不同牵张刺激对豚鼠胃窦环行肌细胞电压依赖性钙电流的影响

利用全细胞膜片钳技术,在胃窦环行肌细胞上观察了不同方式的牵张刺激对电压依赖性钙电流的影响,探讨牵张刺激对胃窦平滑肌细胞电压依赖性钙电流的作用。用低渗性溶液灌流细胞引起的牵张刺激首先增加电压依赖性钙电流,接着激活一种内向性钳制电流。钙电流的增加发生在灌流后１ｍｉｎ内,而内向性钳制电流在细胞明显膨胀之后缓慢激活。低渗和正压引起的细胞膨胀明显增加电压依赖性钙离子电流,而利用两个电极直接牵细胞则不出现钙电     

Sirt1: 一种新的脂肪细胞和肌细胞调控因子

Sirt1(Sirtuin type 1)是依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)的组蛋白脱乙酰酶, 为Sirtuins家族成员之一, 与细胞增殖、分化、衰老、凋亡和代谢密切相关。目前, 有关Sirt1与衰老和代谢的论文已在Science、Nature、Cell等杂志上连续刊出。其中, Sirt1通过抑制 PPARγ促进白色脂肪细胞中脂肪动员, 并且通过下调肌细胞标志基因表达来抑制成肌细胞分化。提示Sirt1不仅是一个重要的与机体“长寿”有关的因子, 而且可能在动物脂肪沉积和肌肉发育中起着关键的调控作用。     

一种改良的肌细胞骨架染色方法

为了观察肌细胞骨架,对传统考马斯亮蓝染色法进行改良,并与免疫荧光染色法进行了比较。培养的血管平滑肌细胞先用多聚甲醛预固定后再进行考马斯亮蓝染色,可使细胞骨架非常清晰的显色,解决了传统考马斯亮蓝染色易使肌细胞变形、脱片的问题,其效果与免疫荧光染色相近。因此,多聚甲醛预固定．考马斯亮蓝染色法是一种适于肌细胞骨架染色的简便方法。     

一种改进的人体心房肌细胞分离方法

本研究旨在探讨稳定的人体心房肌细胞分离方法,并观察分离的正常窦性心律（normal sinus rhythm,NSR）患者右心房肌细胞基本电生理特性。XXIV型蛋白酶和V型胶原酶两步法进行单个人体心房肌细胞分离,常规全细胞膜片钳技术记录正常的L-型钙通道电流（L-type calcium current,ICa-L）、钠通道电流（sodiumcurrent,INa）、瞬时外向钾通道电流（transient outward potassium current,Itol）和内向整流钾通道电流（inward rectifier potassium current,Ik1）。此方法分离的人体心房肌细胞数量多,细胞膜光滑,折光性强,横纹清楚,耐钙,可用于膜片钳实验的占分离细胞总数的50％-60％。该方法简单、稳定、可靠,酶用量少,分离的心肌细胞质量好,数量多,并能记录到多种离子通道电流,表明其具有正常的电生理功能,适合膜片钳实验。     

一种用于心肌梗塞预后的单克隆抗体

据Centocor公司(美国的一家生物技术公司)报道,该公司研究出一种在心肌梗塞形成后能快速鉴别心坏死和局部缺血的放射性标记的单克隆抗体,这可以改善心脏病患者的预后。该抗体叫作Myoscint,它选择了细胞内心肌成分肌浆球蛋白的重链,该肌浆球蛋白是在心脏病发怍后胞膜破裂时暴露出来的。因此,铟-Ⅲ标记的Myoscint可排它性地凝结在心坏死细胞上,用一种普通γ-射线照相机即可获得这些影像。在心肌梗塞形成初起注射该抗体后     

刺槐对3种抗生素敏感性的测定

匈牙利刺槐对卡那霉素不敏感,对G418敏感,而对潮霉素极为敏感.如以NPTII基因为刺槐基因工程的选择性标记基因,则G418是理想的抗生素抗性选择试剂;如用HPT基因,则潮霉素是合适的抗生素抗性选择试剂.     

