肾上腺髓质素在正常大鼠脑中的分布-免疫组化及原位杂交分析

目的验证大鼠脑内是否存在ADM及其mRNA。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200-250g,应用免疫组织化学法和原位杂交组织化学法检测正常大鼠脑内ADM及其mRNA的表达情况。结果在大鼠脑内ADM及其mRNA阳性细胞主要表达在大脑皮质、海马结构、齿状回、丘脑、室旁组织、脉络丛、室管膜细胞、基底节、血管内皮细胞,其中脉络丛、室旁组织、丘脑为高表达区,其次为大脑皮质、海马。在大鼠大脑内ADMmRNA的表达与ADM阳性细胞的表达相一致。结论ADM及其mRNA在大脑内广泛表达,提示ADM在中枢神经系统内具有重要的作用。     

肾上腺髓质素受体及其信号转导

肾上腺髓质素（Ａｄｍ）是新近发现的一种生物活性多肽,在体内有着广泛的分布,参与机体多种生理功能的调节。Ａｄｍ可与两种受体结合：ＣＧＲＰ受体和Ａｄｍ特异受体。Ａｄｍ与体结合后,通过ｃＡＭＰ－ＰＫＡ等信号转导通路发挥舒长血管、降低血压、利尿利钠和抑制细胞增殖等作用。     

重组肾上腺髓质素表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

为探索通过体内表达肾上腺髓质素（adrenomedullin,AM）治疗高血压和慢性心衰的可能性,本实验构建了重组AM真核表达载体,并在无内源笥AM表达的K562细胞株上进行了体外表达实验。实验中采用RT－PCR技术扩增AM cDNA片段,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1真核表达质粒,构建成含AM cDNA的重组质料pcDNA3.1AM。用脂质体介导将该质粒转染培养的人白血病细腻K562株,在转染的细胞中,用RT－PCR检测证实有AM mRNA存在;用班点免疫分析方法检测转染细胞的培养液上清,证实有AM多肽存在,表明本实验中构建的重组pcDNA3.1AM载体能够在哺乳类细胞中表达AM。     

肾上腺髓质素对大鼠肠系膜微血管和微淋巴管的作用

应用活体显微电视录象技术,观察上腺髓质素对大鼠肠系膜微血管微淋巴管的作用及其对去甲肾上腺素,内皮素作用的是结果表明,ＡＤＭ直接扩张肠系膜各级微血管和向一淋巴管,拮抗ＮＥ和ＥＴ引起的微血效及微循环血流液态的异常改变。ＡＤＭ的上述作用可被一氧化氮生成抑制剂Ｎ＾９－ｎｉｔｒｏ－Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ（Ｌ－ＮＮＡ）显著抑制。     

一种新发现的降压活性多肽—肾上腺髓质素（adrenomedullin）

肾上腺髓质素是最近发现的一种新的活性多肽,它广泛分布于机体多种组织中,具有扩张血管、降低血压、抑制内皮素和血管紧张素Ⅱ释放等作用。该活性多肽在正常机体血压调控及高血压发病中的作用正在研究中。     

肾上腺髓质素（13－52）降压机制的探讨

本工作在整体和离体大鼠模型上观察研究了肾上腺髓质素（１３－５２）［ＡｄＭ（１３－５２）］的降压机制,发现ＡｄＭ（１３－５２）的降压作用可被一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的竟争性桔抗剂Ｌ－ＮＧ－硝基－精氨酸（ＬＮＮＡ）部分抑制;ＡｄＭ（１３－５２）的舒血管作用依赖于血管内皮并可被ＬＮＮＡ抑制,且具有剂量效应关系,ＬＮＮＡ的这种效应可被Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）逆转;用亚甲蓝（ＭＢ）阻断血管内的环－磷酸鸟苷酸（ｃＧＭＰ）,则导致ＡｄＭ（１３－５２）的舒血管作用消失;放免测定显示ＬＮＮＡ可以降低血管内ｃＧＭＰ含量,而ＡｄＭ（１３－５２）则使后者含量增加,这一现象在ＡｄＭ（１３－５２）与ＬＮＮＡ合用时消失。实验结果提示,ＡｄＭ（１３－５２）的舒血管降血压效应与ＮＯ有关,可能是通过ＮＯ介导的。     

肾上腺髓质素（13—52）降压机制的探讨

本工作在整体和离体大鼠模型上观察肾上腺髓质素（１３－５２）［ＡｄＭ（１３－５２）］的降压机制,发现ＡｄＭ（１３－５２）的降压作用可被一氧化氮合酶（ＮＯＳ）竞争性拮抗剂Ｌ－Ｎ－硝基－精氨酸？（ＬＮＮＡ）部分抑制;ＡｄＭ１３－５２）的舒血管作用依赖于血管内皮并可被ＬＮＮＡ抑制,且具有剂量效应,ＬＮＮＡ这种效应可被Ｌ－精氨酸（ＬＡｒｇ）逆转;用亚甲蓝（ＭＢ）阻断血管内的环－磷酸鸟苷酸（ｘＧＭＰ）,则导致     

