塞来昔布诱导前列腺癌细胞凋亡及其机制研究

目的:研究塞来昔布对前列腺癌DU-145细胞凋亡及侵袭力的影响,并探讨其可能作用机制.方法:应用Hoechst 33342/PI染色检测细胞凋亡形态;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测不同浓度塞来昔布诱导细胞凋亡能力;RT-PCR法检测塞来昔布作用后Bcl-2、E-cadherin、ICE及COX-2 mRNA表达水平的变化.结果:Hoechst 33342/PI双染色可观察到药物作用后.细胞呈现明显凋亡现象.流式细胞术证实塞来昔布能有效诱导细胞凋亡,0、25、50、100、200μmol/L塞来昔布诱导细胞凋亡率分别为(1.10±0.15)%,(3.87±0.79)%,(10.59±1.58)%,(22.50±3.30)%,(33.85±2.71)%,细胞凋亡率呈现浓度依赖性递增.RT-PCR显示Bcl-2mRNA表达水平下调,E-cadherin mRNA表达水平上调,ICE mRNA表达水平无明显变化,COX-2 mRNA未检测到.结论:塞采昔布能有效诱导前列腺癌DU-145细胞凋亡并使其侵袭力降低.     

塞来昔布联合survivin反义寡核苷酸对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布和survivin反义寡核苷酸(ASODN)联合作用对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用。方法:构建胰腺癌荷瘤裸鼠模型,将成瘤裸鼠随机分为4组:对照组、塞来昔布组(给予1000ppm的塞来昔布饮水)、survivin ASODN组(瘤内注射40μg/200μL的survivin ASODN)、联合组(给予1000ppm的塞来昔布饮水的同时瘤内注射40μg/200μL的survivin ASODN);观测裸鼠肿瘤生长情况并测量不同时间的体积变化,于接种肿瘤的35天处死裸鼠,测瘤体质量,应用cas- pase-3试剂盒检测caspase-3活性,免疫组织化学法检测肿瘤增殖指数(PI)和微血管密度(MVD)。结果:治疗组平均体积均明显低于对照组(491.97±4.62mm~3,427.34±14.62mm~3,300.39±6.59mm~3 vs 703.56±12.51 mm~3,P<0.01),其中联合治疗组体积明显低于塞来昔布组或survivin ASODN组(P<0.01);平均抑瘤率分别为32.26%、50.86%、62.07%。治疗组caspase-3相对活性明显高于对照组(0.026±0.003、0.040±0.018、0.059±0.005 vs 0.006±0.001,P<0.01),其中联合治疗组caspase-3相对活性明显高于塞来昔布组(P<0.01)或survivin ASODN组(P<0.05);治疗组平均PI和MVD均明显低于对照组(P<0.01,或P<0.05),其中联合治疗组平均PI和MVD明显低于塞来昔布组或survivin ASODN组(P<0.01,或P<0.05)。结论:COX-2抑制剂塞来昔布和survivin ASODN联合应用可显著抑制荷胰腺癌裸鼠的肿瘤生长,其作用机制可能是通过共同提高caspase-3活性来诱导细胞凋亡,通过抑制肿瘤细胞的增殖和新生血管的形成来发挥抗肿瘤效应,为胰腺癌的治疗提供了新的思路。     

硫酸化茯苓多糖对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响

为了探讨硫酸化茯苓多糖(SP)对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,采用MTT法检测不同浓度、作用时间SP对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,倒置显微镜观察MCF-7细胞的形态学变化,RT-PCR检测SP处理MCF-7细胞凋亡相关基因(Bcl-2,Bax)的表达;Western blotting技术检测SP对乳腺癌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达变化。结果表明,SP对MCF-7细胞增殖有抑制作用,且在一定范围内呈剂量效应;细胞贴壁能力减弱,细胞间隙增大,胞膜褶皱;Bcl-2基因表达水平和蛋白表达水平明显降低(p0.05),Bax基因表达水平和蛋白表达水平明显升高(p0.05)。基于以上研究,SP通过促凋亡基因Bax的表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达来下调Bcl-2/Bax比值,激活凋亡途径,诱导MCF-7细胞的凋亡。     

