直接荧光抗体技术在婴幼儿腺病毒肺炎早期和快速诊断上的应用

本研究用标记异硫氰酸荧光黄的3型和7型腺病毒高价免疫兔血清抗体球蛋白或精制的3型和7型腺病毒混合免疫马血清球蛋白,检查临床诊断为病毒性肺炎的婴幼儿咽壁剥落细胞中的腺病毒抗原,得到较高的阳性率。在临床诊断为其他肺炎的婴幼儿病例中,大多数的结果为阴性。在患其他痰病的一些婴幼儿都是阴性。标记的腺病毒免疫球蛋白对麻疹病毒、流感病毒和副流感病毒没有交叉反应。封闭实验说明发出的荧光是特异的。同分离腺病毒和测定双份血清内腺病毒抗体的比较,大多数符合。     

170例婴幼儿中毒型肺炎的病毒分离与血清学试验结果分析

1. 1960年11月至。1961年3月从170例婴幼儿中毒型肺炎患者的咽拭中分离出64株腺病毒,分离阳性率为37．6％。其中42株为3型,18栋为7型,其他4株不能为3型和7型血清所中和。。1961年的特点为3型多于7型。 2. 从10例咽拭分离腺病毒阳性的中毒型肺炎病例的粪便中分离出同型病毒4株,并有1例从咽拭、粪便及结膜拭子均分离出同一型病毒。 3．从同期采集的18例麻疹肺炎病例的咽拭分离出3袜腺病毒,其中2株为7型,1株不能为3型和7型血清所中和。 4．111例患儿双份血清中对腺病毒补体结合抗体有4倍以上增长者43例,阳性率为38．7％。 5．从抗体增长4倍以上的37例中,分离出病毒者24例,分离阳性率为64．8％。病毒分离阳性的33例中,补体秸合抗体增长4倍以上者占24例,血清学阳性率为72．7％。二者结果在多数病例中是符合的。 6. 97例病毒分离与血清学试验综合结果,确定为腺病毒感染者有47．4％,血清学疑阳性者27．8％,另有24．8％确定为阴性。     

婴幼儿中毒型肺炎的病原学研究

根据1958—1959年冬、春长春市婴幼儿中毒型肺炎流行与1959—1960年冬、春类倒的散发例的病原学研究结果,认为7型与3型腺病毒是本病的主要病原体。 本文从患儿咽拭和肺组织的病毒分离与鉴定,长春、北京、沈阳三地所分离的病毒型刖的一致性,患儿血清的补体结合与中和试验,从婴幼儿其他疾病或其他类型肺炎中病毒分离基本阴性的结果,并从排除其他病原体等各个方面论证了这一结论。并对7型与3型腺病毒引起中毒型肺炎流行的可能因素,加以讨论。后配：本文完成砌稿时,国内对婴幼儿腺病毒肺炎的病原学研究工作尚元系统报导。于修稿期间,见到任贵方等在中华医学杂志发麦的报告(任贵方等：中华医学杂志,48(2)：71—76,1962：戴瑩等：中华医学杂志,4B(2)：77—82,1962),其结论与我们所报告的基本一致。     

北京地区人群腺病毒感染情况的研究

目前已知人类腺病毒有34个血清型,广泛分布在世界各地,其中有10个血清型(1—7、11、14、21型)与人类呼吸道疾患有关。但世界各地感染的病毒型别不完全一样,英国、美国以1、2、6型为主,日本、苏联以3型为主。1958年在北京、长春等地流行的婴幼儿腺病毒肺炎即由腺病毒3、7型引起的。以后又在其他一些城市陆续出现类似病例。1964年后又发现11型腺病毒同样是婴幼儿腺病毒肺炎的一个重要病原。在六十年代初我国曾对腺病毒的流行情况及人群抗体水平进行过调     

由7型腺病毒引起的急性咽结合膜热的暴发流行

急性咽结合膜热(Acute pharyngo conjunctival Fever)是病毒引起的眼结合膜和咽炎的急性传染病和综合症。早年的病原学研究表明腺病毒3、7、8和14型为该病的主要病因。近年又发现肠道病毒70型(小 RNA 病毒)可引起急性出血性结合膜炎。本文报导我们对1984年8月在北京市朝阳区小学生中急性咽结合膜热暴发流行进行病原学研究的结果。我们从这次累及四千多人的流行中,分离鉴定出14株7型腺病毒、并通过临床和血清学研究,确定了所分离的7型腺病毒为本次流行的病因。     