自发性高血压大鼠和Wistar-Kyoto大鼠心血管组织肾上腺髓质素和肾上腺髓质素原N-末端20肽的水平

本工作观察了自发性高血压大鼠 (SHRs)和Wistar kyoto (WKY)大鼠心肌和主动脉肾上腺髓质素 (a drenomedullin ,ADM)和肾上腺髓质素原N 末端 2 0肽 (proadrenomedullinNterminal 2 0peptide ,PAMP)的水平。以放射免疫分析方法测定血浆、心肌和主动脉ADM含量。用竞争性定量逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法测定心肌和主动脉ProADMmRNA含量。结果发现 ,SHRs心肌和主动脉ProADMmRNA水平分别比WKY大鼠高 66 7%和 73 % (均P <0 0 1)。SHRs血浆、心肌和主动脉ADM ir含量分别较WKY大鼠高 2 9%、76 7%和 79% (均P <0 0 1)。SHRs血浆、心肌和主动脉PAMP ir水平分别较WKY大鼠高 42 5 % (P <0 0 1)、47 2 % (P <0 0 1)和 2 7 3 % (P <0 0 5 )。另外 ,SHRs的ADM和PAMP的比值较WKY大鼠明显增高 (心肌和主动脉分别为 2 0± 0 2 5vs 1 64± 0 3和 2 2± 0 18vs 1 5 6± 0 2 8)。结果提示 ,SHRs心肌和主动脉ProADM基因表达上调 ,ADM和PAMP水平升高 ,但二者升高的比例不一致。SHRs的ADM和PAMP升高不一致的病理生理意义有待进一步研究     

肾上腺髓质素在糖尿病视网膜细胞高表达的研究

探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)在糖尿病视网膜病变(Diabeticretinopathy,DR)发病中的作用。Sprague-Dawley雄性大鼠尾静脉注射链脲佐菌素造模,以血糖测定和尿糖水平测定进行筛选,正常对照组尾静脉注射等量枸橼酸钠缓冲液。成模后继续饲养4周,取出眼球视网膜组织,连续冰冻切片,用免疫组织化学SABC法染色观察各组大鼠视网膜RPE细胞AM的表达情况。糖尿病大鼠成模前,两组动物的体重、血糖和尿糖检测结果间无显著性差异(P>0.05)。成模后4周,糖尿病组与正常组大鼠体重、血糖和尿糖数值差异有显著性意义(P<0.01)。AM在正常组大鼠视网膜节细胞层及内核层均有表达,正常组大鼠视网膜AM的光密度值为76.3±5.3,单位面积AM阳性细胞数为(4.5±1.1)×103/mm2。糖尿病大鼠视网膜内RPE细胞肾上腺髓质素表达显著增强,糖尿病大鼠视网膜RPE细胞AM的光密度值为105.7±11.9,单位面积AM阳性细胞数为(17.9±2.3)×103/mm2。两组相比,差异具有显著性(P<0.01)。AM在糖尿病大鼠视网膜RPE细胞表达量增加很可能是DR发生、发展的重要因素。     

肾上腺髓质素对缺血再灌注后肾功能的保护

目的:探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,ADM)对缺血再灌注后肾功能的保护作用。方法:在注射外源性ADM蛋白后,建立急性缺血再灌注肾损伤模型,观察ADM对肾功能和氧化损伤指标肌酐(Creatinine,Cr)、尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)、髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)影响。结果:与I组比较,II组的Cr、BUN、MPO、MDA大幅升高(P0.05),表明急性肾损伤造模成功。与II相比,III组BUN、MPO、MDA明显下降(P0.05),表现出一定的保护作用。结论:ADM对缺血再灌注损伤后的肾功能具有一定的保护作用,其机制可能与减少中性粒细胞浸润,抑制膜脂质的氧化,促进微血管重生修复有关。     

大鼠甲状腺促性腺激素释放激素受体的免疫组织化学及原位杂交研究

目的 探讨大鼠甲状腺中是否存在促性腺激素释放激素受体（GnRH-R)及其细胞定位,方法 收集15例雄性SD大鼠甲状腺,分别制成石蜡切片和冰冻切片,采用免疫组织化学ABC法和原位杂交技术。确定GnRH-R在其中的表达与定位。结果 大鼠甲状腺中,GnRH-R呈较强的免疫反应阳性,阳性物质分布在胞持,胞核呈阴性,原位杂交也检测到较强的GnRH-RmRNA阳性杂交信号,亦分布在胞质,胞核未见表达,结论 大鼠甲状腺可能自身合成GnRH-R。由此推断GnRH可能参与大鼠甲总而言之 腺功能的调节。     

c-myc癌基因在大肠组织中表达的免疫组织化学和原位杂交研究

本文应用 c-myc 癌基因蛋白免疫组织化学和 mRNA 原位杂交方法研究了 c-myc 癌基因在大肠组织中的表达,并以胎盘作为阳性对照。发现在胎盘合体滋养叶细胞和结肠粘膜表面上皮都有 c-myc 癌基因的表达。结肠肿瘤 c-myc 表达增加,腺癌表达高于腺瘤。腺瘤中以绒毛状腺瘤表达最高。研究表明 c-myc 癌基因表达并不绝对与细胞增殖状态相关。     

