树鼩(Tupaia belangeri chinensis)耳蜗毛细胞铺片的观察

我们用树鼩14只,取耳蜗铺片后进行毛细胞计数和长度测量。发现树鼩毛细胞数及缺失率与人、猴、豚鼠不同,树鼩毛细胞失数少且稳定,蜗尖弃用部少,不同种群间的个体差异小,利于用作生物学实验动物,可为研究耳的生理、病理及临床服务。     

树qu免疫细胞体外感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒的实验研究

至今可以感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的动物只有黑猩猩和长臂猿，这严重阻碍了HIV-1的疫苗研究和治疗研究。因此，寻找新的可以感染HIV-1的动物模型成为十分迫切的课题。已知树qu对许多重要的医学病毒易感，为了探讨树qu是否可以感染HIV-1，利用不同辅助受体的5种HIV-1病毒株，体外感染云南野生成年树qu的淋巴细胞和单核/巨噬细胞；同时还用这些病毒感染人外周血淋巴细胞或单核细胞。然后用RT-PCR、PCR和流式细胞术分别进行检测。用RT-PCR方法未检测到感染上清中有病毒粒子的存在，用PCR法未能发现树qu的这些免疫细胞中有前病毒DNA，用流式细胞术也未能在这些感染HIV-1的树qu细胞的表面检测到特异抗原；而感染HIV-1的人免疫细胞均为阳性结果。实验结果表明树qu的这些免疫细胞在体外未能感染上HIV-1，可能的原因是树qu的这些免疫细胞的HIV-1受体(CD4)和辅助受体(CCR5或CXCR4)与人的免疫细胞差别较大。     

树qu（Tuapaia belangeri chinensis）的动脉

本文在对中国树qu的动脉系作系统解剖的基础上,记述了树qu动脉分支的主要特征。同时,还与其他有关种类作了比较研究。结果表明,中国树qu动脉系的主要特征与树qu科中的其他种类如笔尾树qu、普通树qu和地树qu等的动脉系极为相似,而与灵长类中的猿猴类有较大差异。     

豚鼠耳蜗内毛细胞、外毛细胞及外指细胞钙成像

用ｆｌｕｏ－３／ｆｕｒａ－ｒｅｄ荧光比值作细胞内游离钙指标,用激光扫描共聚焦显微镜测定豚鼠耳蜗分离的内、外毛细胞及外指细胞的游离钙,并利用钙成像技术进行细胞形态计量。单个外毛细胞呈试管状。内毛细胞呈烧瓶状,有明显的颈部。外指细胞分为体部及指状突部。毛细胞的胞内游离钙浓度明显高于外指细胞。毛细胞的胞质、胞核及表皮板的游离钙浓度不同。外指细胞的细胞体与指状突的游离钙浓度也不同。本研究认为,有无颈部为区别分离的内、外毛细胞的重要标准,外指细胞可凭借其特异的指状突结构以资识别。内耳毛细胞及外指细胞胞内游离钙分布的不均一性可能与各部位生理功能不同有关。     

树qumtDNA限制性内切酶图谱及其与小家鼠褐家鼠的新缘关系

本实验用ApaⅠ,AvaⅠ,BamHⅠ,BclⅠ,BglⅠ,ClaⅠ,EcoRⅠ,EcoRⅤ,HpaⅠ,PstⅠ,PvuⅡ,ScaⅠ,XbaⅠ等13种限制性内切酶分析树qu(Chiromyscus chiropus) 的mtDNA限制性片段长度多态性,并用双酶解法构建了其中8种酶的限制性内切酶图谱。根据限制性片段差异法和分子钟,计算并讨论树qu和小家鼠(Mus musculus)、褐家鼠(Rattus norvegicus)的mtDNA遗传距离和亲缘关系。结果表明树qu与褐家鼠的关系较接近,两者的分歧时间在距今1500-2000万年前,即处于中新世早中期。     

树qu(Tupaia belangeri Wagner)三个亚种的染色体比较研究

本文对中国西南部树qu（Tupaia belangeri）三个亚种的染色体特征进行了详细比较。结果表明滇西亚种（T.b.chinensis），越北亚种（T.b.tonquinia）和瑶山亚种（T.b.yaoshanensis）的染色体数目均为62；G带和C带基本相似；Ag-NORs的数目相同（4-6个），有相似的分布。应用复制带的技术，确定了雄性树qu的Y染色体。本结果为树qu的分类鉴定提供了细胞遗传学依据。     

