Brucellacapt、RBT、SAT、iELISA四种血清学检测方法对布鲁氏菌病检测价值的比较研究

目的:探讨布鲁氏菌病血清学试验(Brucellacapt)、虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(i ELISA)四种血清学检测方法对布鲁氏菌病检测价值的比较研究。方法:收集近两年110例布鲁氏菌病疑似病例人员的静脉血分离得到血清后进行Brucellacapt、RBT、SAT、i ELISA四种血清学检测,以卫生部制定的《布鲁氏菌病诊疗指南》中布鲁氏菌病确诊方法为诊断金标准,将检测结果与其确诊结果进行比较,评价比较各组血清检测方法对布鲁氏菌病的检测价值。结果:110例疑似人员中确诊为布鲁氏菌病阳性91例、阴性19例。Brucellacapt试验阳性89例、阴性21例;RBT试验阳性79例、阴性31例;SAT试验阳性71例、阴性39例;i ELISA检验阳性82例、阴性28例。Brucellacapt试验的灵敏度、符合率、Kappa值、ROC曲线下面积均最大,i ELISA试验、RBT试验、SAT试验依次减小;i ELISA试验的ROC曲线下面积最大,Brucellacapt试验次之,其次为RBT试验,SAT试验的ROC曲线下面积最小。结论:Brucellacapt、RBT、SAT、i ELISA四种血清学检测方法对于布鲁氏菌病检测均有一定的检测价值,对于常规普通患者可采用RBT试验、SAT试验进行检查,而对于疑似病例人员可采用灵敏度更高的Brucellacapt试验、i ELISA试验。     

猪水泡病病毒VPl基因抗原区的原核表达

利用RT-PCR和nested PCR(nPCR)技术扩增出猪水泡病病毒VPl基因的抗原区,将其克隆到表达载体pProEX-HTb中,获得重组质粒,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,目的基因插入的位置、大小和读码框均正确。将重组质粒导入BL21(DE3),经IPTG诱导表达后SDS-PAGE检测表明,重组菌能表达猪水泡病病毒VPl抗原区蛋白;Western blot检测表明,诱导表达的抗原区蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。     

猪水泡病病毒VP1基因抗原区的原核表达

利用RTPCR和nested PCR(nPCR)技术扩增出猪水泡病病毒VP1基因的抗原区，将其克隆到表达载体pProEXHTb中，获得重组质粒，经PCR、酶切和序列分析鉴定表明，目的基因插入的位置、大小和读码框均正确。将重组质粒导入BL21（DE3），经IPTG诱导表达后SDSPAGE检测表明，重组菌能表达猪水泡病病毒VP1抗原区蛋白；Western blot检测表明，诱导表达的抗原区蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。     

进口奶牛犬新孢子虫病血清学抗体及流产胎儿病原分子生物学检测

采用间接免疫荧光抗体试验对随机抽取的3批进口奶牛1 238份奶牛血样进行牛新孢子虫病的流行病调查.随后用乳胶凝集对牛新孢子虫抗体阳性样品进行弓形虫抗体检测.并用已建立的牛新孢子虫病巢式PCR(Nested-PCR)对第一批进口奶牛的数十头流产胎儿进行牛新孢子虫病的病原分子生物学检测.结果表明,3批进口奶牛的新孢子虫整体感染率为6.54%,所有奶牛犬新孢子虫抗体阳性血清的弓形虫抗体全部为阴性.新孢子虫血清抗体阳性母牛流产的胎儿经Nested-PCR检测,60%胎儿为阳性,而抗体阴性母牛流产的胎儿经Nested-PCR检测均为阴性.     

肺隐球菌病1例

报道1例肺隐球菌病。患者男性,35岁,体检发现右肺下叶阴影1个月余。胸腔镜下行右肺下叶切除术,组织病理可见多量大小不一的酵母细胞,PAS、黏蛋白卡红、阿申兰、免疫组化染色均阳性,血清隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验阳性（＋＋）。术后给予口服氟康唑400mg／a治疗3个月,停药2个月后化验血清隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验阴性。     

布鲁氏菌荧光定量PCR检测分析

本研究为探析荧光定量PCR检测布鲁氏菌的临床价值,通过研究PCR法的重复性和敏感性,建立了布鲁氏菌采用复合探针荧光定量PCR检测的方法,对布鲁氏菌病进行诊断和筛选。表明复合探针荧光定量PCR检测布鲁氏菌具有较高的特异性为100%。同时,在5次重复实验中,阴性和阳性质控品的检测CV值均小于5%。说明采用复合探针荧光定量PCR法检测布鲁氏菌具有较高的准确性,有助于诊断和筛选布鲁氏菌病,具有一定的推广应用价值。     