大鼠脊髓内生长抑素mRNA原位杂交的研究

采用地高辛标记生长抑素反意ＲＮＡ探针经原位杂交和显色后,光学显微镜下观察生长抑素ｍＲＮＡ在大鼠脊髓内的定位。结果显示：脊髓内含有大量呈紫蓝色的生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经细胞,岍性磷酸酶反应产生     

中脑星形胶质细胞表达生长抑素mRNA的离体研究

利用细胞培养技术,取胎龄１８天Ｗｉｓｔａｒ大鼠中脑腹侧组织,纯化培养星形胶质细胞,以原位杂交组织化学法检测了体外培养的不同时间的生长抑素（Ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ,ＳＳ）ｍＲＮＡ表达,结果表明中脑星形胶质细胞能合成生长抑素,并且其相对含量随培养时间的延长而逐渐下降。本文并对星形胶质细胞合成神经肽ＳＳ的功能意义进行了初步探讨     

植物染色体原位杂交技术的发展与应用

植物染色体原位杂交技术的发展与应用奇文清,李懋学（北京大学生命科学学院北京１００８７１）ＴＨＥＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＡＮＤＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳＯＦＩＮＳＩＴＵＨＹＢＲＩＤＩＺＡＴＩＯＮＴＥＣＨＮＩＱＵＥＩＮＰＬＡＮＴＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳ￥ＱｉＷ...     

RNA原位杂交技术及其在植物基因表达研究中的应用

原位杂交 ( In situ Hybridization)是一种在细胞水平上研究基因表达调控的最直接有效的分子生物学技术。这一技术最初应用于动物染色体上的基因物理定位 〔1〕和特定 m RNA在组织中的空间定位〔2〕,后来又作为诊断工具检测感染病毒的细胞 〔3〕。到 80年代后期 ,原位杂交技术开始应用于植物基因表达调控的研究 〔4～ 6〕。植物基因的时空表达研究是探讨植物生长发育机制的重要手段。由于 RNA原位杂交技术能够精确确定基因表达的时空分布 ,而得到了越来越广泛的应用 ;从营养器官生长发育〔7～ 9〕、生殖器官生长发育〔10～ 13〕、自交不…     

原位杂交技术在稻属研究中的应用

在文献综述的基础上,对原位杂交技术在稻属的应用进行了介绍,主要包括3个方面:(1)特定 DNA序列的定位;(2)构建染色体的物理图谱及其与遗传图谱之间的关系;(3)稻属基因组间关系的研究。     

麦类作物原位杂交影响因素的研究

为了更好地利用原位杂交技术进行麦类作物外源染色体的检测和基因定位,对麦类作物原位杂交的影响因素进行了研究。（１）利用缺口转译法对克隆的ＤＮＡ 片段进行生物素标记,即节省时间,又可以获得较高的标记效率;对麦类作物的基因组ＤＮＡ,宜采用随机寡核苷酸引物标记法进行生物素标记,适当延长标记时间可以提高标记效率。（２）共变性法比较适宜麦类作物的原位杂交,分别变性法如掌握不当易使染色体产生膨胀现象,变性温度过高也会使黑麦（Ｓｅｃａｌｅ ｃｅｒｅａｌ）染色体的轮廓模糊不清。（３）应根据麦类作物亲本之间的亲缘关系决定封阻ＤＮＡ 的使用浓度,并利用生物素标记的簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａ ｖｉｌｌｏｓａ）基因组ＤＮＡ 为探针,从普通小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ ）－簇毛麦双二倍体的染色体中识别了簇毛麦的染色体。（４）麦类作物的原位杂交受洗脱强度的影响很大,利用甲酰胺进行洗脱可以获得背景清晰的原位杂交带型。随着原位杂交技术分辨率的不断提高,该技术还将用于单拷贝基因的染色体定位     

利用原位杂交技术检测免疫球蛋白重链mRNA在T和B淋巴瘤内的表达

应用原位杂交技术和免疫组织化学法对８例Ｂ淋巴瘤和４例Ｔ淋巴瘤进行了ＩｇＨｍＲＮＡ和ＩｇＭ,κ,λ的检测。结果显示,８例Ｂ淋巴瘤ＩｇＨｍＲＮＡ均为阳性,位于胞核周围,有的ｍＲＮＡ阳性反应成点状位于胞质的一侧。７例胞质中ＩｇＭ,κ或λ为阳性。１例胞质内无ＩｇＭ,κ或λ,但胞核内ＩｇＨｍＲＮＡ阳性反应成点状分布,可能是初级ＲＮＡ转录。在Ｔ淋巴瘤中,只有一例胞核内出现初级ＲＮＡ转录,因为早期Ｔ淋巴瘤,也有Ｄ、Ｊ基因片段的重排