中国丝孢酵母属的几个新种和新记录

作者从中国的北京、湖北等地的鸟粪,霉变柿子以及酒药中分离到了三株未描述的丝孢酵母菌。本文描述了这三个新种:板仓丝孢酵母(Trichosporon bancangense),北京丝孢酵母(Tr.beijingense)和中国丝孢酵母(Tr.sinense)并讨论了它们与属中近似种的差别。本文还发现了丝孢酵母属的4个新记录:皮刺丝孢酵母(Tr.aculeatum),埃利丝孢酵母(Tr.eriense),斐氏丝孢酵母(Tr.figueriae)和蜜二糖丝孢酵母(Tr.melibiosaceam)。     

三个发表于国内的丝孢酵母种名分类地位的订正*

最新的酵母菌分类系统,丝孢酵母属Trichosporon Behrend仅限于产生节孢子的担子菌酵母的无性型。因此,以前根据该属旧的定义在国内发表的三个新种板仓丝孢酵母T. bancangense、北京丝孢酵母T. beijingense和中国丝孢酵母T. sinense的分类地位,需要进行调整。根据26S rDNA D1/D2区的序列分析和最新标准方法重新测定的生理生化反应,发现上述三个种名分别是子囊菌酵母Saccharomycopsis fibuligera, Pichia burtonii和Issatchenkia orientalis的异名。     

脂肪酶产生菌分离,鉴定及酶性质的研究

从含油污泥中分离筛选出１７株产脂肪酶菌株,对其中一株进行鉴定,为无花果丝孢酵母（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｆｉｇｕｅｒｉａｅ）．研究了该菌的最适产酶条件,并对其部分酶性质进行了研究．     

关于皮状丝孢酵母（Trichosporon cutaneum）ST851破壁条件的研究

用脱壁酶（纤维素酶、半纤维素酶和蜗牛酶）作用于皮状丝孢酵母ＳＴ８５１制备原生质体。本文就酶的种类、酶液浓度、酶作用时间与温度、酶混合时间、混酶作用效果、酵母细胞的不同生长期诸因素对ＳＴ８５１原生质体形成的影响,进行了较为详尽的探讨。结果表明采用混酶作用（即先用纤维素酶和半纤维素酶预处理后再用蜗牛酶作用）是较理想的破壁条件,在ｐＨ５．８、３７℃条件下作用３．５－４ｈｒ,破壁率最高可达９５－９８％。     

发酵性丝孢酵母(Trichosporon fermentans)发酵产油脂的研究

通过摇瓶发酵,考察了碳源浓度、氮源种类和浓度对发酵性丝孢酵母(Trichosporonfermentans)发酵产油脂的影响,对发酵产油脂条件的初步优化结果为:在葡萄糖100 g/L、蛋白胨1.8 g/L、初始pH 7.0的培养基中,以10%的接种量,于33℃、190 r/min的摇床上发酵120 h,可得菌体生物量为18.2 g/L,干细胞的油脂含量为68.5%。     

发酵性丝孢酵母酯酶的稳定性研究

以发酵性丝孢酵母胞壁酯酶为研究对象,研究了其在不同理化条件下的稳定性。结果表明：0 ℃保存24 h,酯酶仍保持81.5%原酶活;在40 ℃完全失活;5 mmol/L K⁺、Mn²⁺和Fe²⁺提高酶活力6.9%以下,5 mmol/L Ca²⁺、Cu²⁺分别降低酶活力90.7%和73.3%;1%(质量分数,下同) Tween-40和TritonX-100保持77%以上原酶活,1% Tween-80提高酶活力23.3%,1%十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）和十六烷基三甲基溴化铵 （Cetyl trimethyl ammonium bromide,CTAB）完全抑制酶活;5%甘油、阿拉伯胶和糊精分别提高酶活力57%、29.6% 和2%,5%可溶性淀粉和牛血清蛋白（Albumin from bovine serum,BSA）分别降低酶活力20.4%和71.5%。发酵性丝孢酵母酯酶热稳定性差,宜10 ℃以下贮存,甘油对其保护作用良好,BSA强烈抑制该酶活性。该酯酶对处理含油脂废水和增强洗涤剂洗涤效果有潜在的应用价值。     

三种拮抗酵母菌对苹果采后青霉病的抑制效果

从苹果果实上分离获得的50余种酵母菌中筛选出了能够有效地抑制苹果青霉病（Peniclium expansum Link)的丝孢酵母（Trichosporon pullulans(Lindner.)Diddens and Lodder)。罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii(Kuffer.)skin-ner)和粘红酵母（Rhodotorula glutinis(Fresen.)F.C.Harrison)。其中,抑病效果最好的T.pullulans是一种用于采后果实生物防治的新型拮抗菌,研究了这三种拮抗菌不同浓度处理和外加营养物质以及与钙配合使用对苹果青霉病的抑病效果。实验结果表明;酵母菌浓度越高,抑病作用越强;外源营养物质的加入削弱了酵母菌的拮抗效果;在C.laurentii的细胞悬浮液中加入0.18mol/L的CaCl2能显著提高其抑病能力。但增加CaCl2对T.pullulans和R.glutinis的抑病效果却没有明显作用。     

