伴海马硬化的颞叶癫痫患者海马组织内BDNF表达变化

目的：研究伴海马硬化的难治性颞叶癫痫（TLE）患者海马组织内脑源性神经营养因子（brain derivedneurotrophic factor,BDNF）的表达变化,探讨其在难治性颞叶癫痫发病机制中的作用。方法：采集5例伴海马硬化的难治性TLE患者手术中切除的海马组织,用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测BDNFmRNA表达,并与3例非海马硬化TLE患者对照。结果：与非海马硬化组比较,伴海马硬化的难治性TLE患者海马组织中的BDNFmRNA表达明显增加（P〈0．01）。结论：伴海马硬化的难治性TLE患者海马组织中BDNFmRNA表达表达增高,可能在海马硬化和难治性颞叶癫痫发生、发展中具有重要作用。     

脑源性神经生长因子对齿状回miR-132表达及抑制性电流的影响

目的:探讨脑源性神经生长因子(BDNF)对海马mi R-132的表达及齿状回颗粒细胞抑制性突触后电流(sIPSCs)的影响,明确BDNF对颞叶内侧癫痫(MTLE)发病机制的作用。方法:选取哈医大一院神经外科2008年4月-2010年10月手术治疗的MTLE患者12例海马组织。RT-pcr技术检测BDNF孵育后mir-132表达,脑片膜片钳技术检测BDNF对sIPSCs的影响。结果:BDNF升高了颞叶癫痫海马mi RNA-132的表达(P0.01),减弱了颗粒细胞sIPSCs的频率和幅度(P0.01)。结论:BDNF升高了海马mir-132的表达,减弱颗粒细胞sIPSCs的频率和幅度,可能对MTLE的发展有促进作用。     

MicroRNA-134/CREB/pCREB通路在癫痫中的表达及意义

目的探讨miR-134、CREB、pCREB在癫痫大鼠海马及难治性癫痫患者颞叶脑组织中的表达及意义。方法难治性癫痫患者及非癫痫对照组颞叶组织、氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠及空白对照组海马组织中,应用实时荧光定量PCR技术检测microRNA-134（miR-134）的表达,用Western blot方法检测CREB及p CREB的表达,用免疫组织化学方法检测人脑颞叶皮质及大鼠海马区CREB、p CREB的表达。结果与对照组相比miR-134表达在难治性癫痫患者中明显降低（P〈0.05）,在癫痫模型组中点燃后3、7、14、60 d明显降低（P〈0.05）,1 d与30 d表达降低较对照组差异无显著性（P〉0.05）;癫痫模型组CREB在3、7、14、60 d时间点明显升高（P〈0.05）、pCREB各时间点表达均高于空白对照组（P〈0.05）。结论难治性癫痫患者颞叶皮质及癫痫动物海马中miR-134表达下降,CREB、pCREB表达升高,提示其可能在癫痫发生发展机制中起重要作用。     

颞叶癫痫脑“默认模式”的fMRI研究

功能磁共振成像(functional magnetic resonance imaging,fMRI)被用于检测静息时脑功能神经网络.作者运用静息fMRI检测海马硬化颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)脑"默认模式",采用感兴趣区域功能连接分析检测16例TLE患者和16名正常对照静息时脑的"默认模式",并进行组内和组间分析.研究发现,与正常对照相比,TLE静息时海马、颞极、额叶、颞叶、壳核及楔前叶等脑区与后扣带回的功能连接增强.研究结果表明TLE患者的固有脑功能组织模式有可能出现紊乱.这一研究将有助于从脑功能的角度了解癫痫患者某些临床症状的发病机理,为今后癫痫诊治的发展提供一定的帮助.     

miR-103a对癫痫大鼠海马组织星形胶质细胞活化的影响

为了考察miR-103a对癫痫大鼠海马组织星形胶质细胞活化的影响。本研究通过腹腔注射氯化锂和毛果芸香碱诱导癫痫大鼠模型,对大鼠脑室内注射miR-103a抑制剂来敲低miR-103a的表达;采用免疫组织化学染色检测大鼠海马组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的阳性表达;采用RT-qPCR和Western blotting方法检测大鼠海马组织中miR-103a、脑源性神经营养因子(BDNF)、GFAP、TNF-α和IL-6的m RNA和蛋白表达;苏木精-伊红(HE)染色评价海马组织病变程度;Nissl染色检测神经元存活情况;TUNEL染色检测神经元的凋亡。结果显示,癫痫大鼠海马组织中miR-103a被上调。下调miR-103a抑制癫痫大鼠海马组织中GFAP的mRNA和蛋白表达,且抑制癫痫大鼠海马神经元的病理损伤,但能促进癫痫大鼠海马神经元的存活并抑制其凋亡。此外,下调miR-103a还抑制癫痫大鼠海马组织中IL-6和TNF-α的表达,并促进癫痫大鼠海马组织中BDNF的表达。本研究表明,靶向沉默miR-103a可以抑制癫痫大鼠海马组织中星形胶质细胞的活化并改善神经元的病理损伤。     