2004年冬至2005年春引起北京地区儿童肺炎的腺病毒基因特点分析

为了解北京地区腺病毒的流行毒株,从北京儿童医院收集25份儿童肺炎患者的痰洗液标本(2004年冬到2005年春),患者的年龄在2个月到2岁,临床表现以持续高热、咳喘和气促为主。对25份标本分别用Hep-2细胞进行了病毒分离培养、腺病毒属特异性引物PCR扩增以及PCR产物的序列测定分析。结果发现25份标本中有9份PCR扩增阳性,其中2份病毒培养物观察到典型的细胞病变;将9份PCR阳性产物纯化后进行序列测定,结果7份标本核苷酸序列完全一致,同源性100%,并与GenBank发表的序列相比较,发现与腺病毒7型最为接近,同源性皆为99.7%;2份与腺病毒3型最接近,同源性为99.6%。结果表明,此次病毒分离株为腺病毒B亚群。北京儿童医院2004年12月至2005年3月腺病毒引起的肺炎主要以7型和3型为主,7型占优势,与国内其它地区的情况相似。     

1973—1975年北京地区婴幼儿病毒性肺炎的病原学研究

1973一1975年连续三个冬、春我们在北京地区对85例临床诊断为病毒性肺炎的婴幼儿病例进行了病原学研究。从59例的咽拭子分离出腺病毒,主要是7型,其次是3型。还从合并有胸膜炎的14例中10例的胸腔积液分离出型别相同的腺病毒。同型腺病毒也从5例死亡病儿的肺组织分离出来。从l例的咽拭子分离出I型副流感病毒。从60例得到急性期和恢复期双份血清进行了血清学诊断。在测定中和抗体的47例,7型或3型腺病毒中和抗体都显著升高。在测定补体结合抗体的60例中,40例的补体结合抗体也有明显的增长。从咽拭子、胸腔积液和肺组织分离出来的腺病毒代表株与同型腺病毒原型株的电子显微镜观察和比较表明,其形态一致。     

辽宁省2012年至2013年呼吸道腺病毒型别鉴定

目的基于国家重大传染病防治科技重大专项项目平台,对2012年1月至2013年12月间辽宁省采集的发热伴呼吸道症状患者标本进行检测,了解腺病毒的流行情况并对其型别进行分析。方法采集具有发热伴呼吸道症状患者的咽拭标本470份,经多重PCR检测,检出阳性标本30份,选取阳性标本进行病毒分离,共获得人类腺病毒(Human Adenovirus,HAdv)毒株20株。将所得腺病毒的核酸进行巢式PCR扩增并进行测序,获得Hexon基因序列。将基因序列在NCBI进行Blast比对。结果在分离的得到的20株腺病毒毒株中包含HAdv-2型6株,HAdv-3型11株,HAdv-5型2株,HAdv-14型1株。结论2012至2013年间,辽宁省引发发热伴呼吸道症状的腺病毒型别以2型和3型为主,同时也有少量其他型别检出。     

浙江省2019年儿童腺病毒肺炎流行病学特征分析

为了解浙江地区腺病毒肺炎的流行病学和病原学特征,本研究统计分析了2019年1月至2019年12月浙江大学医学院附属儿童医院腺病毒肺炎患儿的基本临床资料;并前瞻性的通过聚合酶链式反应(PCR)随机对部分的腺病毒阳性的肺炎患儿咽拭子进行基因扩增、测序和分型鉴定;进而构建系统发育树分析其核苷酸序列进化情况。本研究共检测咽拭子标本19650份,其中腺病毒阳性标本有4032份,腺病毒检出率为20.5%;春季和夏季腺病毒肺炎的患病率相对较高,患儿年龄主要在1~7岁。本研究所检测的99株腺病毒阳性标本经与GenBank数据库比对均为HAdV-3,通过Hexon基因全长系统进化分析得出,所检出的HAdV-3腺病毒均为Clade2进化分支。2019年浙江地区存在儿童HAdV-3肺炎的暴发流行,该病毒株未发生大的变异,均为Clade2进化分支。1~7岁的儿童为主要的易感人群。     

硝酸银对常见呼吸道病原体的抑制作用

目的证实硝酸银对常见呼吸道病原体具有抑制作用。方法采用血凝试验和鸡胚培养法观察硝酸银对副流感病毒的抑制作用;采用细胞培养法观察硝酸银对腺病毒的抑制作用;采用细菌培养法观察硝酸银对肺炎链球菌和乙型溶血型链球菌的抑制作用。结果硝酸银对副流感病毒和腺病毒有明显的抑制作用,对肺炎链球菌和乙型溶血型链球菌有极强的杀菌作用。结论硝酸银对常见呼吸道病原体有明显的抑制作用。     