布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体双重PCR检测方法的建立与初步应用

为建立同步检测布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体的双重PCR方法,根据GenBank上公布的布鲁氏菌Bp26基因和贝纳氏柯克斯氏体IS1111a基因,利用Primer premier 5.0软件各设计一对特异性引物,分别扩增出219 bp和130 bp的目的片段,通过优化PCR反应体系和扩增条件,建立起了能够同步快速检测布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体的双重PCR方法,该方法具有较好的特异性、可重复性和较高的灵敏性。利用该双重PCR方法对流产牛抗凝全血、血清、流产胎儿及奶液等172份临床样品进行检测,共检测到布鲁氏菌感染阳性样品53份,贝纳氏柯克斯氏体感染阳性样品10份,混合感染阳性样品2份,阳性检出率分别为30.8%、5.8%、1.2%。初步临床应用结果表明,该方法可用来安全、同步、快速、灵敏地对布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体进行检测。     

用显微切割技术和催化信号扩增法检测何杰金病瘤细胞(H/RS)中的人巨细胞病毒

为明确何杰金病 (Hodgkin’sdisease ,HD)瘤细胞中是否存在人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus,HCMV)感染 ,采用显微切割技术结合PCR方法检测HD组织及其瘤细胞Hodgkin/Reed Sternberg(H/RS)中的HCMV核酸 ;采用免疫组织化学催化信号扩增 (catalysedsignalamplification ,CSA)法检测HD中HCMV的立即早期抗原、早期抗原和基质蛋白。结果在 5 4例HD中选取 13例HD的H/RS细胞 ,经显微切割分离后有 4例 (30 8% )经PCR扩增出HCMV的核酸 ;5 4例HD组织中 ,经PCR检测有 10例 (18 5 % )扩增出HCMV的核酸 ;CSA染色显示有 6例(11 1% )HCMV立即早期抗原和早期抗原 (DDG9/CCH2 )阳性 ,5例 (9 3 % )基质蛋白 (AAC10 )阳性。对照的 17例反应性增生淋巴结中HCMV核酸的PCR检测 ,以及三种HCMV抗原的CSA检测 ,均为阴性。表明HD组织的H/RS细胞中存在HCMV核酸和抗原 ,而反应性增生淋巴结中不存在 ,提示HCMV可能参与了何杰金病的发病过程。     

内蒙古东部地区奶牛布鲁氏菌病流行学调查及分离与鉴定

为掌握内蒙古自治区东部地区奶牛布鲁氏菌病的流行现状和流行特征,在试验中采用全乳环状试验(milk ring test,简称MRT)、奶液间接酶联免疫吸附试验(indire enzyme-linked immunosorbent assay,简称iELISA)两种方法对科尔沁地区5个牛场进行了布病流行学调查,比较两种方法对检测布鲁氏菌病阳性牛的差异性。通过对内蒙古自治区东部地区5个盟市进行牛布鲁氏菌病流行学调查;最后对检出的部分阳性奶牛乳汁进行细菌分离培养,用VirB8和AMOS方法进行扩增鉴定。表明两种方法(MRT和iELISA)检测结果差异不显著;经检测17株分离株均为布鲁氏菌。布鲁氏菌分子分型扩增的鉴定显示,牛场感染的菌株为牛种布鲁氏菌。内蒙古东部地区部分饲养场布鲁氏菌病阳性率为1.67%。     

羊布鲁氏菌病4种血清学检测方法的临床应用比较

目的荧光偏振试验(FPA)、间接ELISA方法 (IELISA)、试管凝集试验(SAT)、虎红平板凝集试验(RBT)4种临床检测方法检测内蒙古地区羊布鲁氏菌病。方法 FPA方法、IELISA方法、SAT法及RBT法同时检测在内蒙古各地区随机采集的2 727份羊血清样本。结果 FPA、IELISA、SAT及RBT法对2 727份羊血清的阳性检出率分别为7.59%、7.45%、6.31%和6.20%。集约化养殖场的阳性检出率为4.80%,散户养殖场的9.41%,内蒙古地区依旧存在布鲁氏菌病的威胁。结论 FPA法检测羊布鲁氏菌病适合于临床诊断,在田间也能快速准确的诊断布鲁氏菌病。