基于动脉自旋标记技术的内侧颞叶癫痫病人脑血流灌注成像研究北大核心CSCD

基于动脉自旋标记(arterial spin labeling,ASL)技术,分析内侧颞叶癫痫(mesialtemporal lobe epilepsy,mTLE)患者大脑血流灌注(perfusion)的改变情况。在静息态下,采集了30例内侧颞叶癫痫伴单侧海马硬化发作间期患者(其中左侧16例,右侧14例)及22例健康志愿者的ASL数据,并通过计算获取其相对脑血流量(relative CBF,rCBF)及灌注不对称率(asymmetric index,AI)。癫痫病人与正常人的比较结果表明:左侧mTLE患者在两侧海马旁回、梭状回、额叶、颞叶和患侧海马回及岛叶,右侧mTLE患者在两侧海马回、海马旁回、额叶、颞叶和患侧杏仁核及岛叶,rCBF均有所下降,且患侧的下降程度和范围均大于对侧。说明mTLE患者的海马硬化可能导致了痫灶区功能异常,并通过癫痫的发作影响到全脑。     

癫痫患者额叶及颞叶脑组织A型GABA受体α_1亚型基因表达定量研究

为研究A型GABA受体α1亚型(GABRA1)在癫痫患者病灶额叶及颞叶脑组织中的表达变化与癫痫发病机制的关系,采用TaqMan探针荧光定量PCR检测GABRA1在癫痫患者病灶额叶和颞叶脑组织及对照组额叶和颞叶脑组织中的表达量的差异.结果表明,对照组及癫痫患者额叶GABRA1平均相对表达强度为3.785±1.444和4.399±2.89,两者间无显著差异(P>0.05).对照组颞叶脑组织中GABRA1平均表达量是癫痫患者的4.5倍,对照组及癫痫患者颞叶GABRA1平均相对表达强度为26.802±8.983和5.986±5.07,结果具有统计学意义(P<0.05).提示,难治性癫痫患者GABRA1表达在不同组织中的改变并非单一性改变,GABRA1表达量的改变导致癫痫的发生存在组织特异性;GABRA1在颞叶脑组织中的表达减少与癫痫的发生,尤其是难治性癫痫的发生有密切的关系,可能是难治性癫痫致病的因素之一.该研究结果为进一步研究癫痫的发病机制及防治提供了科学依据.     

癫痫大鼠海马NMDA受体亚基NR2A和BDNFmRNA水平的检测

目的通过锂一匹罗卡品癫痫模型（ithium—pilocarpine seizures rats model of epilepsy,LPS）,研究NMDA受体亚基NR2A、BDNF mRNA的表达,探讨NR2A、BDNF在LPS中的作用。方法建立氯化锂-匹罗卡品大鼠模型,运用原位杂交技术检测致痫后各组不同时间点海马CAI、CA3及DG区NR2A与BDNF mRNA的表达。结果LPS海马NR2A、BDNF mRNA在各观察时间点及部位模型组与正常对照组比较均有明显上调,且有显著统计学差异（P〈0．05）。模型组NR2A mRNA的表达上调7d达峰值（P〈0．05）;而BDNF mRNA表达上调14d达峰值。VPA干预组NR2A mRNA在大鼠海马不同时间及部位（除1d的CA3区）的表达较模型组明显下调（P〈0．05）;BDNF mRNA在大鼠海马不同时间及部位（除28d的DG区）的表达较模型组明显下调（P〈0．05）。结论锂－匹罗卡品腹腔注射可诱导大鼠海马NR2A和BDNF mRNA的表达明显上调;NR2A mRNA表达的增强可能是诱导调控BDNF mRNA表达增强的重要机制之一,说明NMDA受体亚基NR2A可能成为抑制癫痫发作的新靶点。     

癫痫患者额叶及颞叶脑组织A型GABA受体α1亚型基因表达定量研究

为研究A型GABA受体α₁亚型(GABRA1)在癫痫患者病灶额叶及颞叶脑组织中的表达变化与癫痫发病机制的关系, 采用TaqMan探针荧光定量PCR检测GABRA1在癫痫患者病灶额叶和颞叶脑组织及对照组额叶和颞叶脑组织中的表达量的差异. 结果表明, 对照组及癫痫患者额叶GABRA1平均相对表达强度为3.785±1.444和4.399±2.89, 两者间无显著差异(P>0.05). 对照组颞叶脑组织中GABRA1平均表达量是癫痫患者的4.5倍, 对照组及癫痫患者颞叶GABRA1平均相对表达强度为26.802± 8.983和5.986±5.07, 结果具有统计学意义(P<0.05). 提示, 难治性癫痫患者GABRA1表达在不同组织中的改变并非单一性改变, GABRA1表达量的改变导致癫痫的发生存在组织特异性; GABRA1在颞叶脑组织中的表达减少与癫痫的发生, 尤其是难治性癫痫的发生有密切的关系, 可能是难治性癫痫致病的因素之一. 该研究结果为进一步研究癫痫的发病机制及防治提供了科学依据.     