丝孢酵母高甲硫氨酸突变株的选育及营养调控

以丝孢酵母(Trichosporon Behr)ST851为原始菌株,经紫外线诱变,在含乙硫氨酸的双层平板上筛选到多株抗乙硫氨酸突变株。其中ST851-10株抗乙硫氨酸浓度达到350μg/ml,其菌体蛋白质含量由40.5％提高到44.3％,菌体甲硫氨酸含量由20.45mg/g-DCW增加到29.32mg/g-DCW。在以苹果渣为碳源、尿素为氮源、硫酸镁作硫源的最适培养条件下,固态发酵24h后,蛋白质和甲硫氨酸含量较原始菌株分别提高了15.8％和44.9％。培养基中C/N值低有利于甲硫氨酸的合成,C/N值高则适合于菌体生长。在苹果渣固态发酵过程中,适当补加氮源既有利于菌体生长和甲硫氨酸的合成,又可起到调节培养基pH值的作用。     

热带假丝酵母产生子囊孢子的条件及单倍体分离的研究

本文研究了诱导热带假丝酵母子囊孢子产生和子囊破壁的条件,以及单倍体分离和鉴别方法.结果表明:NaAc、KCl这两种成分即可满足热带假丝酵母的产孢营养要求,在含有NaAc 8.2 g/L、KCl 1.8 g/L的琼脂培养基中,28℃培养7 d,热带假丝酵母细胞的产孢率可达到47.5%;单纯使用蜗牛酶对破除热带假丝酵母子囊壁的效率甚低,酶解液加入适量的石英砂同时振荡处理4 h左右,可以显著提高对热带假丝酵母子囊破壁速率.用这种方法处理,绝大多数子囊壁均可破除.子囊破壁处理后再以52℃处理10 min杀死残余的营养体细胞,分离物的单倍体孢子比例可由灭活处理前的48%,提高到76%以上.     

三种拮抗酵母菌对苹果采后青霉病的抑制效果

从苹果果实上分离获得的50余种酵母菌中筛选出了能够有效地抑制苹果青霉病(Penicilium expansum Link)的丝孢酵母(Trichosporon pullulans (Lindner.) Diddens and Lodder)、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii (Kuffer.) Skinner)和粘红酵母(Rhodotorula glutinis (Fresen.) F. C. Harrison).其中,抑病效果最好的T. pullulans 是一种用于采后果实生物防治的新型拮抗菌.研究了这三种拮抗菌不同浓度处理和外加营养物质以及与钙配合使用对苹果青霉病的抑病效果.实验结果表明:酵母菌浓度越高,抑病作用越强;外源营养物质的加入削弱了酵母菌的拮抗效果;在C. laurentii的细胞悬浮液中加入0.18 mol/L 的CaCl2能显著提高其抑病能力,但增加CaCl2 对T. pullulans 和R. glutinis 的抑病效果却没有明显作用.     

耐碱性脂肪酶产生菌的选育及酶学性质的研究

从山东省济南市植物油厂的含油土壤中分离筛选到一株耐碱性脂肪酶产生菌,经初步鉴定为丝孢酵母属（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）对该菌株脂肪酶合成受制霉菌素及琥珀酸的影响的情况进行了研究,经诱变筛选抗药性突变株,使酶活力提高了１５５％,还对该突变株的产酶条件及酶学性质进行了研究,并对有关机理进行了讨论。     

脂肪酶高产菌株选育和菌种库的建立

从山东省济南市植物油厂、肉联厂、乳品厂、菜市场等处的含油土壤中分离筛选到80余株脂肪酶活性较高的产生菌,包括细菌、霉菌、酵母等各种类型,我们对其中的部分菌株进行了形态学及酶学性质的初步研究。一株酶活较高的菌株Y-11经鉴定为丝孢酵母属（Trichosporon）,用紫外线及亚硝酸对其进行了双重诱变、然后用制霉菌素及琥珀酸钠筛选耐药性突变株,使酶活提高155%,并将筛选到的菌株建立一个能够产生各具特色的脂肪酶的菌种库,为今后进一步开展脂肪酶应用研究打下基础。     

响应面法优化产酰胺酶发酵培养基

采用响应面分析方法,对阿萨希丝孢酵母（Trichosporon asahii）ZZB-1产酰胺酶的发酵培养基进行了优化。运用单N子试验筛选出麦芽糖和酵母浸膏为最适碳源、氮源,金属离子Ca^2＋、Mn^2＋可提高发酵酰胺酶产量;通过最陡爬坡实验逼近以上4个因子的最大响应区域后,采用Box—Behnken响应面分析法,确定产酰胺酶最佳发酵培养基为麦芽糖18．84g／L、酵母浸膏9．55g／L、NaC15g／L、KH2PO41g／L、MgSO4·7H2O0．2g／L、FeS040．001g／L、CaC0370．84μmol／L、MnS0465．39肚mo[／L（1％丙烯酸诱导）,NH4·H2O调节pH至7．0。培养基优化后酰胺酶产量由初始2554U／L提高到4156U／L,为原始发酵培养基配方酶活产量的1．63倍。     