树qu（Tupaia belangeri chinensis）的脑底动脉环

用25只树qu,从升主动脉灌注带色的橡胶乳液,在解剖显微镜下进行解剖观察,用目测微尺进行测量。大多数树qu（22只）有完整的脑底动脉环。由左、右大脑前动脉向内侧各发一前交通动脉组成大脑前总动脉。前交通动脉口径为大脑前动脉的75-85%。后交通动脉口径与大脑后动脉相近,连于颈内动脉与大脑后动脉（基底动脉的分支）之间。测量了组成脑底动脉环有关动脉的口径。由于后交通动脉足够粗大,只有中断左、右颈总动脉和左、右椎动脉,才能造成全脑缺血。     

树qu(Tupaia belangeri chinensis)卵巢的显微结构及不同季节的卵巢活动

本文报道不同季节的野外成体树qu卵巢结构的观察和卵泡发育测定的结果。树qu卵巢的间质腺组织稀少，但普遍有“睾丸索”型的髓质索结构。卵泡发育过程类似于大多数哺乳类和灵长类。近成熟卵泡的腔极大，内膜较窄并有插入的膜腺细胞层。孕期成熟黄体较大，中间有小腔，多角形的黄体细胞具圆形的核和富含脂滴的胞质。带退化透明带残体的付黄体结构偶尔可见，有的与孕期黄体同时出现。次级卵泡和中等囊状卵泡的发育未见有明显和季节性差别。但是，具生长活性的大囊状卵泡和近成熟卵泡的发育，在1、4月份更为明显，为卵泡前期和卵泡期的卵巢周期形态较多。孕期黄体和付黄体结构见于7月份。10月份未见孕期卵巢结构，多数卵巢缺乏生长活性的大囊状卵泡的发育。这些结果表明，树qu的卵巢活动同睾丸的精子发生一样，有季节性变化。     

树qu细胞周期蛋白T1 cDNA的克隆和序列分析

树qu细胞不能感染HIV-1，但支持HIV-1进入靶细胞后的转录，可能是因为树qu细胞周期蛋白T1(tsCycT1)能结合HIV-1的Tat蛋白。通过设计引物，用RT-PCR技术，获得全长为2 175 bp tsCycT1基因的cDNA。其核苷酸序列与人的CycT1(hCycT1)基因的cDNA有92.6%的相似性；由此推导出的氨基酸序列有94.1%相似性。其中，hCycT1和tsCycT1氨基端的1-272个氨基酸的相似性高达98.8%，氨基酸第261位点为半胱氨酸。这些结果提示，tsCycT1会和HIV-1的Tat结合，形成高亲和的、锌依赖的复合物，支持HIV-1转录。     

树qu精子发生的季节性变化

对野外成体树qu进行了不同季节精小管发育的测定和生精上皮细胞学特征的观察。精小管平均直径的高峰值出现在4月，为205.7μm；最低值出现在10月，为88.4μm。1、4月份的生精上皮，表现了高度活跃的精子发生，具有明确周期的12个连续阶段和典型的细胞组合。生精上皮退行性变化最早出现于7月，8月进一步发展，10月最明显。附睾精子数量变表现了类似的季节性波动。表明树qu精子发生的活性期始于仲冬，最盛在春季，退行期始于仲夏，秋季最显著，有一个明显的精子发生的季节性周期。季节性生殖受局部环境因子的调节，光照可能是重要因素。     

树qu组织乳酸脱氢酶同工酶的研究

对云南树qu（Tupaia beiangeri）心肌、肺、颌下腺、肾脏、肾上腺、骨骼肌和大脑8种组织乳酸脱氢酶（LDH）同工酶进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明，8种组织均呈现为LDH-M型和LDH-H型两种亚基组合而成的5种不同分子形式同工酶。采用分光光度比色定量法测得5种同工酶组分的相对酶活性。对其H亚基和M亚基百分率以及H/M亚基比率进行了统计分析。并就不同酶谱特征与基因表达状况进行了分析讨论。     

