制造化学菌苗的方法学

<正>化学菌苗是用病原微生物的保护性抗原制备的免疫制品。保护性抗原是诱导对抗病原菌某种致病作用的特异性抗体的抗原物质。保护性抗原通常具有聚合物性质,在机能上是病原菌的致病性因子,宿主在进化中产生对此类因子的特异性免疫应答力。应强调指出并非所有的致病性因子都能视为保护性抗原,虽然后者必定是一种致病性因子。用保护性抗原制造菌苗是在特异性预防传染病方面最合理和有前途的趋向之一。与颗粒化学菌苗不同,化学菌苗不含杂质,并且容易检定和控制。     

CK-MB特异性单抗的制备方法及其应用

本研究拟建立肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)特异性单克隆抗体(m Ab)的研制方法,对抗CK-MB单抗进行评价分类及性质鉴定,并初步建立CK-MB定量检测试剂。以CK-MB抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规单抗制备技术,使用间接和捕获ELISA差异筛选法筛选单抗。利用肌酸激酶同工酶(CK-MM/BB/MB)抗原对所制备单抗的抗原识别表位进行鉴定,另通过免疫印迹法及合成CK-MM、CK-BB差异性的线性表位肽鉴定对所制备的单抗进行评价分类。使用双抗体夹心ELISA方法筛选检测CK-MB抗原的配对m Ab,并初步建立CK-MB定量检测试剂。使用74例临床标本初步评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性。最终,我们成功筛选到22株稳定分泌抗CK-MB抗体的杂交瘤细胞株,这些单抗可以分为线性、偏构象的CK-MB和CK-MM或者CK-BB交叉的单抗以及与CK-MB特异反应的偏构象型单抗,并使用偏构象型单抗研制出CK-MB定量检测试剂,该试剂与罗氏试剂相关系数r达到0.930 9。综上所述,本研究建立了研制CK-MB偏构象型特异性单抗的筛选方法,通过对所筛选的单抗进行分析鉴定并建立了CK-MB定量检测试剂,与罗氏试剂检测结果符合率高。     

构象性B细胞表位预测的免疫信息学方法及其网络资源

抗原表位预测是免疫信息学研究的重要方向之一,可以给实验提供重要的线索。B细胞表位或抗原决定簇是抗原中可被B细胞受体或抗体特异性识别并结合的部位。实际上,近90%的B细胞表位是构象性的。即使抗原蛋白质三级结构已知,B细胞表位预测仍然是一大挑战。该文结合实例阐述当今主要的构象性B细胞表位预测方法和算法:机器学习预测、非机器学习的计算预测、基于噬菌体展示数据的识别方法,以及一些也可用于构象性B细胞表位预测的通用蛋白质-蛋白质界面预测方法;介绍最新相关预测软件和Web服务资源,说明未来的研究趋势。     

百日咳杆菌丝状血凝素和淋巴细胞增多促进因子在小鼠中的保护活性

<正>百日咳是一种人类呼吸道疾病。使用全菌百日咳菌苗已有效地控制该病。然而,仍然需要一种含必要保护性抗原和反应原较少的菌苗。向改良菌苗方向进军的重要步骤,包括分离和鉴定百日咳杆菌的毒性成份和保护性抗原。     

无细胞百日咳菌苗的纯制和特性

<正> 引言 百日咳菌苗传统的形态,由杀死的百日咳杆菌组成,亦即它是全细胞菌苗。这种菌苗包含有对促进保护性应答不需要的成份,而且这些成份可能对副反应起作用。在日本,自1973年一直从事由百日咳杆菌分离其有效因子,并尽可能多的除去不需要的成份。一些保护性抗原已在百日咳杆菌培养物的上清液中被证实,并曾尝试发展一种由一或两种这些抗原组成的菌苗。含有两种主要保护性抗原即由百日咳杆菌培养物上清液中分离出的百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)的精制百日咳菌苗(无细胞百日咳菌苗),自1981年已应用于日本.     

