红花菜豆（矮生红花变种）凝集素的生物学作用

红花菜豆（矮生红花变种,Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｃｏｃｃｉｎｅｕｓｖａｒ．ｒｕｂｒｏｎａｎｕｓ）凝集素（ＰＣＬ）识别高甘露糖型寡糖并与之结合,它的生物学作用都与其糖结合专一性有关。ＰＣＬ的血凝作用不显示供血动物专一性和和血型专一性。ＰＣＬ除凝集红细胞外亦凝集动物其它细胞,如小鼠脾细胞、人精细胞及某些肿瘤细胞如黑色素瘤细胞Ｍ２１、胄癌细胞等。此外ＰＣＬ亦凝集某些微生物如野生型和Ｈ．Ｂ．１０１大肠杆菌以及面包酵母。ＰＣＬ具有促细胞分裂作用,使小鼠脾细胞和人外周血淋巴细胞转化的ＰＣＬ的最低浓度为２５０μｇ／Ｌ。ＰＣＬ能抑制某些癌瘤细胞的生长,在测试的几种细胞中,对人黑色素瘤细胞Ｍ２１生长的抑制较为明显。ＰＣＬ亦能抑制野生型大肠杆菌和面包酵母的生长,ＰＣＬ的细胞凝集、促淋巴细胞转化和抑制细胞生长的作用,都是首先通过它的糖结合部位与细胞表面的糖基结合导致的。     

黄精凝集素Ⅱ的纯化及部分性质研究

囊丝黄精（ＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍｃｙｒｔｏｎｅｍａＨｕａ．）的根状茎,经浸取、用硫酸铵分级沉淀、猪甲状腺球蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤,可以分离纯化出黄精凝集素Ⅱ（ＰＣＬⅡ）．纯化的ＰＣＬⅡ在聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白染色带;在快速高效液相色谱中亦为单一蛋白峰,经分子筛层析测得分子量为１５．９ｋＤ,最大紫外吸收值在２７８ｎｍ,ＰＣＬⅡ只凝集兔红细胞,当浓度为０．２５μｇ／ｍｌ时,即可发生凝集反应,此凝集兔红细胞的能力可被Ｄ－甘露糖和猪甲状腺球蛋白所抑制．氨基酸组成分析表明ＰＣＬⅡ分子中富含酸性氨基酸,Ｎ末端为丙氨酸．经测定ＰＣＬⅡ分子中含有３个色氨酸和２．４％的中性糖．原子发射光谱分析表明,该凝集素分子中含有Ｍｇ和Ｃａ两种金属元素．     

红花菜豆凝集素的荧光光谱学研究

利用荧光光谱方法研究了红花菜豆凝集素（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｃｏｃｃｉｎｅｕｓｖａｒ．ｒｕｂｒｏｎａｎｕｓｌｅｃｔｉｎ,简称ＰＣＬ）,结果表明ＰＣＬ分子各亚基中的两个色氨酸（Ｔｒｐ）残基分别位于ＰＣＬ分子表面和分子内。标记了ＤＮＳ的ＰＣＬ荧光偏振研究指出,致使ＰＣＬ在１０ｍｍｏｌ／ＬＳＤＳ条件下失活的主要原因可能是亚基解离。荧光偏振研究还表明,甲状腺球蛋白、甘露聚糖、海参多糖硫酸酯可与ＰＣＬ结合。荧光探针ｂｉｓ－ＡＮＳ与ＰＣＬ的结合可引起明显的荧光增强和发射谱蓝移,表明ＰＣＬ分子中存有疏水区域。结合了的ｂｉｓ－ＡＮＳ还可和ＰＣＬ中的Ｔｒｐ发生能量传递。     

芦荟凝集素的分离、纯化和部分性质的研究

新鲜芦荟叶（Ａｌｏｅ ｖｅｒａ Ｌ．ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｈａｗ．）Ｂｅｒｇｅｒ）于室温用低浓度ＮａＣｌ溶液提取。离心和透析后,经Ｎ－乙酰氨基葡萄糖０Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析,分离纯化出芦荟凝集素（ＡＣＬ）。用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００测表观分子量为３５ＫＤ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ出现两条色带;染色 ;宽带和较浅的罕带。亚基分子量分别为１５ＫＤ和２０ＫＤ。能专一性凝集兔血细胞和人血红细胞     

大瓶螺凝集素的分离纯化及部分性质研究

大瓶螺蛋白腺经磷酸盐缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ凝胶过滤,可获得在不连续ＰＡＧＥ（ｐＨ４．３和ｐＨ８．９）上显示单一蛋白质染色带的大瓶螺凝集素（ＡＧＬ）．该凝集素对人血红细胞无血型专一性,但对Ａ型血红细胞的凝集作用最强．ＡＧＬ的血凝活力可被乳糖或半乳糖所抑制．ＡＧＬ分子中的中性糖含量为０．２４ｍｇ／ｍｇ蛋白质．用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得其亚基分子量为１５０００,且只有一种亚基．ＡＧＬ中Ｃｙｓ和Ｐｈｅ的含量较高,并较耐热．     

