抗原呈递过程中病毒免疫逃避的研究进展

抗原由抗原呈递细胞（ＡＰＣ）摄取并加工成肽分子,以ＭＨＣ－肽分子复合体的形式表达于细胞表面,由Ｔ细胞上的ＴＣＲ识别,激活特异的ＣＴＬ。病毒基因可编码某些蛋艇于该过程,进而逃避免疫体系的识别和清除。本文综述了这一过程中抗原呈递、病毒免疫逃避方面的一些新进展。     

病毒RNA如何逃避宿主细胞的降解

细胞RNA的降解机制不仅在基因表达调节方面具有重要作用,而且也是一种重要的病毒防御机制. 作为一种必须在细胞内增殖的微生物,病毒已经进化出了多种机制,以保护它们的RNA免被宿主细胞降解,如病毒RNA模拟宿主细胞mRNA的结构、形成磷脂包膜、形成局部二级结构、结合自己或宿主细胞编码的蛋白质和编码核酸酶增强宿主细胞mRNA降解等. 本文主要论述了病毒RNA逃避宿主细胞降解的方式,并对其应用前景进行了展望,尤其是在研发抗病毒药物方面的应用前景.     

非洲猪瘟病毒免疫逃避机制研究进展

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染引起的一种急性、出血性、烈性传染病,死亡率可高达100%,对畜牧业造成严重影响。ASFV已在非洲、欧洲及亚洲等多地蔓延,因其结构复杂且具备独特的免疫逃避机制,使得疫苗研发工作未曾取得突破性进展。系统阐述了近期ASFV研究的新进展。在探讨免疫逃避机制方面,深入阐释了ASFV运用多种蛋白质对宿主免疫系统实施调控的具体方式。详细阐明了ASFV通过干扰cGAS-STING、RIG-I-MAVS及JAK-STAT等关键信号通路,抑制干扰素生成,从而削弱宿主抗病毒能力的机制;进而剖析了ASFV编码的各类蛋白质在调控炎症反应、细胞凋亡、焦亡、自噬以及影响抗原提呈功能等诸多免疫相关进程中的作用机制,这些研究有助于深化对ASFV与宿主免疫相互作用的理解。未来ASF研究方向,一方面应借助持续革新的生物学技术,持续深入探究ASFV未知基因的功能及其在免疫逃逸中的作用机制,以探寻更多广谱疫苗及药物的潜在靶点;另一方面,需加强疫苗研发工作,设计出更具针对性与有效性的疫苗。此外,须强化ASF综合防控措施,实施分区防治,最终实现对ASF的有效防控。     

病毒利用UPP逃避抗病毒反应的研究进展

泛素-蛋白酶体途径是溶酶体外蛋白降解的主要系统,在许多细胞功能中发挥重要作用。越来越多的证据表明病毒参与泛素-蛋白酶体途径,干扰IFN信号通路和免疫受体表达、凋亡抑制及介导病毒潜伏。深入理解病毒利用泛素-蛋白酶体途径逃避宿主抗病毒反应的策略,有助于揭示病毒的致病机理和鉴定抗病毒药物新靶标。     

人类免疫缺陷病毒1型逃避RNA干扰的研究

用RNA干扰(RNAi)技术来阻断特定基因的表达,为治疗诸如人类免疫缺陷病毒1型(HIV—1)等慢性病毒感染提供了一种新的手段。虽然,通过小干扰RNA(siRNA)以降解序列特异性的mRNA可选择性地抑制一些在HIV—1复制过程中起关键作用的病毒蛋白,但RNAi技术仍然存在着许多问题亟待解决。本文就HIV—1特异性的RNAi技术作用的潜力和持久性作一研究。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的免疫学和免疫逃避研究进展

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。由于该病毒介导的复杂的免疫逃避机制以及抗原性基因的异质性等特征,目前疫苗产品不能提供十分有效的保护。对于基因变异较大的流行毒株,疫苗提供的免疫保护更为有限。本文就PRRSV免疫学和免疫逃避的最新研究进展进行归纳总结,以期为PRSSV防控,新型疫苗设计等提供参考。     

病原菌逃避宿主细胞防御的策略

病原菌对宿主致病是病原菌与宿主复杂相互作用的结果。病原菌与宿主相互作用可造成宿主在细胞、组织及器官不同水平的损伤。病原菌对宿主的致病性及毒力,一方面在于病原菌,另一方面在于宿主因素以及宿主与病原菌的相互作用。病原菌-宿主在细胞水平的相互作用是病原菌感染致病的重要环节。结合本课题组对猪链球菌的研究,从黏附与定殖、侵袭、逃避与扩散等方面概述病原菌逃避宿主细胞防御的机制。     