人工抗原合成研究进展

近年来,以小分子化合物为半抗原的免疫分析技术在食品药品、环境保护等领域已有诸多应用,并取得了较为理想的检测效果。小分子化合物只能与载体偶联形成人工抗原后,方能借助T细胞表位间接诱导B细胞进行增殖与分化,进而产生特异性抗体。高效的人工抗原的合成是保证免疫分析的前提和关键,就近年来国内外有关人工抗原合成过程中所涉及的小分子半抗原的设计与合成方法、载体的选择、半抗原与载体的偶联方法、人工抗原的纯化及鉴定方法等进行综述。     

猕猴B病毒gC蛋白特异性抗原表位的合成和表达

目的获得B病毒gC蛋白的特异性表位抗原。方法利用长片段基因合成的方法,合成B病毒C蛋白的特性抗原表位基因,将该基因连接到pMAL-5x载体,转化到BL21受体菌进行表达,并纯化表达产物。结果成功的获得了B病毒gC蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白以可溶的形式表达。结论利用原核表达系统,可以产生B病毒gC蛋白的可溶性抗原,可以作为B病毒的检测抗原。     

超滤-高效液相色谱法检测pHLA复合物中的抗原肽北大核心CSCD

重组HLA-Ⅰ类分子/抗原肽复合物(pHLA复合物)在研究人类T细胞特异性免疫应答中有重要用途。pHLA复合物的制备以基因工程及蛋白体外稀释折叠复性技术为基础,在体外复性体系中重组HLA-Ⅰ类分子正确折叠,并结合抗原肽形成复合物。本研究建立了一种超滤-高效液相色谱法(超滤-HPLC法)定量检测重组pHLA复合物中的抗原肽,尤其针对少量制备产物中抗原肽的检测。通过将重组HLA-Ⅰ类分子和抗原肽加入到复性缓冲液中,使重组HLA-Ⅰ类分子的重链(heavy chain,HC)与轻链(β2m)复性折叠,与含锚定残基的VYF抗原肽结合形成pHLA复合物,经超滤去除未结合的游离抗原肽VYF而保留复合物,最后将pHLA复合物经酸处理破坏其相互作用从而释放抗原肽,再超滤收集VYF抗原肽并进行HPLC检测,所测得的VYF抗原肽即为重组HLA-Ⅰ类分子与抗原肽相互作用所结合的抗原肽。结果显示,制备的重组pHLA复合物可被HLA-Ⅰ分子构象特异性抗体W6/32识别,这说明重组HLA-Ⅰ类分子折叠构象正确,可鉴定为pHLA复合物;而超滤-HPLC法也可检测到pHLA复合物中含有抗原肽VYF,因此将超滤-HPLC法用于检测pHLA复合物的方法可行。与Western blotting法相比,超滤-HPLC法定量检测抗原肽浓度范围为0–9μg/mL,可根据复合物中结合的抗原肽量来优化不同结合条件,以提高HLA-Ⅰ类分子折叠效率并促进HLA-Ⅰ类分子结合抗原肽,还可根据pHLA复合物结合的抗原肽含量计算复性体系中形成pHLA复合物的制备率。因此文中所建立的超滤-HPLC法可用于pHLA复合物制备过程的质量控制,在T细胞特异性免疫研究、人工抗原呈递细胞以及特异性四聚体探针应用开发方面都具有优势。     

菌苗进展

<正> 关于细菌感染,有种种的免疫机制和免疫反应。近年来,伴随现代生物化学和分子生物学的进展,对于细菌感染的研究更加深入,并且制造出新的和更有效的菌苗。 实际工作的医生面临着一种新菌苗的数量比任何时候都增长的形势,迫使他们对那些新菌苗做严格的选择,选出其中有限数量的符合流行病学需要的有效和安全的菌苗。 菌苗就它们的抗原性、免疫反应、接种反应和安全性来说,可分为性质不同的四大类:1.类毒素。2.菌体抗原(Whole—cellAntigens)。3.减毒活菌苗。4.化学组分菌苗(fractionated Vaccines)。     

无细胞百日咳菌苗的效力试验

<正>近十年来,已研究开发了若干种无细胞百日咳菌苗,并有望取代当今使用中的全细胞菌苗。百日咳菌苗有多种抗原,如百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、菌毛混合物(Fim2+3)及69KDa外膜蛋白是无细胞菌苗之所需组分。最近在美国开展了旨在比较全细胞和13种无细胞菌苗免疫原性和反应原生力2期临床试验。这些无细胞菌苗或只含有PT,或由PT与上述的1种或1种以上的抗原组合而成,并已通过化学处理或对其菌体作遗传学修饰消除了毒注。进入2期临床试验的无细胞菌苗,不     

