植物冰冻切片条件的优化及其与石蜡切片在组织化学应用中的比较

冰冻切片是植物组织学研究中一项重要的实验技术,冷冻温度和冷冻时间是决定切片质量的关键因素。通过比较15种冰冻切片条件,得出植物组织直接冰冻切片较适宜的冷箱温度、冷台温度和冷冻时间。同时,通过对5种植物的不同组织进行组织化学染色,比较了新鲜材料直接冰冻切片与常规石蜡切片在不同化学成分鉴定上的异同及各自的适用范围。结果表明,对于多糖、蛋白质和角质,两种切片方法的鉴定结果比较一致,但对于脂肪只能采用冰冻切片技术。研究结果对植物组织学实验和研究方法的改进具有一定的参考价值。     

一种用于DAPI染色的方法--Steedman's wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedman's wax 包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法.Steedman's wax 作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5 μm的连续切片.Steedman's wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色.与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedman's wax 包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能.     

适合于植物花器官的冰冻切片技术

通过对4种植物主要花器官冰冻切片技术的各个环节及参数的研究,建立了一种适合于植物花器官的冰冻切片技术,即蔗糖保护-液氮速冻-冰冻切片法。其具体程序是：材料经固定和冷冻保护(蔗糖为冷冻保护剂)后进行速冻包埋(液氮为包埋剂);尔后进行冰冻切片;切片经干燥和染色(或者不染色)后,在显微镜下观察并摄影。此法为植物花器官的细胞生物学和分子生物学研究提供了简便、快速和高效的切片技术。     

微波快速石蜡切片技术及其在肾穿刺活检中的应用

肾穿刺活检技术推动了肾脏病理的迅速发展,使肾脏病理学整体知识不断更新和提高,为临床诊断和治疗提供了大量的依据.由于肾脏活检组织标本小、切片薄,在固定、脱水、透明、浸蜡、切片及染色等方面均与常规石蜡切片有所不同,其技术要求较高.肾穿刺石蜡切片时间较长,相对制约了急性肾功能衰竭、急进性肾炎、肾移植急性排斥反应等急重症的快速诊断.     

一种简单而快捷的半薄切片脱树脂新方法

目前,在HE染色、特殊染色或免疫组织化学染色研究方面多采用普通石蜡包埋切片,其切片厚度可薄达4μm,若更薄的切片,切割有一定的难度.对于各种染色而言,越薄的切片,细胞与组织结构越清晰,染色效果越好.环氧树脂(Epon)包埋的组织块不仅用于透射电子显微镜超薄切片的制备,也可用于光镜半薄切片的制备[1].经典的脱树脂的方法是将半薄切片置于氢氧化钠的无水乙醇饱和溶液中浸泡24h,然后再充分水洗.该法耗时长,容易脱片,本实验中摸索出一种简单而快捷的脱树脂的方法,现介绍如下.     

植物树脂半薄切片染色方法的改进

以双子叶植物棉花的幼根、幼茎、叶、胚珠和单子叶植物玉米茎为实验材料,制作树脂半薄切片,对样品染色方法等进行了改进,将蕃红-固绿染色、苏木精-伊红染色、氯化铁-苏木精染色方法系统应用于植物树脂半薄切片制备中,获得了结构完整、染色清晰的棉花各器官和玉米茎半薄切片,建立了一套适合于植物树脂半薄切片制作的染色方法。     

盐生肉质草本植物海马齿叶片石蜡切片简易方法

海马齿是海边盐生肉质草本植物,由于叶片的肉质化,传统石蜡切片制作路线不能制作出结构完整,效果较好的切片.本实验以传统的石蜡切片方法为基础,在固定方法选择,脱水时间控制,包埋温度,染色等方面做了适合海马齿叶片特点的改良,固定方法采用戊二醛固定液固定24 h,并洗脱;脱水每级梯度时间为1 h,包埋温度在100℃,染色方法采用固绿染色法.结果表明:采用这种改良的方法可以制作出染色清晰,组织结构完整的海马齿叶片切片.这对其它肉质化植物的石蜡切片制作有着借鉴作用.     