龙葵碱通过抑制Med19表达增加多柔比星耐药乳腺癌细胞对多柔比星的敏感性

目的 探讨龙葵碱（solanine）对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响及其机制。方法 选用乳腺癌细胞MCF-7细胞和对阿霉素（adriamycin,ADM）或多柔比星耐药的乳腺癌细胞MCF-7/ADR细胞,转染pcDAN-Med19过表达中介体19(mediator 19,Med19),应用CCK-8法检测细胞增殖水平,qRT-PCR和Western blot检测细胞中Med19和凋亡相关Bcl-2、Bax及Cleaved-Caspase-3表达水平,TUNEL染色和流式细胞术分析细胞凋亡水平。结果 龙葵碱显著降低MCF-7/ADM细胞活力。Med19高表达于MCF-7/ADM细胞,龙葵碱显著抑制MCF-7/ADM细胞中Med19表达,龙葵碱对多柔比星处理的MCF-7/ADM细胞活力的降低、凋亡的促进、凋亡相关蛋白Bax和Cleaved-Caspase-3水平的上调及Bcl-2水平的下调可被过表达Med19明显抑制。结论 龙葵碱通过抑制Med19表达而降低乳腺癌细胞MCF-7/ADM对多柔比星的耐药性。     

PPAR??激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞生长 抑制及诱导凋亡作用研究

目的:观察氧化酶体激活物增殖受体(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROZ)在体外激活PPARγ后对MCF-7细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测ROZ对MCF-7细胞的生长抑制作用;集落形成实验观察ROZ对MCF-7细胞集落形成的影响;不同浓度ROZ作用72h,Hoechst33342染色观察MCF-7细胞的形态变化,流式细胞光度分析术(FCM)检测凋亡细胞百分率以及ROZ对细胞周期的影响;Western blot方法检测ROZ对MCF-7细胞Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:ROZ可呈剂量依赖性抑制MCF-7细胞的生长及集落形成。ROZ浓度为6×10-5M和3×10-4M时则G1期细胞数明显增加,S期相应减少。Hoechst33342染色经ROZ处理的肿瘤细胞染色质呈颗粒状,且有凋亡小体出现。FCM检测结果显示,ROZ作用72h凋亡细胞数达22.05%。Western blot提示ROZ可抑制Bcl-2表达,促进Caspase3表达。结论:ROZ在体外可抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡,这可能与其抑制Bcl-2表达、促进caspase3表达有关。提示ROZ有望成为乳腺癌治疗药或肿瘤治疗的辅助用药,PPARγ有潜力成为肿瘤治疗的新靶点。     

塞来昔布诱导HCT-116结肠癌细胞G2/M阻滞

目的:研究选择性COX-2抑制剂塞来昔布诱导结肠癌细胞株HCT-116细胞周期阻滞的作用及其可能的机制。方法:应用流式细胞仪检测塞来昔布对HCT-116细胞周期的影响,定量PCR检测细胞周期素cyclinB1及COX-2 mRNA表达水平,Western-Blot检测细胞周期素cyclinB1的蛋白水平。结果:塞来昔布诱导HCT-116细胞G2/M阻滞的作用呈剂量依赖性,塞来昔布在mRNA及蛋白水平下调HCT-116细胞的cyclinB1。结论:塞来昔布能在体外抑制HCT-116细胞的增殖,诱导G2/M的阻滞,其作用与下调细胞周期素cyclinB1有关。     