用合成肽标定百日咳杆菌毒素S_1亚单位的抗原位置

<正>最近已报道了百日咳毒素基因的整个序列及氨基末端序列,一级结构的明确使合或携带自然毒素抗原决定簇的肽链成为可能。短肽的抗体与天然蛋白常常结合得很好,因为这种蛋白提供的短肽序列是暴露在分子表面的。百日咳毒素由5个不同的亚单位组成,S_1—S_5。我们和其它学者已经发现,具有酶活性的亚单位S_1是免疫显性的。本研究用接种过全细胞百日咳菌苗或只含百日咳毒素菌苗的人和动物血清,对包含S_1亚单位抗原决定簇的5种多肽序列的鉴定及合成作了阐述。     

百日咳毒素的生物学活性

<正> 1.前言1947年Greenberg和Fleming与1948年Parfentjer和Goodline的观察研究,标志着百日咳菌苗生物学活性研究的开始。Green-berg和Fleming发现,百日咳菌苗能增强抗原产生抗体;而Parfentjer和Goodline报导百日咳菌苗处理过的小鼠对组织胺的敏感性增强。不久,又发现菌苗可增进小鼠对过敏症、五羟色胺、组织胺和五羟色胺的结合物、内毒素以及许多其它休克增强因子的敏     

胸膜肺炎放线杆菌毒素apxIVA基因的克隆与表达及间接ELISA方法的建立

参照APP血清 1型apxIVA基因序列合成了一对特异性引物 ,从本实验室分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌 (APP)血清 2型中扩增了apxIVA基因 5′端 2445bp的片段。将该片段克隆到原核表达载体pET-28b的T7启动子下游 ,与 6×HisTag融合 ,再转化大肠杆菌BL21(DE3) ,在IPTG的诱导下表达大小约 90kD的蛋白。表达产物以包涵体的形式存在 ,且能与APP标准阳性血清发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立了间接ELISA方法 (ApxIVA-ELISA) ,特异性良好。用ApxIVA-ELISA检测猪胸膜肺炎三价 (1、2和 7型 )灭活菌苗和基因工程类毒素菌苗免疫猪血清抗体均为阴性 ,而 1、2、7型APP活菌感染动物的血清抗体均为阳性。实验证明 ,ApxIVA-ELISA不仅可以用于检测所有血清型APP的抗体 ,而且还可以用于APP自然感染猪和灭活菌苗免疫猪的鉴别诊断。     

HIV-1辅助蛋白Vpr多肽抗体的制备与鉴定

预测Vpr蛋白的B细胞抗原表位,并利用合成的B细胞表位肽制备Vpr特异性抗体。应用生物信息学技术获得Vpr蛋白共享氨基酸序列并预测其潜在B细胞抗原表位,与载体蛋白血蓝蛋白(KLH)偶联合成多肽并免疫家兔,鉴定及纯化获得的多肽特异性抗体。软件预测显示,Vpr蛋白N端的第3～19位(N)和C端的第82～95位(C)氨基酸序列为潜在B细胞抗原表位;ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价都达到1:105以上;Western-Blotting结果显示,无论对HIV-1B亚型还是CRF07_BC重组型的Vpr蛋白,其多肽N抗体和C抗体均能特异性识别;免疫沉淀结果显示,Vpr多肽N和C抗体也能特异性结合未变性的野生型Vpr或GFP-Vpr融合蛋白。利用生物信息学技术能成功预测Vpr蛋白B细胞抗原表位,免疫所获得的抗体具有较好的特异性和应用性。     