掷孢菌科的研究II．中国叶表掷孢酵母的初步分类及掷孢酵母属的种类

作者多年来从我国禾本科等植物叶表分离了大量掷孢酵母,本文重点报道70株掷孢酵母与类酵母的初步分类,共分为三属,即掷孢酵母属(Sporobolomyces),布勤掷孢酵母属(Bul-lera)与腥掷孢菌属(Tilletiopsis);其中掷孢酵母属占75％。至于53株掷孢酵母,共分为三种,即攻红掷孢酣母(Sporobolomyces roseus)、赭色掷孢酵母(Sporobolomyces salmonicolor)、Sporobolomyces shibatanus);经统计,后者最为常见,占此属的84％。这些种在我国尚未见报道,作为新记录。     

掷孢菌科的研究 Ⅱ.中国叶表掷孢酵母的初步分类及掷孢酵母属的种类

作者多年来从我国禾本科等植物叶表分离了大量掷孢酵母,本文重点报道70株掷孢酵母与类酵母的初步分类,共分为三属,即掷孢酵母属(Sporobolomyces),布勒掷孢酵母属(Bul-lera)与腥掷孢菌属(Tilletiopsis);其中掷孢酵母属占75％。至于53株掷孢酵母,共分为三种,即玫红掷孢酵母(Sporobolomyces roseus)、赭色掷孢酵母(Sporobolomyces salmonicolor)、Sporobolomyces shibatanus);经统计,后者最为常见,占此属的84％。这些种在我国尚未见报道,作为新记录。     

梗孢酵母属的一个新种

作者于1978年从福建省福州市西湖公园的芒果花中分离出一株酵母1519。该菌株不产生子囊孢子、掷孢子,亦未见到有锁状连合。未发现有性繁殖。无性繁殖是在母细胞上产生小梗,小梗上产生子细胞,子细胞还可再生小梗再生子细胞。如果子细胞不脱落则成链状或分枝的链状。不发酵任何糖。按照形态和繁殖特征只符合Lodder(1970)酵母分类专著中半知菌部分的梗孢酵母。因此将它放入梗孢酵母属,命名为福州梗孢酵母(Sterigmatomyces fuzhouensis sp.n.)。     

丝孢酵母脂肪酶的酶学性质和化学修饰

实验室筛选到的一株丝孢酵母Trichosporon sp.脂肪酶经过硫酸铵沉淀和一系列的层析步骤分离纯化到电泳纯。对纯酶的酶学性质研究表明,此酶的分子量为28kD,pI为pH8.7,最适作用温度40℃,最适作用pH为8.0。随后利用不同的化学修饰剂对酶蛋白进行修饰,通过酶催化活力的改变对位于酶活性位的氨基酸残基进行分析,结果表明酶活性位可能含有组氨酸、丝氨酸和谷氨酸(或天冬氨酸)。最后,对此酶的氨基酸成分进行了分析,结果表明,此酶分子中天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸含量高,两种碱性氨基酸精氨酸、赖氨酸及组氨酸的含量也比较高,而脯氨酸、色氨酸的含量相对较低。     

三个发表于国内的丝孢酵母种名分类地位的订正

最新的酵母菌分类系统,丝孢酵母属Trichosporon Behrend仅限于产生节孢子的担子菌酵母的无性型。因此,以前根据该属目的定义在国内发表的三个新种板仓丝孢酵母T.bancangense,北京丝孢酵母T.beijingense和中国丝孢酵母T.sinense的分类地位,需要进行调整。根据26SrDNA/D 1/D2区的序列分析和最新标准方法重新测定的生理生化反应,发现上述三个种名分别是子囊菌酵母Saccharomycopsis fibuligera,Pichia burtonii和Issatchenkia orientalis的异名。     

Optimization of fermentation medium for amidase production by response surface methodology

采用响应面分析方法,对阿萨希丝孢酵母(Trichosporon asahii)ZZB-1产酰胺酶的发酵培养基进行了优化.运用单因子试验筛选出麦芽糖和酵母浸膏为最适碳源、氮源,金属离子Ca2+、Mn2+可提高发酵酰胺酶产量;通过最陡爬坡实验逼近以上4个因子的最大响应区域后,采用Box-Behnken响应面分析法,确定产酰胺酶最佳发酵培养基为麦芽糖18.84 g/L、酵母浸膏9.55 g/L、NaCl 5g/L、KH2 PO41g/L、MgSO4·7H2O 0.2 g/L、FeSO40.001g/L、CaCO370.84 μmol/L、MnSO4 65.39 μmol/L(1％丙烯酸诱导),NH4·H2O调节pH至7.0.培养基优化后酰胺酶产量由初始2554U/L提高到4156 U/L,为原始发酵培养基配方酶活产量的1.63倍.