海马中的内源性爆发式放电神经元与颞叶癫痫

颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)是常见的难治性癫痫,主要累及到海马及海马旁结构等边缘网络。爆发式放电神经元(bursting—firing neurons,BFNs)的活动是促使海马结构产生癫痫电活动及相关病理性改变的重要因素之一。BFNs是一类能够由刺激引起、甚至自发产生成串高频爆发式放电(bursting)的神经元。爆发式放电增加了突触传递的效率,促使突触活动产生短时程和长时程可塑性变化,募集邻近神经元产生同步化放电。BFNs的电活动在癫痫相关性电活动中可能具有起搏点的作用。同时,癫痫电活动也促使内源性BFNs的改变,以及调制非爆发式放电神经元向BFNs的转变,导致海马结构内癫痫电活动的进展和扩散,最终促使癫痫相关性病理性改变和脑的高级功能的损害。     

Induction of astrocytic cyclooxygenase-2 in epileptic patients with hippocampal sclerosis

Induction of cyclooxygenase-2 (COX-2) has been described in a wide range of neurological diseases including animal models of epilepsy. The present study was undertaken to assess COX-2 expression in hippocampal biopsies from patients with therapy-refractive temporal lobe epilepsy (TLE). For this purpose, hippocampal CA1 subfield was dissected from epileptic patients with (n=5) or without (n=2) hippocampal sclerosis (HS). COX-2 expression was investigated using immunohistochemistry and semi-quantitative RT-PCR. COX-2 immunoreactivity in TLE patient material in the absence of HS was restricted to a few neurons of the hippocampus. In the presence of HS, on the other hand, a significant induction of astrocytic COX-2 immunoreactivity associated with a concomitant increase in the steady-state level of COX-2 mRNA was observed in the CA1 subfield. These findings suggest that induction of astrocytic COX-2 is implicated in the pathogenesis of HS in TLE and is consistent with the previous findings of increased concentrations of prostaglandins in the cerebrospinal fluid of these patients.     

Combined effect between two functional polymorphisms of SLC6A12 gene is associated with temporal lobe epilepsy

Temporal lobe epilepsy (TLE) is the most common epilepsy subtype with complex genetic structure. A recent study in four populations (Ireland, UK, Australia and Finland) reported an allelic association between betaine/GABA transporter-1 (BGT-1 or SLC6A12) and mesial temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis. To demonstrate the association between SLC6A12 gene polymorphisms and TLE, TaqMan method was used to genotype five single-nucleotide polymorphisms of SLC6A12 gene in 358 TLE patients and 596 nonepileptic control subjects of Chinese Han origin. Real-time PCR was used to detect the effects of variations on gene expression associated with TLE. Though, the single-marker analysis did not demonstrate allelic association with TLE, rs542736–rs557881 interaction showed significant association. The SLC6A12 expression levels in peripheral blood mononuclear cells were significantly higher in TLE patients than in control subjects and were correlated to rs542736 G–rs557881 A haplotypes. Our preliminary results suggested combined effect of two common polymorphisms on SLC6A12 gene may be associated with TLE, but the precise mechanism needs further investigation.     

Glutamate uptake in blood platelets from epileptic patients

Glutamate, the major excitatory amino acid neurotransmitter, is involved in epileptogenesis and initiation and spread of seizures. We studied glutamate uptake into blood platelets from patients with distinct epileptic syndromes: included were 20 patients with temporal lobe epilepsy and hippocampal sclerosis (TLE+HS), 20 with juvenile myoclonus epilepsy (JME) and 20 healthy volunteers matched for age and sex. The affinity of glutamate for the transporters was highest in patients with TLE+HS, but the maximal velocity of transport was highest in controls. There were no differences in the plasma levels of glutamate. Carbamazepine (CBZ), valproate (VPA) and lamotrigine (LTG) did not affect the uptake in vitro. The alterations observed in the uptake of glutamate in TLE+HS patients may reflect an up-regulated uptake of glutamate in the brain.     

人参皂甙对老龄大鼠海马结构BDNF及Trk B蛋白表达的影响

目的探讨老龄大鼠海马结构BDNF及Trk B蛋白表达的老龄性变化,同时对比观察人参皂甙对其改变的影响。方法雌性Wistar大鼠39只,分为青年组、老龄组、给药组(第17个月始饲以人参皂甙至27月龄)。采用免疫组化及Western blot方法对海马结构BDNF反应产物及Trk B蛋白进行定性、定量分析。结果老龄组CA3、CA1区BDNF含量分别较青年组下降13.3%、10.4%(P<0.05);其给药组和老龄组相比变化不大(P>0.05)。齿状回从青年到老年变化不明显(P>0.05),但给药组比老龄组增加16.7%(P<0.01)。老龄组海马结构Trk B蛋白表达较青年组下调了99.7%;给药组较老龄组上调了78.5%(P<0.01)。结论老龄组海马结构BDNF及Trk B蛋白表达较青年组明显降低,而人参皂甙可明显上调齿状回BDNF含量和海马结构Trk B蛋白的表达。