病原菌逃避单核-巨噬细胞杀灭策略的研究进展

单核-巨噬细胞具有强大的吞噬功能,在机体固有免疫和适应性免疫中均发挥着重要作用,可有效保护宿主免受多种致病菌的感染。病原菌在与宿主单核-巨噬细胞的长期相互作用过程中,逐渐形成多种逃避杀灭的有效策略,得以在宿主体内存活并增殖。本文从病原菌抗巨噬细胞吞噬作用、抗巨噬细胞内吞噬溶酶体降解作用、诱导和抑制巨噬细胞凋亡或坏死4个方面,综述近年来国内、外关于病原菌逃避单核-巨噬细胞杀灭策略的研究进展。     

RNA干扰机制及其应用研究进展

2006年诺贝尔生理学或医学奖,授予给了美国科学家Andrew Z.Fire和Craig C.Mello以表彰他们发现了RNA 干扰(RNAinterference RNAi)现象,使人们在基因治疗传染性、恶性肿瘤等危重疾病领域取得了突破性的发展.本文主要综述了RNA干扰系统的组成、分子机制、作用特点及其在探索基因功能、传染性、恶性肿瘤的基因治疗和药物研发等四个方面的应用.     

干扰骨髓基质细胞Hes1基因对Mash1基因表达的影响

目的观察对体外培养的骨髓基质细胞Hes1基因干扰后Mash1基因的表达变化。方法采用全骨髓培养法体外分离培养获得骨髓基质细胞,倒置显微镜下观察其形态变化,应用实时定量PCR技术分析在干扰Hes1基因表达的情况下Mash1基因表达的变化。结果应用200nM,100nM,50nM,25nM四种不同浓度梯度的Hes1的siRNA干扰抑制Hes1基因,与对照组相比Hes1表达均降低。200nM干扰后Hes1基因降低的程度是原来的0.036(P<0.05),50nM干扰后Hes1基因降低的程度是原来的0.076(P<0.05),优于其他浓度的干扰效果。Hes1降低可使Mash1基因表达增加,且Hes1降低越显著,Mash1表达增加越高。结论体外培养BMSCs过程中干扰Hes1基因对Mash1基因的表达有影响,且呈负相关调控关系。     

马铃薯Y病毒CP基因RNAi载体构建与干涉效果测定

RNA沉默(RNAi)介导的植物抗病毒研究是近年来引起广泛关注的一项植物抗病毒基因工程策略.马铃薯Y病毒(PVY)在世界范围内引起马铃薯、烟草等重要经济作物的病害,并且造成严重的经济损失.本文以PW的外壳蛋白(CP)基因为模板扩增300 bp和354 bp两个片段,正向和反向分别插入植物表达载体pROKⅡ的35S启动子下游,从而构建了以PVY的CP基因为靶标的RNAi植物表达载体pROKY300,转入农杆菌EHA105中,以农杆菌渗入法在本氏烟中瞬时表达与PVY CP同源的hairpin RNA.结果表明,瞬时表达的hairpinRNA有效干涉了PVY侵染.     

棉蚜Catb5基因RNAi载体的构建及其对烟草的转化

依据细胞色素氧化酶亚基Ⅰ序列的多态性设计特异性引物,通过PCR技术扩增出的特异性条带鉴定为棉蚜。提取棉蚜总RNA,利用RT-PCR技术从棉蚜中扩增出大小为515 bp的Catb5目的基因,进一步将两段Catb5基因分别正向和反向连接到植物表达载体pBi35SG12上,构建了pBi35SC5 RNAi表达载体,并通过农杆菌介导法导入烟草中,PCR检测表明已得到转基因烟草再生苗。     

甘蓝型油菜Fad2与Fae1基因双干扰RNAi载体的构建

将来源于甘蓝型油菜XY15的Fad2与Fae1基因编码区,长度分别为349bp和426bp的两个保守序列片段连接成807bp的大片段。然后分别以正反向插入到pFGC5941干扰载体查耳酮合成酶内含子的两端,构建成RNAi载体。以期在菜籽中转录后能有效抑制Fad2与Fae1两个基因的表达。所构建的RNAi载体最终序列全长3kb,经限制性内切酶消化、PCR扩增验证和序列测定,证明目标序列与GenBank数据库中的碱基序列一致,并且为正反向插入到pFGC5941载体上。通过农杆菌介导的油菜转化,已获得油菜抗性再生植株144个。     