发现一种生长抑素抑制神经元钙电流的新途径──cGMP依赖的蛋白激酶通路

发现一种生长抑素抑制神经元钙电流的新途径──ｃＧＭＰ依赖的蛋白激酶通路肽类物质常常通过调控钙通道进而调节神经递质的释放。全细胞记录（ｗｈｏｌｅ－ｃｅｌｌｒｅｃｏｒｄｉｎｇ）显示通道的通透性及电压依赖性是由细胞膜中的ＧＴＰ结合蛋白（ＧＴＰ－ＢＰ）介导的...     

抑制Plk1表达对食管癌细胞化疗敏感性的影响

研究食管癌细胞中Plk1表达被抑制后对化疗药物敏感性的影响,为进一步研究开发基于Plk1食管癌分子靶向治疗奠定基础。化学合成法合成特异性的短链Plk1siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入3代表性的食管癌细胞系;采用RT-PCR和蛋白质印迹法确认siRNA对Plk1表达的抑制效果;MTT分析观察抑制Plk1表达对食管癌细胞化疗药物敏感性的影响。半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,合成的特异性短链Plk1siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制所使用的3代表性食管癌细胞系中Plk1的表达,抑制程度约90%。MTT分析结果表明,siRNA抑制Plk1表达后,能显著提高3食管癌细胞系对化疗药物阿霉素和顺铂的敏感性。由此证实,siRNA介导的Plk1表达抑制能显著提高食管癌细胞对化疗药物阿霉素和顺铂的敏感性。     

单克隆抗体——一种制备血清学试剂的新工艺

<正>多年来抗体在多种疾病的诊断上具有重要作用。放射免疫测定和其它免疫学检测方法被广泛地运用在诊断试验室以检测并定量药物、细菌或病毒制品、肿瘤抗原和循环中的免疫球蛋白。然而免疫学检测方法往往由     

一种高效和经济的单克隆抗体制备新方法

杂交瘤技术使得单克隆抗体大量制备成为可能,采用该技术制备单抗的关键步骤是杂交瘤细胞的培养,常规方法是用细胞培养瓶水平方式培养,这需要经常细心照料细胞使之处于健康状况,此外,如要获得大量的单抗,还需要通过进一步重新接种来扩大细胞数量。本文报道了一种高效而又简便易行的在标准细胞培养瓶中制备单克隆抗体的方法。该方法的关键在于将杂交瘤细胞和其适合的培养液放在水平的细胞培养瓶中培养,直到９０％的细胞达到融合,然后补加培养液至培养瓶的颈部,将瓶子竖直地放置在培养箱中培养３～４周,直到９０％～９５％的细胞死亡…     

一种只有少量抗原时的单克隆抗体的筛选法

<正> 在单克隆抗体制备过程中,已采用一种快速、简单且敏感的测定细胞的筛选法,这些细胞能产生需要的抗体。蛋白质稳固地粘合在塑料表面,这已是最常用的筛选单克隆抗体的方法的基础。将一种抗原吸附到微滴平板穴上,用一种适宜的测定法可测定出随之结合的抗体。但是,如果抗原是与膜结合的蛋白质,可用溶解这类蛋白质的一些非离子性去污剂延缓     

一种新型蝎毒素LmKTx13抑制电压门控钾通道Kv1.3的活性研究

Kv1.3是一种电压门控钾通道,在T淋巴细胞、神经系统和血管平滑肌细胞中高表达。它在细胞膜兴奋性和电信号传导中发挥关键作用,是研究T细胞功能的重要靶点,也为研发针对自身免疫性疾病和炎症性疾病的药物提供了新方向。因此,开发特异性抑制Kv1.3通道的药物已成为治疗这些疾病的新策略。本研究利用反相高效液相色谱技术从海南双针蝎(Lychas mucronatus)毒液中分离纯化到一个新的对Kv1.3有强抑制活性的多肽毒素LmKTx13,其含38个氨基酸残基,其中6个半胱氨酸形成3对二硫键。全细胞膜片钳检测显示,LmKTx13抑制Kv1.3的半数抑制浓度为7.92±3.0 nmol/L。在选择性分析中,发现2μmol/L LmKTx13对Kv1.2和Kv1.7也具有抑制活性,但对其他多种钾通道亚型和电压门控钠通道均未表现出抑制作用。此外,通过LmKTx13对Kv1.3通道动力学的影响研究,以及对Kv1.3和Kv1.5的孔道区序列进行比对分析,构建定点突变体,确定Kv1.3孔道区是LmKTx13抑制通道电流的关键区域,其中T425、G427和H451是LmKTx13作用的关键氨基酸残基。综上,本研究从海南双针蝎毒液中发现一个新的孔道堵塞型Kv1.3多肽抑制剂,具有高亲和力和高选择性,是一个潜在的靶向Kv1.3药物研发先导分子。     