人腺病毒55型感染肺部病变与外周血淋巴细胞关系研究

目的:探讨人腺病毒55型感染肺部病变与外周血淋巴细胞改变的关系及致病意义。方法:以50例经胸部CT证实为腺病毒肺炎的患者为研究对象(肺炎组),调查其外周血细胞及T淋巴细胞亚群变化情况,并与同期腺病毒55型感染未出现肺部病变的患者30例(非肺炎组)对照;亚组分析50例肺炎组中多肺叶病变与单肺叶病变患者之间T淋巴细胞变化的差异。结果:与非肺炎组患者相比,肺炎组患者急性期外周血淋巴细胞比例明显降低、单核细胞比例明显升高(P0.01);肺炎组CD3+T淋巴细胞比例、CD3+CD4+T淋巴细胞比例及CD4/CD8比值较非肺炎组均有明显降低(P0.01)。亚组分析显示,肺炎组患者肺部病变范围不同,T淋巴细胞亚群的变化亦有差异,多肺叶病变组患者CD3+CD8+T淋巴细胞比例较单肺叶病变组明显升高、CD4/CD8比值较单肺叶病变组明显降低(P0.05)。结论:HAdv-55感染引起肺炎病变时,宿主存在明显的细胞免疫功能受损,且与肺部病变程度有一定正相关。     

由腺病毒7型引起的一起游泳池暴发流行的咽一结合膜热

1984年8月上旬,北京某地区暴发流行了一种咽—结合膜热,受累的主要为6-13岁的儿童,人数达4千余人。主要症状为高热、咽痛和结合膜严重充血等。绝大多数患儿有游泳史。 我们从咽拭子和眼结合膜分泌物中分离到13株腺病毒(13/19、分离阳性率68％),经电镜和血清学试验鉴定为7型腺病毒。     

中国蝙蝠腺病毒遗传多样性研究

近期的研究表明蝙蝠可以携带腺病毒。为了进一步了解我国蝙蝠腺病毒的分布状况和遗传多样性特征,本研究采集了北京市、湖南省、江西省、云南省、贵州省和海南省六个省份的共11种蝙蝠的咽拭和肛拭样本,使用套式PCR方法进行蝙蝠腺病毒检测。对阳性结果通过克隆测序进行遗传多态性分析,并采用基于氨基酸相似性的核酸序列数据进行分子进化研究。结果表明,我国约20%的蝠种携带腺病毒,特别是大足鼠耳蝠可能普遍携带蝙蝠腺病毒。并且在贵州省南蝠样本中同时检测出两种不同的蝙蝠腺病毒。总体而言,蝙蝠腺病毒DNA聚合酶保守区核酸和蛋白序列的平均相似性分别只有66.6%和74.7%。蝠种和地域上的巨大差异可能导致了蝙蝠腺病毒的适应性进化,而形成了显著的遗传多样性。     

腺病毒新型别的研究进展

腺病毒是DNA双链病毒,与人类的多种疾病相关。迄今为止,文献报道的人腺病毒已有60多个型别。52～67型腺病毒是基于全基因组测序和生物信息学分析被发现和划分的。与以往传统血清学方法确定的51个血清型在组成方式,致病性等方面都有所不同,这些新型腺病毒大部分是由同亚属的某两个或几个血清型同源重组而成,某些病毒重组后疾病谱发生了改变。虽然重组是病毒进化的一种方式,重组现象普遍存在于新型腺病毒中,但是重组发生的机制尚不清楚,是否对人类具有潜在的危险有待进一步的研究。总之,目前新型腺病毒正逐渐受到关注,本文就新型腺病毒研究的进展展开综述,了解人腺病毒属新型别的研究现状。     

儿童肺炎肺实变住院患儿支气管肺泡灌洗液病原分析

本研究分析肺炎肺实变患儿支气管肺泡灌洗液病原谱构成,旨在为临床经验性抗感染治疗提供指导。收集2019年1月-2020年1月复旦大学附属儿科医院纤维支气管镜室诊治的住院肺炎病例临床资料,其中肺实变的诊断基于影像学证据,依托国家儿童医学中心病原学检测平台,并参考感染传染科医生解读,本研究对肺炎伴肺实变患儿支气管肺泡灌洗液标本的病原学检测结果进行回顾性分析。结果显示,286例肺炎患儿的286份支气管肺泡灌洗液标本被纳入研究,平均年龄5.5(5.8±3.1)岁,其中195例(68.2%)存在肺炎伴肺实变。总病原体检出率为76.6%(219/286),肺实变和无肺实变肺炎患儿病原体检出率分别为77.9%(152/195)和73.6%(67/91),差异无统计学意义;检出的前5种病原体均为肺炎支原体、腺病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒3型。5周岁及以上患儿肺炎支原体检出率达最高77.0%(127/165),肺实变病例和无肺实变病例肺炎支原体检出率分别为67.2%(131/195)和61.5%(56/91),差异无统计学意义。本研究结果提示,肺炎支原体、腺病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒3型是导致本研究目标人群患病的主要病原体;病原体检出率高低与是否肺实变无关。     

