首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 0 毫秒
1.
酵母转录因子PHO81蛋白含有6个锚蛋白重复序列。将PHO81锚蛋白重复序列与谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达(GST-ANK),表达产物以包含体形式存在。利用氧化型和还原型谷城肽系统对包含体进行复性,得到了可溶性蛋白,亲和纯化后,进行了活性分析。通过免疫共沉淀、分别制备了PHO85-PHO80和PHO85-PAP1激酶复合物,用重组的PHO4蛋白作底物,在激酶反应体系中加入GST-ANK,发现它  相似文献   

2.
本文发现PHO81蛋白上的碱性区和酸性区附近的微小变化可导致rAPase的表达向组忝型转化,且这两个区域是协同作用的,而酸性区的净负电荷的降低能使rAPase的活力降低。  相似文献   

3.
酵母PH081基因的克隆和表达   总被引:1,自引:3,他引:1  
从酵母染色体DNA中获得1个约3.0kb的BamHI的克隆片段和1个约5.0kb的PstI片段,前者包含1745bp的PHO81基因编码序列及1244bp的上游列,后者包含2236bp的编码序列及约2.8kb的下游序列,经拼接得完整的PHO81基因。以URA3基因取代部分PHO81的编码序列,通过体内同源重组,获得PHO81基因缺陷的酵母细胞株。构建PHO81-LacZ融合基因,以β-半乳糖苷敏的  相似文献   

4.
利用酵母PHO81与大肠杆菌产β-半乳糖苷酶的融合基因,系统地研究了PHO81基因在酵母酸性磷酸醋酶的不同调控因子的单缺失株和双缺失株中的表达规律,它与酸性磷酸酯酶基因PHO5和PHO11的控制机制相似。构建了ADH1启动子控制下PHO81表达质粒。在PHO81在细胞内组成型表达时,酸性磷酸酯酶基因的表达仍受无机磷的控制,揭示PHO81蛋白可能在不同浓度无机磷条件发生变构。PHO81在酸性磷酸酯酶基因表达系统中是一个中介因子。在此基础提出了一个酸性磷酸酯酶基因调控的分子模型。  相似文献   

5.
利用PHO81lacZ融合基因,对它的上游进行缺失分析,发现有两个区域对PHO81基因的表达是必需的:-401~-289bp和-1012~-801bp。比较PHO81和PHO5,PHO84基因上游,未发现有较高同源性的序列存在,但在-401~-289bp区域有PHO4蛋白结合位点的核心序列5′CACGTG/T3′,以及CACGTG/T两侧富含A/T的序列(可能是PHO2结合位点)。推测-401~-289bp包含了PHO81的上游激活序列(UAS),-1012~-801bp可能起增强的作用。用酵母总蛋白质对-1012~-801bp进行凝胶阻抑电泳分析,证明有未知的蛋白因子结合在这个区域。  相似文献   

6.
高效表达产纯化了PHO4和PHO2蛋白,凝胶阻抑电泳分析证明了PHO4和PHO2蛋白与PHO81上游-401-289bp片段的结合,定点突变PHO2的230位丝氨酸为天冬氨呈丙氨酸,不影响PHO2蛋白与此片段的结合。足迹法分析证明了PHO4结合在PHO81基因上游的354-333bp,PHO2结合在341-334bp。因此,这些结果表明-401-289bp包含了PHO81的上游激活序列(UAS),  相似文献   

7.
利用定点诱变,氨基酸插入或缺失的方法对PHO2进行结构改造,观察对其功能的影响。PHO2蛋白的同源域中有α-螺旋2-β-转我-α螺旋3的结构,是转录因子结构DNA的功能域。定点诱变α-螺旋3上的Ile123为Pro123或者在α-螺旋2中插入PDPD4个氨基酸,破坏α-螺旋的结构,可导致PHO2功能的丧失。氨基酸片段的缺失分析表明,N端Gin丰富区大部缺失,对PHO2功能没有影响;而包含酸性氨基酸  相似文献   

8.
 为了进一步研究φX174噬菌体A基因蛋白的复制功能与其所识别的30核苷酸保守序列的关系,我们采用寡聚核苷酸诱导的定点突变法成功地改造了这30核苷酸保守序列。将此保守序列重组到M_(13)mp9噬菌体后,以其单链为模板,在14或16寡聚核苷酸的诱导下,合成共价闭环DNA。经转化到E.coli JM103菌株,用点印迹(Dot blot)杂交法筛选,得到两种重组突变株。一种突变株其30核苷酸保守序列正链的第22碱基由A改为G。另一突变株为其第10碱基A改为C,第11碱基T改为A。突变效率约为5%。制备了此突变株单链及双链DNA,分别做了双脱氧末端终止法及Maxam和Gilbert法序列分析鉴定。  相似文献   

9.
酵母PHO2蛋白及其变异体与PHO5USA体外的相互作用杨军,敖世洲(中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,200031)关键词酵母;PHO2;突变;DNA结合PHO2是酵母阻遏型酸性磷酸酯酶基因转录的正调控因子[1],由559个氨基...  相似文献   

10.
膜锚蛋白结构与功能及其调控机制   总被引:1,自引:0,他引:1  
最近发现一些膜蛋白不是通过疏水的穿膜结构固定于膜上,而是通过与糖链结合直接连接到糖基磷脂酰肌醇(GPI)上,成为一种蛋白质在膜上锚着的新型方式.这些膜锚蛋白包括:粘附分子;受体蛋白;酶蛋白等.这些生物活性分子由于在膜上的运动性增大,可产生继发的生物效应.膜锚蛋白有膜结合型和溶于体液的可溶性型,通过蛋白与 GPI 的结合和脱离,可调控其生物活性;产生的 GPI 本身亦可作信使物质,调控细胞分裂与分化等.  相似文献   