R NAi 影响因素初探

自1998年发现RNA干扰现象以来,RNAi已经成为一个新兴的实验技术,广泛应用于基因功能分析、肿瘤和疾病的基因治疗等研究领域。在进行RNAi实验时,效果的持久性、毒副作用、先天性免疫和病毒逃逸这些因素与实验效果密切相关。本文就这些突出因素做一综述,以期给从事RNAi实验的研究者们提供参考。     

应用RNAi技术培育抗2种病毒病的转基因烟草

分别提取烟草普通花叶病(TMV)和烟草黄瓜花叶病（CMV）的病毒RNA。经反转录和外壳蛋白阅读框PCR扩增,获得TMV和CMV外壳蛋白基因cDNA, 分别进行两种病毒已知株系cDNA序列比对获得各自的保守序列,设计干涉序列,将干涉片段扩增产物连接到pMD18-T的相邻酶切位点,制备融合序列,并将其正向和反向序列插入pUCCRNAi载体,再转化到pCAMBIA2300-35S-OCS表达载体中。利用农杆菌LBA4404侵染烟草K326,获得3份含有TMV和CMV外壳蛋白基因干涉序列的转化材料,经分子鉴定证实干涉序列已导入烟草,并采用荧光定量PCR技术对其mRNA表达差异进行分析。抗病性调查表明转化烟株对TMV和CMV抗性都显著增强。     

PolⅡ型启动子K14实现组织特异RNAi

RNAi(RNA interference,RNAi)是继基因打靶技术后的一种高效的研究基因功能的方法。细胞学实验和小鼠模型的研究结果表明,PolⅡ型启动子可以实现组织特异的RNA干扰,从而为鉴定基因在特定组织中的功能及作用机理提供了一个强有力的研究方法。为了能将这种方法用于转基因绵羊生产,探讨基因与绵羊毛囊发育的关系及其作用机制等,文章利用PolⅡ型CMV启动子和毛囊组织特异表达的人角蛋白14(K14)基因的启动子驱动eGFP-shRNA融合转录本的生成,从而实现敲低目的基因的表达。体外基因表达沉默效率分析(pEGFP-C1-shRNA和psiCHECK-BMP4双质粒共转染Hela细胞)结果表明,6个干扰序列均能有效地抑制BMP4基因的表达,抑制效率达到60%以上;体内表达沉默分析(只转染pEGFP-K14-shRNA质粒转染小鼠皮肤细胞系JB6-C41)的实验结果与体外分析结果相似,除3#序列外,其余干扰序列对BMP4基因的抑制效率都在60%以上,其中5#序列的效率达到80%以上。siRNA诱导的目标基因沉默中mRNA和蛋白水平的下降显著正相关。结果表明,设计构建的由PolⅡ型启动子K14驱动eGFP-shRNA融合转录本的形成,从而实现RNAi的研究方法是可行的,利用这种方法可以实现在特定细胞中敲低目的基因的表达水平。为在大家畜特别是绵羊中应用RNAi的方法分析目的基因在毛囊发育、对不同类型毛囊生长发育的诱导和调节等作用机理的研究提供一个参考方法。     

RNAi技术在转基因动物中的应用

RNAi可以作为一种有效的工具用来产生转录后沉默的效果,从而抑制特定基因的表达,已经在线虫、果蝇、小鼠、大鼠等模式生物中得到成功应用。RNAi转基因小鼠的出现,使得在哺乳动物整体水平研究靶基因的敲低成为可能。文章以RNAi转基因小鼠为代表,就转基因载体的设计策略、基因敲除与基因敲低的比较、RNAi转基因动物的优势以及目前存在的缺陷等作一总结,并展望了RNAi转基因动物对功能基因组研究的贡献以及应用前景。

     

昆虫RNAi技术及其应用

RNAi是近几年发展起来的抑制基因表达的新技术。部分昆虫存在RNAi信号的系统性传播现象,可以将dsRNA直接注射进昆虫的卵、血腔或局部组织,引发远距离靶基因的特异性沉默,建立起了Embryo RNAi,Larval RNAi,Adult RNAi,Parental RNAi,Feeding RNAi和基于转基因技术的可遗传RNAi等昆虫RNAi技术,使RNAi迅速成为了研究昆虫尤其是非模式昆虫基因功能的主要方法。文章拟就RNAi的系统性、昆虫RNAi技术及其应用进行综述。