荧光素酶标记的重组人3型腺病毒的构建及分析

人3型腺病毒在人DSG2受体转基因鼠体内复制及侵染等生命过程尚不清楚。本研究旨在构建含萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,Fluc)报告基因的复制型重组人3型腺病毒,为可视化重组人3型腺病毒的应用奠定基础。通过PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,克隆入去掉EGFP基因的人3型腺病毒穿梭质粒pSKA3E3LR(EGFP),经双酶切后与人3型腺病毒骨架质粒pBRAd3-EGFP的PCR扩增片段经重组酶Exnase体外重组的方法,得到中间载体,最后与pBRAd3-EGFP酶切片段连接,得到重组腺病毒质粒pAd3-LUC;转染AD293细胞,将包装成功的重组腺病毒rAd3-LUC纯化并免疫动物,分析重组腺病毒的特性和在小鼠体内的免疫反应。结果显示采用体外重组、酶切连接等方法成功获得到重组人3型腺病毒质粒pAd3-LUC,线性化的pAd3-LUC转染AD293细胞包装拯救得到重组腺病毒rAd3-LUC,观察到细胞病变和检测到荧光素酶的稳定表达,rAd3-LUC免疫小鼠抗血清可以识别并中和重组腺病毒rAd3-LUC(滴度约128～256)。本研究成功构建了E3区缺失并嵌入荧光素酶的复制型重组人3型腺病毒rAd3-LUC,为监控人3型腺病毒在人DSG2受体转基因小鼠体内复制及侵染等生命过程奠定基础。     

快速获取55型腺病毒基因组序列的方法

【目的】建立快速获取55型腺病毒的全长基因组序列的方法。【方法】根据55型腺病毒的基因组特点,设计覆盖55型腺病毒基因组序列的12对引物,分别以55型腺病毒DNA为模板,扩增得到12个PCR产物,通过对12个PCR产物测序及序列拼接,获得55型腺病毒的全长基因组序列。【结果】从本院急性上呼吸道感染者咽拭子标本中分离得到一株55型腺病毒毒株SF04/SC/2016,以其DNA为模板扩增成功获得12个PCR产物,对其进行测序,并对12段序列进行拼接得到55型腺病毒的全长基因组序列,与已报到的各型腺病毒序列进行比对,采用邻位相连法构建系统发育进化树,所得序列与55型腺病毒处于同一分支,进一步确认该病原体为55型腺病毒。【结论】研究公布的序列和方法,能够实现更方便对腺病毒的快速测序,为揭示55型腺病毒的进化特点及制订疾病防控策略提供了有效手段。     

新生儿医院感染49例分析

本文以新生儿医院感染肺炎为重点进行临床分析及讨论。１９９３年１０月～１９９５年４月,共收集医院感染肺炎４９例,占同期住院病人２．７８％。其中足月儿３７例,早产儿１２例。平均住院均在两周以上,诊断院内感染者均从事痰培养、病房空气及医护人员手培养,并进行病毒检测。痰培养结果致病菌以Ｇ－杆菌为主,条件致病菌为球菌与杆菌并存。空气培养在重病监护室有条件致病菌生长同时,还有大肠杆菌生长。医护人员洗手前培养以大肠杆菌多见,而Ｇ＋球菌洗手前、后比较无差异。病毒检测多见合胞病毒,其次为流感及腺病毒。而腺病毒阳性者病情重,并均伴Ⅱ型呼衰。本文对医院感染发病因素及防治措施进行了讨论。     

条件复制腺病毒的构建

条件复制腺病毒是针对第一代复制缺陷型腺病毒在临床应用中存在的问题而构建的能在肿瘤细胞特异复制的基因治疗载体。该从其构建机制、构建方式及效力评价等方面论述了为实现特异性高效复制所应考虑的诸多方面的问题,如特异性启动子的选择,基因重组方案的设计,以及相应的效力评价体系的构建等。     

抗呼吸道病毒i—RNA免疫活性及应用研究

本文应用小儿病毒性肺炎的主要病原腺病毒及呼吸道合胞病毒免度动物,然后从免疫动物肝脾制备抗病毒i—RNA,应用ELISA和细胞毒试验分别检测二种抗病毒i—RNA的免疫活性,并在临床上观察其治疗小儿呼吸道合胞病毒及腺病毒肺炎的疗效。实验结果证明:二种抗病毒i—RNA都具有体液活性及细胞毒活性,可以明显地缩短患儿热程及住院天数。