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相似文献
 共查询到17条相似文献,搜索用时 109 毫秒
1.
应用实时生物分子相互作用分析技术(BIA)分析了酵母PHO4和PHO2蛋白的相互作用。将PHO4蛋白通过氨基耦联在感应片上。进样5μmol/L重组的谷胱甘肽转移酶融合的PHO2蛋白(GST-PHO2)及其两种突变体融合蛋白。结果表明PHO2的230位丝氨酸变为天冬氨酸的突变体(GST-2SD)与PHO4有强的表面等离子体激元共振信号,而生型PHO2和230位丝氨酸变为丙氨酸的突变体(GST-2SA  相似文献   

2.
本文报道了PHO2蛋白能被一种未知的蛋白激酶磷酸化。PHO2蛋白的第230-233位氨基酸残基因组成一个可能p34^cdc3/CDC28相关的蛋白激酶识别的一致序列,用点突变的方法将Ser-230变成Ala可导致PHO2蛋白激活PHO5表达能力的完全丧失。  相似文献   

3.
高效表达产纯化了PHO4和PHO2蛋白,凝胶阻抑电泳分析证明了PHO4和PHO2蛋白与PHO81上游-401-289bp片段的结合,定点突变PHO2的230位丝氨酸为天冬氨呈丙氨酸,不影响PHO2蛋白与此片段的结合。足迹法分析证明了PHO4结合在PHO81基因上游的354-333bp,PHO2结合在341-334bp。因此,这些结果表明-401-289bp包含了PHO81的上游激活序列(UAS),  相似文献   

4.
酵母PHO2蛋白及其变异体与PHO5USA体外的相互作用杨军,敖世洲(中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,200031)关键词酵母;PHO2;突变;DNA结合PHO2是酵母阻遏型酸性磷酸酯酶基因转录的正调控因子[1],由559个氨基...  相似文献   

5.
酵母PHO2蛋白在多个不同基因的表达中起作用,是一个多效的转录激活因子。本文比较了该因子要PHO5,HIS4及HO3种基因表达系统中的作用。PHO2的缺失使PHO5在低磷时不能去阻遏;使HIS4和HO的表达分别降低到正常的25%和40%。如果把克隆于抵拷贝穿梭质粒的PHO2基因转入PHO2缺陷的酵母菌,则3种基因的表达都恢复正常。  相似文献   

6.
酵母PHO85结合蛋白PAP1与其它的PHO85结合蛋白PHO80、PCL1及PCL2有较高的同源性。我们上PAP1与HA抗原的融合基因,利用抗-HA抗体进行免疫沉淀。体外翻译的融合HA标记肽的PAP1与体外翻译的PHO85的免疫共沉淀证明了PAP1与PHO85的结合。同时纯化了大肠杆菌表达的PHO4蛋白,并构建了P9HO85::PRP1缺失株。PAP1与HA的融合基因被置于酵母ADH1启动子的控  相似文献   

7.
酵母PHO4基因的克隆与表达   总被引:1,自引:3,他引:1  
用原位杂交方法从酵母菌染色体DNA中分段克隆,拼接,获得完整的PHO4基因,全长约3.4kb,利用体内同源重组的方法,构建了PHO4基因缺失突变株。PHO4基因的缺失导致酸性磷酸酯酶活性明显下降,将完整的PHO4基因转入这种缺陷细胞,能使酶活性回复到野生型水平,PHO4起正调控作用,构建PHO4-LacZ融合基因,以β-半乳糖苷酶的活力表示PHO4的表达水平。融合基因不同名的表达表明,PHO4基因  相似文献   

8.
酵母PHO85结合蛋白PAP1基因的克隆和表达   总被引:3,自引:3,他引:0  
酵母调探因了PHO85是一个依赖于细胞周期蛋白(cyclin)的蛋白酶(CDK),参与对细胞周期和酸性磷酸酯酶基因表达的调控。冯PHO85为靶分子,利用酵母的染色体基因文库中克隆到了一个新的与PHO85相结合的蛋白因子的基因,利用酵母双杂交(two-hybrid)系统从酵母的染色体基因文加中克隆到了一个新的与PHO85相结合的蛋白因子的基因,将此蛋白质命名为PAP1(PHO85associated  相似文献   

9.
利用定点诱变,氨基酸插入或缺失的方法对PHO2进行结构改造,观察对其功能的影响。PHO2蛋白的同源域中有α-螺旋2-β-转我-α螺旋3的结构,是转录因子结构DNA的功能域。定点诱变α-螺旋3上的Ile123为Pro123或者在α-螺旋2中插入PDPD4个氨基酸,破坏α-螺旋的结构,可导致PHO2功能的丧失。氨基酸片段的缺失分析表明,N端Gin丰富区大部缺失,对PHO2功能没有影响;而包含酸性氨基酸  相似文献   

