酶法生产三磷酸腺苷(ATP)

以腺苷酸(AMP)为前体,用酵母发酵生产三磷酸腺苷已有很多报道。此法的缺点是:伴有大量酵母发酵,转化不稳定,转化终点不易判断,且“回返”现象严重,因此纯化困难、产率低、消耗大。我们采用啤酒新鲜酵母在葡萄糖、磷酸盐、镁盐培养基中先发酵,除去菌体后用发酵液(酶液)转化腺苷酸成三磷酸腺苷。结果转化稳定、可靠,转化率在80％以上,终点易判断,无明显“回返”现象,纯化简便,可用一次阴柱纯化。三磷酸腺苷总收得率稳定在65％以上,消耗低,质量完全达到药检要求,已被北京市卫生局药检所批准投入正式生产。由于发酵形成的酶液具有良好的保存性,适合于大规模均衡生。一、材料和方法1.材料(1)酵母(S.Casbergensis Hansen)系我厂生产菌株。使用菌体取自生产现场,水洗两次,10℃以下保存。使用时1,400转/分离心     

5’-三磷酸腺苷结晶热力学

5’-三磷酸腺苷（5’-ATP）是重要的生物活性物质,其结晶过程困难,是研究的热点。分别采用静态法和激光法测定了5’-ATP在不同温度的乙醇-水体系中的溶解度和介稳区宽度,并用溶解度模型——肌方程回归了溶解度数据,得到的溶解度关联方程为λ=19．034 3exp（-12．799w）,h：614．053exp（11．3106w）。研究表明．5’-ATP的溶解度随着温度的升高而升高,随着乙醇与水体积比r的升高而下降;其介稳区宽度随着温度的升高略有增大,随着乙醇与水体积比r的升高明显减小。这为5＇-三磷酸腺苷工业结晶装置及生产线的设计、工程放大和工业结晶生产操作提供了理论依据。     

腺苷三磷酸和环腺苷单磷酸对丝状真菌纤维素酶合成的调节

以虫荧光素酶法检验了四株丝状真菌在葡萄糖—无机盐液体培养过程中的胞内ATP含量。结果表明,只有当胞内ATP浓度低于10~(-S)mg/ml时,真菌才开始合成胞外纤维素酶(FPA)。以不同浓度的各种碳源培养时,菌体胞内ATP含量只要超过10~(-1)mg/ml,FPA的合成即发生阻遏。菌体胞内ATP含量与FPA合成呈显著负相关。以高效液相色谱(HPLC)法检测了菌体培养液中的cAMP含量。在非阻遏条件下,外源cAMP可以提高FPA的合成水平。但外源cAMP不能解除已经发生的酶合成阻遏。菌体ATP和cAMP水平是调节真菌纤维素酶合成的重要因子。     

三磷酸腺苷结合盒转运体G1的研究进展

三磷酸腺苷结合盒转运体G1 ( ABCG1 ) 是近年来发现的一种介导胆固醇和磷脂流出的整合膜蛋白半转运体,是三磷酸腺苷结合盒转运体超家族成员.ABCG1与三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)在介导胆固醇和磷脂流出至高密度脂蛋白 ( HDL ) 中起协同作用.ABCG1的表达主要受肝X受体/维甲酸X受体 ( LXR/RXR ) 系统调节.尽管ABCG1在平衡胆固醇和磷脂中有重要作用,但在动物实验中,ABCG1在动脉粥样硬化疾病中的作用具有争议.本文从ABCG1的结构、功能、调节及其在动脉粥样硬化疾病中的作用做一综述.     

香蕉成熟时的呼吸跃变及腺苷三磷酸代谢

香蕉是公认的最佳鲜果之一,但常因迅速成熟衰老而带来经济损失和影响货架寿命。国内外以香蕉为对象研究成熟衰老机理虽然已有不少报导,但引发成熟的原因迄今仍不清楚,涉及与能量代谢有关的腺苷三磷酸代谢尚未见报道。本文重点探索了香蕉在成熟过程中呼吸跃变,腺苷三磷酸代谢与成熟衰老的关系。     

三磷酸腺苷结合盒转运体和细胞胆固醇外排

胆固醇是细胞质膜的重要组成成分。然而,过多的胆固醇累积可导致细胞中毒。异常的胆固醇胞内迁移与蓄积是造成许多心血管疾病如动脉粥样硬化的分子基础。细胞内胆固醇稳态由胆固醇的吸收、合成及外排等一系列过程调控。在哺乳动物细胞中,调节胆固醇合成、吸收和外排是维持体内胆固醇平衡的必要生理过程。本综述着重概述了三磷酸腺苷结合盒转运体(ABC)家族,如ABCA1、ABCG1、ABCG5和ABCG8的细胞功能及生理作用,以及这些转运体在调控胆固醇胞外转运中的分子机制。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1研究的最新进展

就三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的结构、功能及调控研究的最新进展作一综述.ABCA1是一种膜整合蛋白,它具有多种复杂的功能,能介导细胞内磷脂和胆固醇流出到贫脂载脂蛋白A-I,并且在高密度脂蛋白代谢过程中起重要作用.人类ABCA1变异将引起严重的高密度脂蛋白不足,其特征为载脂蛋白A-I和高密度脂蛋白缺陷以及动脉粥样硬化.ABCA1的表达受到多种物质高度调控.细胞核受体主要通过作用于ABCA1启动子DR4元件参与调节ABCA1表达.第二信使环磷酸腺苷通过作用于转录水平和翻译水平上调ABCA1表达.细胞因子对ABCA1转录具有多效性和矛盾效应.除此以外,各种蛋白质和酶类如蛋白激酶A,蛋白激酶CK2,组织蛋白酶D也参与ABCA1表达调控.     