改良的石蜡切片技术在基础生物学实验教学中的应用

石蜡切片技术是一项在生物组织学及病理学研究中常用的实验技术。设计“斑马鱼性腺组织石蜡切片”实验,并将改良的技术转化为适合本科基础生物学实验教学的内容。该实验分为组织样本的处理和切片的制备两部分,每部分2~3个学时。通过该实验,学生可以掌握石蜡切片技术的实验原理、实验方法及光学显微镜的使用,并为后续免疫组织化学以及原位杂交等一系列实验的开展奠定了基础。     

石蜡切片法中染色技术的改良

石蜡切片是观察动植物组织最直接有效的方法之一。本实验对水稻品种9311的叶片进行切片并用1%的番红—乙醇染液和1%的苯胺蓝—乙醇染液进行染色,结果显示此改良方法得到的组织比传统石蜡切片更完整,染色的效果比传统石蜡切片更清晰,并且利用此方法对水稻叶片进行制片,可以大量缩短制片后期复水及脱水的时间,提高工作效率。     

甲状腺组织冷冻切片的优化

目的优化冷冻切片的关键条件,以期提高甲状腺组织冷冻制片效率、切片质量与染色效果。方法收集术中新鲜送检的甲状腺标本,通过对比实验,比较冷冻切片制作环节中取材厚度、速冻方法与染色方法等因素对制片质量的影响。结果甲状腺组织冷冻切片取材厚度以0.2~0.3cm为佳;预先制作“冰垫”的托头并于上方加盖冷冻冰锤,有利于提高速冻效率、提高组织结构清晰度、减少组织块崩裂、减少冰晶、减少裂隙;机染有利于提高染色优良率并减少染色时间。结论选择适当的取材厚度、优化速冻方法、采用优质的染色方法,可显著提高甲状腺组织冷冻切片的制片质量,为精准的术中病理诊断奠定基础。     

脂肪组织冰冻切片简易操作技术

组织切片的染色与观察是细胞生物学实验中的重要内容之一,在教学过程中,经常用到冰冻切片技术,也就是借助低温冷冻将组织快速冻结达到一定的硬度进行制片的一种方法。由于冰冻切片机购价昂贵,在高等院校教学单位,一般都安排专人管理与操作,因此在细胞生物学教学中,无法让学生真正亲自操作,获得锻炼。     

人体及动物组织H.E染色石蜡切片法的技术改进

报道人体及动物组织石蜡切片方法的全面革新技术。以组织块的固定、苏木精染色和脱水同时进行为主要技术特征,改进了某些操作细节,获得了良好的效果。     

一种用于DAPI染色的方法Steedman＇s wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedrnan‘s wax包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法。Steedrnan‘s wax作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5μm的连续切片。Steedrnan‘s wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色。与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedrnan‘s wax包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能。     

FISH检测乳腺癌石蜡组织切片的酶消化时间的探究

目的:探讨在FISH实验中,乳腺癌石蜡组织切片的最适酶的消化时间.方法:收集42例手术切除的乳腺癌标本,经过固定、包埋和切片,其中12份标本的组织切片进行胃蛋白酶消化时间的优化实验,分别观察酶的消化时间为10分钟,15分钟,20分钟和25分钟对FISH结果的影响,随后在酶的优化条件对剩余30份组织切片继续杂交实验.结果:酶消化10min提示消化时间不足,酶消化15min提示消化时间适合,结果能很好地判读,而酶消化25min提示消化过度.对剩余的30份组织切片进行了18min的消化,杂交信号基本都能判读.结论:本实验条件下,石蜡包埋切片的最适消化时间在15-20min,不同实验室及不同的FISH处理过程会略有差异.所以建议FISH实验之前,应对酶的消化时间首先进行摸索.     