半夏蛋白的若干生物学性质

从半夏块茎鲜汁分离的半夏蛋白具有凝集细胞和促使细胞分裂的作用。在已测试的红细胞中凝集羊、狗、猫、兔、豚鼠、大鼠、小鼠和鸽的红细胞,但不凝集人、猴、猪和鸡、鸭、鹅、龟、蟾蜍、鳝的红细胞。半夏蛋白的血凝作用和已知的多种凝集素一样存在供血动物种属专一性。半抗原抑制试验结果,所测各种单糖、双糖、聚糖和糖蛋白中,只有甘露聚糖和含有寡聚甘露糖苷核心的甲状腺球蛋白有抑制作用,表明半夏蛋白只与甘露聚糖结合,且其分子上与糖互补的位置远远大于一个单糖分子的范围。是目前已知的唯一只与甘露糖而不与葡萄糖结合的一种具有凝集素作用的蛋白质。除红细胞外半夏蛋白亦凝集其它细胞,已测细胞中小鼠脾细胞、人肝癌细胞(QGY7703-3和7402)、艾氏腹水癌和腹水型肝癌细胞均被半夏蛋白凝集,但它不凝集大鼠附睾和猪大网膜脂肪细胞,虽然能和这两种细胞结合。提示半夏蛋白的细胞凝集作用不仅具有动物种属专一性并存在细胞类别专一性。半夏蛋白的促细胞分裂作用亦有动物种属专一性,它促使兔外周血淋巴细胞转化,但不促使人外周血淋巴细胞分裂。     

半夏蛋白的若干生物学性质

从半夏块茎鲜汁分离的半夏蛋白具有凝集细胞和促使细胞分裂的作用。在已测试的红细胞中凝集羊、狗、猫、兔、豚鼠、大鼠、小鼠和鸽的红细胞,但不凝集人、猴、猪和鸡、鸭、鹅、龟、蟾蜍、鳝的红细胞。半夏蛋白的血凝作用和已知的多种凝集素一样存在供血动物种属专一性。半抗原抑制试验结果,所测各种单糖、双糖、聚糖和糖蛋白中,只有甘露聚糖和含有寡聚甘露糖苷核心的甲状腺球蛋白有抑制作用,表明半夏蛋白只与甘露聚糖结合,且其分子上与糖互补的位置远远大于一个单糖分子的范围。是目前已知的唯一只与甘露糖而不与葡萄糖结合的一种具有凝集素作用的蛋白质。除红细胞外半夏蛋白亦凝集其它细胞,已测细胞中小鼠脾细胞、人肝癌细胞(QGY 7703-3和7402)、艾氏腹水癌和腹水型肝癌细胞均被半夏蛋白凝集,但它不凝集大鼠附睾和猪大网膜脂肪细胞,虽然能和这两种细胞结合。提示半夏蛋白的细胞凝集作用不仅具有动物种属专一性并存在细胞类别专一性。半夏蛋白的促细胞分裂作用亦有动物种属专一性,它促使兔外周血淋巴细胞转化,但不促使人外周血淋巴细胞分裂。     

大瓶螺凝集素的分离纯化及部分性质研究

大瓶螺蛋白腺经磷酸盐缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ凝胶过滤,可获得在不连续ＰＡＧＥ（ｐＨ４．３和ｐＨ８．９）上显示单一蛋白质染色带的大瓶螺凝集素（ＡＧＬ）。该凝集素对人血红细胞无血型专一性,但对Ａ型血红细胞胞的凝集作用最强。ＡＧＬ的血凝活力可被乳糖或半乳糖所抑制。ＡＧＬ分子中的中性糖含量为０．２４ｍｇ／ｍｇ蛋白质。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得其亚基分     

维甲酸对人肝癌细胞磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D的作用

为了解细胞信号转导与细胞分化间的关系,研究了诱导分化剂全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）和１３顺视黄酸对７７２１人肝癌细胞中磷脂酰胆碱专一性磷脂酶Ｄ（ＰＣ－ＰＬＤ）的影响。发现ＡＴＲＡ和１３ｃｉｓ－ＲＡ除能抑制７７２１细胞生长,并在形态上向正常方向分化外,分别在第２或第４天使膜结合性ＰＣ－ＰＬＤ的比活力升高,用每瓶细胞的总活力计算,ＡＴＲＡ的作用在第２天也高于１３ｃｉｓ－ＲＡ,但１３ｃｉｓ－ＲＡｄ ｔｘ ４     