10.
本文发现PHO81蛋白上的碱性区和酸性区附近的微小变化可导致rAPase的表达向组忝型转化,且这两个区域是协同作用的,而酸性区的净负电荷的降低能使rAPase的活力降低。  相似文献   

11.
酵母PHO80基因的克隆,表达及功能分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
赵友阳  敖世洲 《遗传学报》1996,23(2):142-148
利用原位杂交方法从野生型酵母菌染色体DNA中克隆了PHO80基因,全长约4.2kb,包括1.1kb的上游序列和879bp的编码序列。以URA3基因为筛选标记,通过体内同源重组和营养互补筛选获得了PHO80基因缺失突变株。进一步研究了PHO80在细胞内的功能,它是酵母阻遏型酸性磷酸酯酶结构基因以及调控基因PHO81表达的负调控因子,但不影响PHO4和PHO85的表达。还构建了PHO80-LacZ融合基因,探索它在细胞内的表达规律。β-半乳糖苷酶活力测定结果表明,PHO80基因在细胞内呈低水平表达,并受自身产物和PHO85的抑制,推测它与PHO5和PHO81基因的调控模式可能相似。  相似文献   

12.
以Chou-Fasman和GOR方法预测酵母PHO81蛋白的二级结构。用Kyte-Doolittle方法分析它的疏水性。分析了PHO81蛋白与其他蛋白的同源性,发现它包含5个SW16/ANK重复单位,这些重复单位可能是PHO81蛋白与负调控因子PHO80相互作用的位点。  相似文献   

13.
从酵母染色体DNA中获得1个约3.0kb的BamHI的克隆片段和1个约5.0kb的PstI片段,前者包含1745bp的PHO81基因编码序列及1244bp的上游序列,后者包含2236bp的编码序列及约2.8kb的下游序列,经拼接得到完整的PHO81基因。以URA3基因取代部分PHO81的编码序列,通过体内同源重组,获得PHO81基因缺陷的酵母细胞株。构建PHO81-LacZ融合基因,以β-半乳糖苷酶的活力表示PHO81基因的表达水平,研究了它的表达作用。PHO81基因为阻遏型表达,受无机磷浓度的控制,高磷使基因表达阻遏,低磷去阻遏。PHO81对其自身的表达有正调控作用,它与PHO5和PHO11基因的调控模式相似,但PHO81上游调控序列和PHO5及PHO11的同源性很低。  相似文献   

14.
15.
转录因子ABI4参与植物激素ABA的绝大多数生物学功能, 它不仅是ABA和GA在植物体内含量平衡的核心调控因子, 同时还连接ABA与植物细胞内多个信号通路。利用拟南芥(Arabidopsis thaliana) ABI4序列在十字花科其它19种植物(除拟南芥外)中检索得到27个同源基因, 通过序列多态性分析、系统发生重建、染色体共线性分析和转录激活活性比较, 探讨了该基因在十字花科植物中的演化历史。结果表明, ABI4蛋白质序列和结构在十字花科植物中具有较高的保守性, 暗示了其功能的重要性; 单独的ABI4蛋白并不具备显著的转录激活活性, 说明其生物学功能的具体分子机制可能相对复杂, 需要进一步探讨。  相似文献   

16.
17.
FHL2转录激活结构域的定位   总被引:2,自引:0,他引:2  
LIM蛋白家族成员FHL2 (fourandhalfLIMdomainprotein)在转录调节、细胞凋亡及肿瘤的发生发展中都起着重要作用。利用GAL4转录因子中的DNA结合结构域 (DBD)和含有与DBD结合序列的荧光素酶报告基因(GAL4 LUC)构建了哺乳动物细胞转录激活系统 ,并利用该系统定位了FHL2的转录激活结构域。首先将GAL4 DBD序列以正确读框插入到pcDNA3载体的多克隆位点中 ,构建成真核表达载体pDBD ,再将野生型FHL2及其不同片段以正确读框与pDBD中GAL4 DBD序列融合 ,构建成野生型FHL2及其缺失突变体表达载体。将这些表达载体分别瞬时转染 2 93T胚胎肾细胞 ,野生型FHL2及其缺失突变体都得到了表达。利用GAL4 荧光素酶报告基因对野生型FHL2及其不同突变体的转录激活活性检测表明 ,在 2 93T胚胎肾细胞和乳腺癌MCF 7细胞中 ,野生型FHL2具有转录激活活性 ,缺失N端半个LIM结构域使FHL2转录激活活性降低 ,缺失C末端第二个LIM结构域对FHL2的转录激活功能影响不大 ,缺失C末端最后一个LIM结构域则使FHL2的转录激活功能完全丧失 ,而C末端缺失 2个LIM结构域使FHL2转录激活活性又有所恢复。这说明FHL2C末端最后一个LIM结构域对其转录激活功能是必需的 ,而C末端第二个LIM结构域可能对FHL2的转录激活功能有负调控作用 ,这种负调控作用取决于  相似文献   

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