云杉针叶三磷酸腺苷酶活性的超微细胞化学定位

用磷酸铅沉淀技术研究了云杉幼龄针叶及成龄树针叶细胞的三磷酸腺苷酶(ATPase)活性定位。从形态结构上可以看到,种子萌发的幼龄针叶细胞的细胞壁较薄, ATP酶活性反应产物磷酸铅颗粒主要分布于细胞质和细胞质膜上。成龄针叶细胞壁较厚,内质网等细胞器发达,ATP酶主要在细胞壁有较高的活性反应。两者细胞的液泡及细胞核中也有少量定位。幼龄针叶ATP酶活性较成龄针叶的活性较弱, 这种活性变化与不同发育时期叶的生理功能有关。     

放线菌中腺苷三磷酸结合盒转运蛋白的研究进展

放线菌由于能产生多种结构新颖、活性独特的次级代谢产物,在医药工业、农业和环境保护上具有重要作用。全基因组测序的数据显示,放线菌中含有数目众多的腺苷三磷酸结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运蛋白基因,在营养摄入、次级代谢产物转运、外源毒素解毒等一系列过程中发挥着重要的作用。本文概述了ABC转运蛋白的结构和作用机制,并结合本实验室的研究工作,对近年来放线菌中ABC转运蛋白的研究进展进行了比较全面的综述,着重介绍了负责次级代谢产物跨膜转运的ABC外排蛋白,并展望了放线菌ABC转运蛋白的研究热点和应用前景。     

热休克蛋白90三磷酸腺苷酶的调控机制研究

热休克蛋白90（heat shock protein90,Hsp90）是一类在生物进化中高度保守的蛋白,与细胞凋亡密切相关,作为抗癌新靶标已经得到了广泛的关注。相关研究表明,Hsp90可以通过多种方式调控ATPase的活性,如自身构象改变、与辅伴侣分子形成复合物以及转录后修饰等。在Hsp90基本构象改变的基础上,综述了不同因素对ATPase的调控作用,着重阐述近几年的研究进展,为进一步研究Hsp90调控ATPase的机制提供一定的参考。     

胰高血糖素和吗啡对大鼠脊髓环磷酸腺苷含量的拮抗效应

痛行为学与电生理学等研究的结果表明,胰高血糖素(gIucagon)在脑和脊髓内均具有较强的抗阿片作用。但其机制不明。据报道,胰高血糖素不能与脑内阿片受体发生特异性结合。我们研究的     

培养牛心内膜内皮细胞的腺苷三磷酸双磷酸酶的特性研究

包括血管内皮细胞在内的多种细胞和组织存在腺苷三磷酸双磷酸酶,但心内膜内皮细胞是否含有ａｐｙｒａｓｅ尚无报道。本文旨在研究牛心内膜内皮细胞ａｐｙｒａｓｅ的特性。以无机磷释放法检测培养牛心内膜内皮细胞（ＢＥＥＣ）ａｐｙｒａｓｅ的活性,公认的ａｐｙｒａｓｅ抑制剂叠氮钠呈浓度依赖性地抑制ａｐｙｒａｓｅ活性;另一种ａｐｙｒａｓｅ抑制剂氟化钠也明显抑制ａｐｙｒａｓｅ活性地抑制活性而Ｎａ＾＋／Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓ     

固定化细胞法在5'-三磷酸腺苷合成中的应用

从生物催化活性细胞、细胞的固定化形式、固定化细胞反应器3个方面对固定化细胞法合成5’-三磷酸腺苷(ATP)的研究情况作了扼要综述。分析了我国ATP生产的工业化现状,并对今后的研究和开发提出了建议。     

冻融产氨棒杆菌细胞转化法制备三磷酸腺苷

微生物发酵和酶转化法是工业上制备三磷酸腺苷(ATP)的有效途径。以腺嘌呤为关键底物,用冻融通透化处理的产氨棒杆菌细胞转化制备ATP,用高效液相色谱(HPLC)法检测ATP含量,考察各种转化条件对ATP产率的影响,确定最优转化条件:菌体用量40 g/L,底物6 g/L,葡萄糖60 g/L,Mg SO415 mmol/L,KH2PO4120 mmol/L,反应液p H 7.4,反应温度35℃。在最优转化条件下,ATP产率达到85.00%,比优化前提高了58%,细胞用量大幅度降低,优化条件稳定可行。     

动脉粥样硬化小型猪三磷酸腺苷结合盒转运体Al表达的变化

用贵州小香猪建立动脉粥样硬化动物模型,探讨动脉粥样硬化小型猪三磷酸腺苷结合盒转运体Al(ABCAl)表达的变化．采用血管内膜损伤法加高脂高胆固醇饲料喂养贵州小香猪,建立动脉粥样硬化动物模型．血浆总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇的浓度均用氧化酶法测定,采用逆转录聚合酶链反应检测ABCAlmRNA水平,蛋白质印迹和免疫组织化学检测ABCAl蛋白质的表达．喂养12个月后,实验组与正常对照组比较,空腹血浆总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇水平升高;实验组小型猪主动脉、髂动脉、颈总动脉和冠状动脉可见动脉粥样硬化斑块和脂质条纹;实验组小型猪肝组织、主动脉、小肠组织ABCAl表达上调．结果提示,采用血管内膜损伤法加高脂高胆固醇饲料喂养小型猪可建立动脉粥样硬化动物模型．动脉粥样硬化小型猪肝组织、主动脉和小肠组织ABCAl表达上调．