甘薯品种F3282凝集素的提取及性质研究

甘薯品种Ｆ３２８２的浸取液,经硫酸铵分级,甲壳素层析后,再经分子筛过滤,获得在ＰＡＧＥ上呈现单一蛋白质带的甘薯凝集素（Ｉｐｏｍｏｅａ Ｂａｔａｔａｓ Ｌｅｃｔｉｎ,ＩＢＬ）。ＩＢＬ对鸽、兔、人血等红细胞均有凝集作用,其中对鸽血的凝集活性最高,最低凝集浓度为０．０５μｇ／ｍｌ。ＩＢＬ除凝集红细胞外,还可凝集小鼠脾细胞和肿瘤细胞;其对热相当稳定,９０℃加热１０ｍｉｎ,仍有部分活性;ＩＢＬ对酸处理较碱处理稳定,但可被阿拉伯糖或乳糖等解除凝集活性。ＩＢＬ的中性糖含量为５．４％。     

豌豆钙调蛋白基因的克隆及七种来源钙调蛋白基因的分析

从豌豆（Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．）中提取总ＲＮＡ, 逆转录出ｃＤＮＡ 第一条链后, 以大麦钙调蛋白结构基因两端的寡聚核苷酸为引物, 用ＰＣＲ方法合成豌豆钙调蛋白基因, 克隆到Ｂｌｕｅ－ｓｃｒｉｐｔ 载体上并测定其全序列。结果与已知的苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）、水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａＬ．）、大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ Ｌ．）、电鳗（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｉｄａｅ）、根瘤（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） 钙调蛋白基因相比,同源性较高（９１．３％ —６０．８％ ）,其不同部分则常常是Ｃ和Ｔ相替换。进一步分析发现,上述七种来源的钙调蛋白基因之间,常有某些核苷酸替换方式占优势,它们对于氨基酸密码子的使用也各有偏爱     

红花菜豆(矮生红花变种)凝集素分子的色氨酸残基修饰与其活性的关系

用各种化学试剂修饰红花菜豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｃｏｃｃｉｎｅｕｓｖａｒｒｕｂｒｏｎａｎｕｓ,Ｂｅｒｒｙ）凝集素（简称ＰＣＬ）分子,测定与其活性相关的氨基酸残基．经ＮＢＳ修饰表明ＰＣＬ具有８个Ｔｒｐ残基,其中４个暴露于分子表面,此４个Ｔｒｐ残基被修饰后,ＰＣＬ的凝血活性完全丧失．比较ＰＣＬ修饰前后的ＣＤ光谱表明修饰不改变其二级结构。修饰Ｔｙｒ,Ａｒｇ,Ｈｉｓ残基和游离氨基及羧基不影响ＰＣＬ的血凝活性．巯基也不是血凝活性所必需,但是ＰＣＬ分子中的二硫键被还原,或被ＣＮＢｒ分解为两个片断则使蛋白质丧失血凝活性,提示分子的完整结构对ＰＣＬ的血凝活力是重要的     

木质素过氧化物酶基因5'端上游调控序列的分析

黄孢原毛平革菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）能产生降解木质素的胞外木质素过氧化物酶（ＬＩＰ） 和锰过氧化物酶（ ＭｎＰ）同工酶。为研究ＬＩＰ基因的转录调控机理, 对ＬＩＰ基因（ ＧＬＧ３ 和ＧＬＧ６） 的５′端上游序列进行亚克隆, 获得６ 个亚克隆ＤＮＡ 片段, 然后应用凝胶迁移率变动分析技术筛选能与菌体蛋白质专一性结合的ＤＮＡ片段。结果表明： ＬＩＰ基因ＧＬＧ６ 的５′端上游有一个约６７０ ｂｐ 的ＤＮＡ 片段能与总蛋白质组分专一性结合, 其核苷酸序列分析表明该片段可能含有蛋白质结合的序列特征。研究结果初步显示, 黄孢原毛平革菌可能存在有与ＬＩＰ基因上游某些顺式调控元件相互作用的蛋白质, 调控着ＬＩＰ基因的转录表达。     

几种CAM植物PEP羧化酶同工酶的比较研究

比较研究几种兼性和专一性ＣＡＭ植物材料的ＰＥＰＣ同工酶表明：经自然干旱诱导,兼性ＣＡＭ植物露花（Ｍｅｓｅｍｂｒｙａｎｔｈｅｍｕｍｃｏｒｄｉｆｏｌｉｕｍ）、长药景天（Ｓｕｄｕｍｓｐｅｃｔａｂｉｌｅ）有新的ＰＥＰＣ同工酶的出现,诱导前后各同工酶的天然分子量变化不大;而土三七（Ｓｅｄｕｍａｉｚｏｏｎ）则没有新的ＰＥＰＣ同工酶出现,但诱导后其同工酶的天然分子量有所增大。以上几种兼性ＣＡＭ植物的ＰＥＰＣ同工酶酶谱无明显昼夜变化。专一性ＣＡＭ植物的ＰＥＰＣ酶谱和天然分子量均较一致,亦无昼夜差异。     