窄带噪声暴露后豚鼠听阈偏移及毛细胞的损伤

为了探讨听觉损伤与毛细胞损伤的关系,本实验比较了噪声暴露后豚鼠皮层听阈及其与基底膜单位长度上毛细胞损伤率的关系。暴露声源中心频率1000Hz,为1/3倍频程的窄带噪声。强度为136dB作用1小时。108dB每天暴露1小时,5天/周连续1个月。结果表明,毛细胞损伤呈灶性,损伤部位与周围界线十分分明。毛细胞损伤在豚鼠间及左右耳间均存在相当程度的个体差异。136dB暴露,毛细胞损伤最重的部位在基底膜1.5转到2.5转之间,符合1000Hz声音在基底膜的最大振动范围。108dB的损伤部位局限在1.5转,其范围及程度明显轻于136dB。136dB造成的听阈偏移高于108dB,尤其在4、8 KHz高频听阈偏移最明显,但耳蜗底转毛细胞多无明显损伤。     

脑细胞生长肽对GM耳毒性的预防作用

目的：观察脑细胞生长肽（cerebral cell growth peptide,CCGP)对庆大霉素（gentamicin,GM)引起的豚鼠耳中毒的预防作用）。方法：用脑干听觉诱发电位（brainstem auditory evoked potential,BAEP)和组织化学方法分别检测动物听阀的变化和耳蜗毛细胞线粒体内琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase,SDH)及溶酶体内的酸性磷酸酶（acid phosphatase,ACP)活性变化,并在三组动物进行耳蜗受损毛细胞计数。结果：CCGP能降低GM引起的BAEP反应阈的上升幅度,保护耳蜗毛细胞SDH和维持溶酶体的完整性,减轻毛细胞的损伤。结论：CCGP能降低GM的中毒性;保护耳蜗毛细胞SDH,维持毛细胞的能量代谢,减少溶酶体损伤,降低溶酶体内水解酶逸出引起的毛细胞自溶性损伤,可能是CCGP预防GM耳毒性的机制之一。     

豚鼠球囊毛细胞的分离及钾离子流的研究

目的：研究前庭毛细胞的细胞活性及膜上钾通道的类型。方法：用酶深化后机械法分离豚鼠球囊毛细胞,并用全细胞膜片钳观察豚鼠球囊Ⅱ型毛细胞侧膜上的钾通道电流。结果：①胶原酶Ⅳ浓度为０．３５ｍｇ／ｍｌ时,分离的毛细胞数量最多,存活时间最长;②当钳制电位为－１００ｍＶ,以１０ｍＶ的步距,从－７０ｍＶ至＋２０ｍＶ阶跃,随着膜 电位的去极化,可记录到一系列快速、瞬时的以Ａ型钾通道为主的外向电流,４－Ａｐ对其有特异     

硫酸卡那霉素对成年大鼠的耳毒性效应

本研究旨在观察硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,KM)对成年大鼠的耳毒性效应。6～7周龄的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,随机分为2组:实验组,每天腹腔注射KM(500mg/kg)2周;对照组,注射等量生理盐水2周。通过检测脑干听觉诱发电位(auditory brainstem response,ABR)观察大鼠听力改变。ABR检测结束后,分离出耳蜗进行基底膜铺片、耳蜗冰冻切片,观察耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGCs)的密度和耳蜗形态学改变。结果显示,注射KM2周后,大鼠在各频率的听觉阈值均有明显升高,其上升幅度超过60dB;随着时间推移,KM组SGCs密度逐渐降低,Corti器结构尚存,但外毛细胞及内毛细胞均有不同程度的缺失,以外毛细胞为甚;内毛细胞缺失与SGCs的密度下降相平行。以上结果表明,6～7周龄大鼠经过KM作用2周后,听力会明显下降,达到重度耳聋甚至全聋。KM的耳毒性作用与SGCs和内外毛细胞的损伤密切相关。     