脑膜炎球菌菌苗的发展现状及展望

根据荚膜多糖的结构及抗原性不同,将奈瑟氏脑膜炎双球菌分为１２个血清群。绝大多数的脑脊髓膜炎是由Ａ、Ｂ和Ｃ群流脑球菌所引起。Ａ、Ｃ群流脑多糖菌苗自１９６９年研制成功后,在世界范围内迅速得到广泛使用,对防止由Ａ、Ｃ群流脑球菌引起的暴发性脑脊髓膜炎起到了重要作用。由于Ｂ群流脑多糖抗原对人体缺乏免疫原性,外膜蛋白（ＯＭＰ）及脂多糖（ＬＰＳ）被用作研制Ｂ群菌苗的目的抗原。目前使用的多糖菌苗或ＯＭＰ菌苗都存在一定的局限性。将Ａ、Ｃ群多糖抗原结合到蛋白载体上对成人免疫取得了很好的结果,可望弥补多糖抗原对低年龄组儿童免疫效果不佳的缺点。新的多渠道的尝试,如多价ＯＭＰ菌苗、抗遗传基因型菌苗等或许能在不远的将来制备出全面的、有效的流脑菌苗。     

抗HSV-I ICP22蛋白抗原多肽抗体对ICP22定位的检测分析

ICP22作为单纯疱疹病毒进入细胞后最早表达的蛋白之一,对于病毒的复制具有重要的调节功能,由于抗原表位的同源性,使用完整的ICP22蛋白作为抗原难以获得特异性的抗体。通过氨基酸序列预测,ICP22蛋白1～36位氨基酸具有较强的抗原性,将ICP22蛋白1-36位氨基酸偶联于GTS蛋白作为抗原免疫小鼠,所制备抗体能够特异性识别具有正常生理构象的ICP22蛋白。抗体检测结果显示,ICP22不但定位于细胞核内,而且还能够形成特殊的点状结构。     

经口免疫毒素源性大肠杆菌的家兔抗肠内攻击做为改进的RITARD模型

<正> 有效的抗毒素源性大肠杆菌口服菌苗的 进展,有赖于识别适应的保护性抗原,这种     

A C群脑脊髓膜炎球菌多糖菌苗生产工艺与内毒素含量研究

A群及C群流脑多糖抗原用 10 0 0 0 0×g离心或不经超速离心处理 ,经用鲎试验法测定内毒素含量 ,2种工艺生产的A群及C群流脑多糖抗原的内毒素含量均很低。用未经超速离心处理的A群及C群流脑多糖抗原制成的A C群流脑多糖菌苗 ,经鲎试验法测定 ,内毒素含量也很低 ;经家兔升温法进行热原质试验 ,家兔体温未明显升高。证明A C群流脑多糖菌苗生产工艺不经 10 0 0 0 0×g离心去除内毒素步骤是可行的。所制备的流脑多糖抗原内毒素含量符合要求。     

重组牛痘病毒介导的微小基因表达产物OVA257—264在真核细胞中的抗原呈递效率

应用含重组OVA微小基因及全长基因的牛痘病毒感染能够稳定表达Kb 分子的多种真核细胞 ,通过构象特异的单克隆抗体 2 5 .D 1.16 (anti OVA2 57～ 2 64/Kb)检测细胞表面复合物的形成情况 ,并借助四聚体技术检测了它们对抗原特异性T细胞的诱导能力。结果表明四聚体的构建是成功的 ,进一步用已被重组牛痘病毒感染的L92 9 Kb 细胞作为抗原呈递细胞以诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的产生 ,并对活化后特异性CTL进行检测 ,从胞外IFN γ的分泌情况看 ,诱导后的整个群体细胞发生了活化与增殖 ,H 2Kb OVA四聚体对特异性T细胞进行的结合分析与经典的细胞毒效应相一致。可见 ,重组牛痘病毒介导的微小基因产物OVA2 57～ 2 64不仅能为MHC I类分子的合成提供更有效的肽来源 ,且能更有效诱导特异性CTL的产生。     

免疫沉淀法用于A群流脑多糖菌苗的鉴别试验

本文将免疫沉淀法——免疫双扩散及对流免疫电泳法用于Ａ群流脑多糖菌苗的鉴别试验。并对其检测Ａ群流脑多糖菌苗的特异性及敏感性与传统采用的间接血凝抑制试验法进行了比较。试验结果表明,免疫沉淀法准确、特异性好、操作简便、经济。完全符合ＷＨＯ规程及中国规程中对《Ａ群脑膜炎球菌多糖菌苗制造及检定规程》鉴别试验的要求。因此可望替代现行的间接血凝抑制试验,以作为今后Ａ群流脑多糖菌苗鉴别试验的常规测定法