干旱诱导性启动子驱动的海藻糖—6—磷酸合酶基因载体的构建及转？…

通过ＰＣＲ程序克隆拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）的干旱诱导性启动子Ｐｒｄ２９Ａ及来自酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ Ｈａｎｓｅｎ）的海藻糖－６－磷酸合酶基因（ＴＰＳ）,并将它们组成可在植物中表达的载体ＲＴ。通过根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｎｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）ＬＢＡ４４０     

固氮相关的两个植物基因转化烟草及其表达

豆科植物凝集和血红蛋白分别在植物识别其相应的根瘤菌和在根瘤内降低氧分压保护固氮酶的共生固氮作用中起重要作用。将豌豆（Ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）凝集素基因（ｐｌ）和Ｐａｒａｑｓｐｏｎｉａ ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ血红蛋白基因（ｐｈｂ）构建到同一植物表达载体上,通过根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）介导法转化烟草（Ｎｉｃｓ     

HPC脂质体的制备及抗HL-60细胞增殖作用的初探

采用十六烷基磷酸胆碱（ＨＰＣ）作为脂质体膜材,配以胆固醇和双十六烷基磷酸盐,反相蒸发法制备出ＨＰＣ脂质体,连续５周每周测定一次它对ＣＦ（ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ,羧基荧光素）的包封率,可知制备的脂质体在前２周内相当稳定,５周后包封率仅减少２４％,可满足实际应用的需要．冰冻蚀刻法测定脂质体的平均直径在５００ｎｍ左右,该直径的脂质体较适于和细胞发生相互作用且稳定性比小单层脂质体好．四氮唑（ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｄｉｐｈｅｈｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏ－ｍｉｄｅ,ＭＴＴ）分析可知,在脂质体浓度达１５μｍｏｌ／Ｌ,对ＨＬ－６０细胞的增殖具有抑制作用．在相同的脂浓度下,ＨＰＣ脂质体抑制ＨＬ－６０细胞生长比游离ＨＰＣ有较强的抑制细胞增殖作用,当ＨＰＣ浓度低于５μｍｏｌ／Ｌ时,细胞生长不受抑制．当ＨＰＣ浓度在１０μｍｏｌ／Ｌ时,ＨＰＣ脂质体表现出对细胞生长的抑制作用,而游离ＨＰＣ在此浓度下的抑制作用较低     

尖吻蝮蛇毒内一种新的抗血小板凝集蛋白agkisacuta …

从皖南尖吻蝮蛇毒中经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化离纯化得到抗血小板凝集蛋白ａｇｋｉｓａｃｕｔａｃｉｎ,纯化的ａｇｋｉｓａｃｕｔａｃｉｎ由分子量为１４ｋＤ和１５ｋＤ的２条肽链通过二硫键连接,能有效抑制ｒｉｓｔｏｃｅｔｉｎ诱导的血小板凝集（ＩＣ５０为１８．５ｍｇ／Ｌ）,能轻微抑制凝血酶诱导的血小板聚集（ＩＣ５０为１．２２ｇ／Ｌ）,但对ＡＤＰ、胶原诱导的血小板聚集无影响。ａｇｋｉｓａｃｕｔａｃｉ     

鸡Zong凝集素的分离纯化与性质研究

鸡Ｚｏｎｇ菌丝体浸取液依次经硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ离子交换层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析３个主要步骤纯化得到一种凝集素（ＴＡＬ）。纯化的ＴＡＬ在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示一条蛋白质着色带。ＴＡＬ的分子量为８９．４ｋＤ,亚基分子量为３８ｋＤ和５１ｋＤ,提示ＴＡＬ分子由两个不同亚基组成。ＴＡＬ具有供血动物种属专一性,使Ｗｉｓｔａｒ大鼠红细胞凝集所需ＴＡＬ最     

鸡平滑肌肌球蛋白轻链激酶在NIH 3T3细胞中的表达

肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）在调节平骨肌细胞收缩过程中具有十分重要的作用。本言语通过将ＭＬＣＫｃＤＮＡ插到质粒ｐＢＫｒｓｖ中构建ｐＢＫｒｓｖ－ＭＬＣＫ,并转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞中,ＤＮＡ－ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析表达转染细胞可表达ＭＬＣＫ。活生分析表明所表达的ＭＬＣＫ具有生物学活性。为进一步研究ＭＬＣＫ在信号传导,调节平骨肌收缩等作用奠定了基础。