比较三种防冰晶法对切片保存效果的影响

目的 比较冰冻切片技术中几种防冰晶方法对切片保存效果的影响。方法 分别使用液氮骤冷组织、高渗透压脱水法、单纯OCT胶包埋等几种方法后行冰冻切片、HE染色后,分别于当天、1、3、6个月后比较其染色效果,选出最佳保存方法。结果 单纯OCT包埋法在1个月后染色明显变浅,冰晶数量最多,而在3、6个月后染色基本接近背底色,冰晶面积已占据近半个视野,组织结构破坏极其严重;高渗透压脱水法在1个月后染色深度及冰晶数量上无明显变化,但3、6个月后则明显变浅,冰晶数量明显增加;而低温骤冷法在染色后的几个月,染色深度及冰晶的数量均无明显的变化,结构基本维持染色当天的状态。结论 低温骤冷法是这三种防冰晶法中最利于保存切片的方法。     

声带组织切片方法的比较

目的:探讨犬声带冠状位切片与水平位切片各自的特点,为声带实验提供合适的切片方法。方法:家犬4只,2只取材后行冠状位石蜡切片,2只取材后行水平位石蜡切片。通过HE染色观察声带固有层的一般组织结构,Masson三色染色观察固有层中胶原的排列情况。结果:HE染色示冠状位、水平位切片均可见声带表面被覆复层鳞状上皮,固有层内有大量排列紧密的纤维组织,纤维组织中夹杂少量腺体,固有层下方为肌层。冠状位切片可观察声带某一点冠状面固有层的情况,若观察整个声带的情况需声带连续切片;水平位切片可在一张切片中观察到前联合、声带膜部及声带突部位的固有层情况,解剖标志明显,利于定位。Masson三色染色示冠状位、水平位切片均可见固有层浅层有较细的胶原纤维束,中层有较粗的纤维束与较细的纤维束交织排列,深层纤维束排列更紧密。结论:冠状位切片可观察声带某一点冠状面固有层的整体情况,水平位切片可在一张切片中观察到前联合、膜部及声带突部位的固有层情况。     

石蜡切片刀的改进研究

以手术刀片代替传统的切片刀,通过肝、肾、脾、肺、心肌、气管等器官所作的对比性切片试验表明,该切片刀不仅达到了原有切片刀的性能,还能做1—3微米半薄切片。染色后在10×10、10×40显微镜下,整个切片完整无损,厚度均匀,各类细胞结构清晰易辨。该切片刀不需磨鐾,省时省力,操作简便,经济实用。特别适合基层实验室的组织及病理学的教学科研工作。     

动物病理组织制片过程的体会

组织切片技术是兽医科学研究和临床学观察组织病理形态变化，进行疾病诊断的一种重要方法，制作优质的组织切片，取材新鲜，固定完全，脱水彻底，透明适度，浸蜡充分，切片要薄，染色良好，如在某一步骤上不加注意，即将会造成事倍功半，但在实际工作中，常由于某些人为因素，使切片质量不佳，甚至影响研究和诊断的结果，本文介绍了我室制片过程中人为现象及其原因和纠正方法的体会，从而制出优质的组织切片标本。     

冰冻切片制作体会及常见问题

目的:探讨冰冻切片制作过程中的影响因素及改进措施,提高切片质量,确保实验结果科学性、稳定性及可靠性.方法:从标本的取材、制片以及固定等多个环节阐述冰冻切片常见问题.结果:通过调整切片机的相应设置并且在冰冻切片多个环节中采取了相应措施,使切片更完整,厚薄均匀,无脱片和冰晶空洞现象产生,切片质量优良.结论:制作出高质量的冰冻切片需在取材处理、切片、固定等诸多环节上精益求精,这对冰冻切片这一专业性很强的实验技术的质控有着重大意义.     

一种在两栖类胚胎的免疫组织化学研究中有多种用途的方法

本文介绍了我们最近发展的一项用于两栖类胚胎的免疫组织化学研究的技术。两栖类胚胎经过适当的化学固定以后,用振动切片机可以得到50—100 μ的切片。我们用这样的切片进行免疫萤光和免疫酶标染色,均得到满意的结果,可以进行光镜(共聚焦显微镜,普通显微镜)及透射电镜的观察。由于在整个过程中避免了使用有机溶剂及包埋剂,所以最大限度地保存了抗原性。与传统的各种免疫组化技术比较,切片的各部分组织均能迅速与抗体反应,组织保存相当完好,可以满足电镜观察的要求。运用这种方法,还可以将同一胚胎的不同切片分别用于光镜和电镜观察,使结果更具说服力。