表柔比星化疗对乳腺癌转移潜能的影响

目的:比较乳腺癌细胞经过表柔比星处理前后的生物学行为,探讨表柔比星化疗对乳腺癌转移潜能的影响及机制。方法:人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别给予正常培养和表柔比星6小时处理,通过划痕实验和transwell实验比较两组细胞迁移和侵袭能力的差别。MCF-7细胞经过表柔比星处理不同时间后,通过real-time PCR分析细胞中转移相关蛋白1(Metastasis Associated Protein 1,MTA1)表达水平的变化。建立小鼠4T1乳腺癌模型,观察表柔比星化疗对小鼠肺表面乳腺癌转移灶的数量的影响。结果:划痕实验中,处理组MCF-7和MDA-MB-231细胞24小时内平均划痕愈合距离均显著长于对照组细胞(P0.05);transwell实验中,处理组MDA-MB-231细胞24小时内穿膜细胞数显著多于对照组细胞(P0.01),MCF-7细胞本身侵袭性低难以穿膜;real-time PCR结果显示,表柔比星处理使MCF-7细胞中MTA1转录水平出现显著上调(P0.05);动物实验结果显示,处理组小鼠肺表面转移灶数量显著多于对照组(P0.01)。结论:表柔比星处理可以在体内和体外增强乳腺癌细胞的转移潜能,这一改变可能与其诱导MTA1的表达有关。     

siRNA下调FLAP的表达诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡

目的研究5-脂氧合酶激活蛋白（5’-lipoxygenase activating protein,FLAP或ALOXSAP）的表达抑制对胰腺癌细胞PANC-1凋亡的诱导作用。方法通过siRNA抑制胰腺癌细胞FLAP的表达,用流式细胞仪检测Annexin—V标记的凋亡细胞,用Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达和裂解水平。结果FLAPsiRNA有效抑制了胰腺癌细胞PANC-1中FLAP的表达。转染了FLAPsiRNA的胰腺癌细胞出现凋亡。在细胞凋亡过程中,Bcl-2水平下降,而细胞色素C、caspase-3水平逐渐增高。结论FLAP的表达抑制可以诱导乳腺癌细胞通过Bcl-2和caspase-3途径发生凋亡。     

半乳凝集素-3的表达对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响

目的：研究半乳凝集素－33（Gal3）的表达对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响。方法：构建Gal3-siRNA的特异表达载体,转染乳腺癌细胞MCF-7,通过建立由siRNA介导的Gal3-knockdown稳定细胞株来研究半乳凝集素-3表达下调对肿瘤细胞凋亡的影响。结果：利用设计的Gal3-siRNA能够使细胞中半乳凝集素-3的表达降低90％左右;当用凋亡诱导剂处理时,Gal3-knockdown稳定细胞株的凋亡率比野生型细胞株高出近20％。结论：在MCF-7乳腺癌细胞中,半乳凝集素-3具有抑制肿瘤细胞凋亡的功能。     

塞来昔布联合氟尿嘧啶对胰腺癌细胞株SW1990生长抑制作用及其机制研究

目的:研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合氟尿嘧啶对胰腺癌细胞株SW1990生长的抑制作用,并对其机制进行初步探讨.方法:实验分为对照组、氟尿嘧啶组、塞来昔布组及两药联合组,将不同浓度的药物分剐作用于胰腺癌细胞株SW1990,MTT法检测各组细胞的生长抑制率,并探索产生最佳细胞生长抑制作用的药物浓度.流式细胞仪检测不同药物作用对肿瘤细胞周期的影响.RT-PCR检测各组细胞Survivin的表达情况.结果:MTT法显示氟尿嘧啶、塞来昔布均能抑制SW1990的生长,且细胞的存活率都随药物浓度的增加而降低.两药联合组对细胞生长的抑制作用更明显.流式细胞仪检测结果显示塞来昔布组、氟尿嘧啶组及两药联合组细胞较对照组G0/G1期细胞比例明显增加,S期和G2/M期细胞比例明显减少.RT-PCR结果显示氟尿嘧啶组、塞来昔布组、联合组都可下调Survivin的表达,以联合组最为明显.结论:塞来昔布联合氟尿嘧啶对胰腺癌SW1990细胞的生长具有抑制作用,其机制可能与下调Survivin的表达从而诱导细胞的凋亡和细胞周期的停滞有关.