs from C119/pIJ4470 and C119/pIJ4471 gav     

氧化应激与cfos和cjun转录和AP－1激活

激活剂蛋白－１（ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ－１,ＡＰ－１）是近年来受到关注的与氧化应激基因表达调控有关的转录因子,文章就氧化应激与ｃｆｏｓ和ｃｊｕｎ基因表达,ＡＰ－１的激活,ＡＰ－１对氧化应激反应的调控,ＡＰ－１与亲电子反应元件等有关内容作了简要的综述。