白细胞粘附抑制流(LAI)试验——一种组织培养小瓶方法介绍

引言1972年Halliday和Miller在白细胞移动抑制试验基础上发展了一种新的细胞免疫测定方法,称为白细胞粘附抑制试验(LAI)。嗣后出现了许多方法学上的改良:如1974年Holan等的试管法;1975年Holt等的微量塑料板法;1974年Pierce和Devald的同位素法和1976年Urist等的毛细管法。我们曾采用血球计数法对肝、胃癌病人作过一些测定(葛锡锐等,1978),感到操作方法不够稳定,尤其是洗去非粘附细胞的方法不易掌握,为此研究改用一种组织培养小瓶法,此法操作比较简便,较易掌握。     

组胺H_1受体激动剂PEA抑制胃酸分泌效应的中枢机制

本文分析了中枢注射ＰＥＡ抑制胃酸分泌效应的脑内过程。雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠,摘除双侧肾上腺,用３７℃的生理盐水通过恒流泵进行连续胃液流。第三脑室给药,观察其对五肽促胃液素（１６０μｇ／ｋｇ,ｓ．ｃ．）诱导的胃酸分泌的影响。结果如下：（１）预先脑室注射抗ＣＲＦ血清（２．５μｌ,１：２００００）可阻断１ＯμｇＰＥＡ的中枢抑酸效应;（２）分别脑室给予ＣＲＦ（１．０和２．０μｇ）和β－内啡肽（０．９４和１．２５μｇ）均明显抑制胃酸分泌;（３）预先注射纳洛酮（５．０μｇ,ｉ,ｃ．ｖ,）可取消ＣＲＦ（１．０μｇ）的中枢抑酸效应,而预先注射抗ＣＲＦ血清（２．５μｌ）对β－内啡肽（０．９４μｇ）的中枢抑酸效应无明显影响。结果提示：ＰＥＡ可能首先引起ＣＲＦ释放,后者再刺激内源性阿片肽释放,从而导致迷走介导的胃酸分泌抑制效应。     

p33^ING1——一种新的肿瘤抑制蛋白

ｐ３３ＩＮＧ１——一种新的肿瘤抑制蛋白黄君富房殿春罗元辉（第三军医大学西南医院分子生物学实验室,重庆４０００３８关键词ｐ３３ＩＮＧ１ｐ５３细胞生长抑制细胞凋亡在肿瘤的发生、发展过程中,抑癌基因的失活起着重要作用。研究得最多的是ｐ５３基因。ｐ５３的失活...     

DNA甲基化的3种可能转录抑制机制

尽管ＤＮＡ甲基化能抑制转录这一观点早已为人所知 ,但其精确的机制还不完全清楚[1] 。到目前为止 ,有 3种可能的机制被用来解释甲基化的转录抑制过程。第一种机制是ＤＮＡ甲基化直接干扰特异转录因子与各自启动子的识别位置结合[2 ] 。几种转录因子 ,如ＡＰ 2、Ｃ Ｍｙｃ/Ｍｙｎ、ＣＡＲＥＢ、Ｅ2Ｆ和ＮＦ κＢ ,能识别含ＣｐＧ残基的序列 ,当ＣｐＧ残基上的Ｃ被甲基化后 ,结合作用即被抑制 (图 1 )。相反 ,其他一些转录因子 (如ＳＰ1和ＣＴＦ)对结合位置上的甲基化不敏感 ,还有许多因子在ＤＮＡ上的结合位点上不含ＣｐＧ二核苷酸 ,ＤＮＡ…