11.
张朝  蒋斌元  胡玲  曹婷  胡锦跃 《生命的化学》2021,41(9):1920-1926
核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(nucleotide-binding oligomerization domain protein 2, NOD2)是一类参与先天性免疫应答的受体,属于核苷酸寡聚NOD样受体家族(NOD-like receptors, NLRs)。NOD2通过识别病原菌表面的模式抗原分子从而激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)等信号通路诱导炎症因子以及抗菌肽等物质,抵抗病原微生物的入侵。NOD2的负调控因子(去泛素化酶以及与通路相关的负调控蛋白等)可以阻断NOD2的信号传导从而削弱由NOD2引起的炎症反应并缓解炎症性疾病。该文总结了NOD2的负调控因子的种类以及相关作用机制,为进一步研究NOD2的调控机制以及临床干预NOD2相关性疾病提供参考。  相似文献   

12.
青霉素G酰化酶操纵子的负调控因子的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
青霉素G酰化酶(PA)操纵子的调节基因(pacR)存在于青霉素G酰化酶结构基因(pac)内部Dral-Taql一段约500bp的DNA片段内,此片段内含有2个ORF。2个ORF及其突变体分别克隆到pUC18得到一系列重组质粒,用这些重组质粒转化青霉素G酰化酶产生菌E.coliD816,测定克隆片段对PA表达的影响。如果克隆片段含有具功能的pacR,诱导剂苯乙酸(PAA)不能使由高拷贝却pacR表达的阻抑物全部失活,部分阻抑物结合pac操纵基因,阻碍RNA聚合酶对pac的转录,因此PA的表达量降低。结果表明,阻抑物是由pac结构基因内部的ORF2编码的蛋白因子,pacR即ORF2。RNA—DNA杂交实验证实了pacR在转录水平阻抑pac的表达。  相似文献   

13.
14.
转录因子AKNA是具有AT-hook模体的核内蛋白质,与富含AT碱基的DNA区域相结合调控靶基因的转录。AKNA主要在B淋巴细胞、T淋巴细胞、自然杀伤性细胞和干细胞上表达,介导免疫反应的发生。转录因子AKNA的单核苷酸多态性(SNP)可增加宫颈癌的风险,AKNA功能的丧失导致子宫颈肿瘤性病变。敲除AKNA基因可导致炎性因子、蛋白酶和趋化因子的富集,诱发中性粒细胞介导的炎性反应。本文从转录因子AKNA的结构特征、生物学功能和功能调控三方面进行综述,旨在为后续关于AKNA转录调控网络和信号通路的研究提供依据。  相似文献   

15.
植物转录因子的结构与功能   总被引:9,自引:0,他引:9  
介绍了植物中一些已知转录因子的结构和功能,同时对相关的其它真核生物中的转录因子也作了简要介绍。  相似文献   

16.
利用可以在大肠杆菌中形成单链又可以在大肠杆菌和酵母中穿梭的质粒BFDl9作为寡聚核苷酸介导的定点突变载体,分别在大肠杆菌和酵母中获得了预定的TRP1基因突变体,再利用这个带TRP1突变的质粒BFD25和BFDl9,建立了一个在酵母系统中进行定点突变时可以富集突变体的筛选方法。借助这种方法我们在酵母系统中完成了人表皮生长因子基因表达单元的寡聚核苷酸介导的缺失突变,此突变载体系统在酵母与大肠杆菌中都适用,而且可以直接在酵母细胞中进行突变表型的研究。  相似文献   

17.
植物NAC转录因子的结构功能及其表达调控研究进展   总被引:8,自引:0,他引:8  
NAC转录因子是近十年来新发现的具有多种生物功能的植物特异转录因子。该家族转录因子的共同特点是其N端为保守的大约150个氨基酸的NAC结构域,C端为高度变异的转录调控区。它们在植物生长发育、激素调节和抵抗逆境等方面发挥着重要的作用。本文主要就植物NAC转录因子的基本结构特征、生物学功能、表达调控及其最新研究进展进行综述。  相似文献   

18.
细菌基因组中存在大量的转录调控家族,这些转录调控家族在细菌的生长、代谢、外界信号感知与传递等方面发挥着至关重要的作用.DeoR家族是一类广泛分布于原核生物中的转录调控因子,主要参与调控细胞中多个生理过程,包括核苷酸类代谢、糖类代谢、致病菌的毒力以及链霉菌的次级代谢等.DeoR蛋白C末端的配体结合结构域,通常能够以相关代...  相似文献   

19.
FBI-1是一个新近发现的和转录相关的胞内蛋白,属于POK蛋白家族成员。FBI-1通过直接结合DNA或者与其他蛋白形成复合物影响目的基因的转录水平,从而推动肿瘤的生长、促进细胞黏附拮抗凋亡、促进前体细胞分化。  相似文献   

20.
近年来利用定点突变技术研究苏云金杆菌(Bacillus thuringiesis,Bt)杀虫晶体蛋白(Insecticidal crystal proteins,ICP)作用机制已取得良好进展.杀虫晶体蛋白不同结构域上氨基酸残基的突变将影响其稳定性,与受体的结合,不可逆的昆虫中肠膜插入及离子通道活性的强弱等.突变研究表明,结构域Ⅰ参与不可逆结合及插入昆虫中肠膜过程;结构域Ⅱ参与受体结合,包括初始结合与不可逆结合;结构域Ⅲ在杀虫特异性和维持三维结构的稳定性方面起重要作用,同时,可能参与离子通道的形成,受体结合和插入昆虫中肠膜过程.利用各种定点突变技术对各位点进行突变可以研究单一位点的功能,到目前为止,已有很多关于这方面的研究,并且筛选到了毒力提高的工程菌株.  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号