中缅树Qu的非颤抖性产热及细胞呼吸特征

中缅树qu(Tupaia belangeri chinensis)是东南亚树qu中分布最北的一个种。在热中性区内的非颤抖性产热(nonshivering thermogenesis NST)分别为2.57±0.21(冬)和2.21±0.12(夏)mlO[2]／(g·h);分别为体重预期值的75.9%和61.2%,两者不仅冬季显著高于夏季,而且亦高于典型的热带种类,但低于温带类群。褐色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)的重量冬季为0.622±0.015 g,夏季0.532±0.80 g,冬季也显著高于夏季;同时,BAT总蛋白含量、线粒体蛋白含量以及细胞α-磷酸甘油氧化酶和细胞色素C氧化酶活性,冬季也显著高于夏季,但增加的比例较温带种类低;而肝脏细胞的上述指标及线粒体状态Ⅲ、状态Ⅳ呼吸等,冬夏两季均无显著差异。因此,中缅树qu的NST和细胞产热能力介于热带与温带类群之间,显示出向温带类型过渡的趋势。     

干细胞治疗感音神经性耳聋

治疗内耳疾病的主要困难之一是找到耳蜗毛细胞或者螺旋神经元丢失所导致的听力损失的治疗方法。本文讨论使用干细胞替代感觉细胞丢失为目的的几个治疗策略。作者最近在成年内耳中发现了可以分化为毛细胞的干细胞,发现了胚胎干细胞可在体外转化为毛细胞并表达毛细胞标记物。在动物模型中,成年内耳干细胞、神经干细胞和胚胎干细胞来源的前体细胞可分化成为毛细胞和神经细胞。本文将讨论使用干细胞再生损伤毛细胞的不同方法,介绍几种可行的动物模型,并讨论发展基于干细胞的细胞替代疗法治疗内耳损伤中存在的困难。     

声损伤后鸡听觉上皮的修复和毛细胞再生──扫描电镜与图像分析研究

应用扫描电镜和图像分析方法对宽带噪声损伤后鸡基底乳头病变以及听觉毛细胞再生反应进行定量研究。观察了存活０、２、７、１５和３０天时平均毛细胞表面积,平均毛细胞密度,毛细胞／支持细胞面积比及基底乳头损伤范围等参数。结果显示,基底乳头病变范围为近端１０％至中段６０％。早期反应包括支持细胞扩张和毛细胞静纤毛变性及皮板表面积缩小。损伤后２天可见新生毛细胞,形态与胚胎期幼稚毛细胞相似。７～１５天毛细胞数目与表面积逐渐增加,基底乳头ｍｏｓａｉｃ构型基本恢复。静纤毛排列与极性至３０天时尚未完全恢复。损伤区仍有散在的残存毛细胞及分化早期的幼稚毛细胞。上述结果提示,再生毛细胞的前体存在于受损区局部并与支持细胞的活动有关。前体细胞的增殖至再生毛细胞出现的时间约为４８ｈ,但亦存在一定程度的非同步现象,损伤后７～１５天为细胞修复的主要时期。     

双重荧光染色监测听毛细胞游离钙

豚鼠耳蜗分离外毛细胞经fluo-3和fura-red染色后,用激光扫描共聚焦显微镜监测其胞内游离钙的空间分布和动态变化,以fluo-3/fura-red荧光比值大小指示游离钙浓度的高低。外毛细胞胞内游离钙呈不均匀分布,荧光比值分别为细胞质1.71±0.85,质膜1.61±0.75,表皮板1.47±0.65及胞核1.39±0.66,显示细胞质游离钙浓度最高而胞核游离钙浓度最低。静息状态下连续扫描时荧光比值变化小于0.1,而在受到机械刺激后荧光比值增加幅度达0.3—1.2。实验结果表明,fluo-3和fura-red双发射比例法能更准确反映听毛细胞胞内钙的空间分布和动态变化,第二信使钙可能参与了听毛细胞的机械-电换能过程,研究了换能过程中听毛细胞钙信号的时空模式。     

耳蜗外毛细胞的几种分离方法的比较及形态学观察

目的:比较几种耳蜗外毛细胞的分离方法及其形态学观察.方法:分别采用三种方法分离耳蜗外毛细胞,并进行了光镜下及耳蜗铺片硝酸银染色下的形态学观察.结果:三种分离方法均可分离出活性良好的耳蜗外毛细胞(OHC); 耳蜗铺片硝酸银染色观察到耳蜗外毛细胞的形态和分布状况.结论:成功地分离出单离的活性良好的耳蜗外毛细胞,这对于深入研究它们的正常生理功能及某些病理状态下的功能及形态变化意义重大.