持久脊柱负荷与椎间盘组织中MMP-2表达关系的研究

目的：建立一压力可控型椎间盘退变模型,并探讨持久的脊柱负荷对椎间盘MMP-2表达的影响。方法：选用54只成年Wistar大鼠随机分为三组,分别模拟人类在站立（A组1.12N）、坐位直立（B组1.68N）、坐位前屈（C组3.08N）三种状态下椎间盘内的负荷情况,给予大鼠尾椎Co9/10椎间盘恒定压力加压,以相邻Co8/9椎间盘不加压作为对照（D组）。三组分别在3、7、14天后取受压及对照椎间盘标本,进行HE染色组织学观察及免疫组织化学分析,观察椎间盘退变情况及MMP-2在椎间盘组织中的含量变化。结果：随时间与压力的增加,椎间盘组织学评分与MMP-2表达增高（P〈0.05）,MMP-2表达与椎间盘退变程度成正相关（r=0.870,P〈0.05）。结论：持久的脊柱负荷可引起椎间盘退变及MMP-2表达增加,MMP-2可能在椎间盘退变的过程中发挥重要作用。     

Cathepsin L与MMP-3在兔椎间盘退变中相关性研究

目的:探讨组织蛋白醇L(Cathepsin L)与基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在兔椎间盘退变中的相关性.方法:健康大白兔60只随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,实验组分为三个亚组,椎间盘内注射3种不同浓度的Cathepsin L,阴性对照组中在椎间盘内注射生理盐水,空白对照组不做任何处理.采用HE粢色组织学观察椎间盘的退变特征,免疫组织化学S-P法检测椎间盘组织中MMP-3的表达.结果:HE染色组织学观察6周时在实验组椎间盘中,组织学观察到不同程度的椎间盘退变特征:□核脊索细胞逐渐减少,并逐渐被纤维软骨组织替代,纤维环与髓核之间失去明显的界限.免疫组织化学染色结果,3周、6周时实验组MMP-3的阳性率均高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05).结论:Cathepsin L与MMP-3共同参与了兔椎间盘的退变,Cathepsin L可能促进MMP-3在椎间盘内的生成,从而导致椎间盘的退变.     

不同月龄大鼠椎间盘退变与多效生长因子表达的关系

目的观察不同月龄大鼠椎间盘的形态学变化并检测椎间盘中多效生长因子（pleiotrophin,PTN）的表达,探讨PTN与椎间盘退变的关系。方法取Wistar大鼠50只,以1,3,6,12,18个月龄不同分为5组,每组10只。采用苏木精-伊红染色观察椎间盘的形态学变化。采用SABC免疫组织化学方法,检测椎间盘中PTN的表达情况;结果（1）随着月龄的增加,椎间盘组织结构紊乱的程度逐渐增加,髓核内基质降解、正中出现空腔,胶原纤维增生、粗大、排列紊乱、并可见纤维断裂或缺失。（2）随着大鼠月龄的增加（1-12月龄）,椎间盘细胞中PTN的表达有逐渐减低的趋势,但至18月龄,PTN表达又有所增加;6和12月龄组椎间盘细胞中PTN的表达显著低于1月龄组,而18月龄组PTN的表达显著高于12月龄组。同月龄组椎间盘细胞中,PTN在终板的表达高于髓核和纤维环,髓核和纤维环中PTN的表达未见明显差异。结论大鼠椎间盘结构随月龄增加发生退行性变,PTN参与了大鼠椎间盘的退变,并可能通过促进椎间盘组织中新生血管的形成,延缓椎间盘的退变。     

Peroxiredoxin Ⅱ在退变椎间盘髓核中的表达及临床意义

目的:检测Pcroximdoxin Ⅱ在腰椎间盘髓核组织中的表达,分析其在椎间盘退变中的临床意义.方法:用蛋白免疫印迹(Western blot)的方法检测Peroxiredoxin Ⅱ在正常、突出及脱出腰椎间盘髓核中的表达情况.结果:Peroxiredoxin Ⅱ在退变椎间盘髓核中表达丰富,而在正常椎问盘髓核中表达微弱,两者比较差异显著(P<0.05),在突出和脱出椎间盘髓核中表达无显著性差异(P>0.05).结论:Peroxiredoxin Ⅱ在正常及退变腰椎间盘髓核组织中差异表达.     

Peroxiredoxin Ⅱ在退变椎间盘髓核中的表达及其临床意义

目的:检测PeroxiredoxinⅡ在腰椎间盘髓核组织中的表达,分析其在椎间盘退变中的临床意义。方法:用蛋白免疫印迹(Western blot)的方法检测PeroxiredoxinⅡ在正常、突出及脱出腰椎间盘髓核中的表达情况。结果:PeroxiredoxinⅡ在退变椎间盘髓核中表达丰富,而在正常椎间盘髓核中表达微弱,两者比较差异显著(P<0.05),在突出和脱出椎间盘髓核中表达无显著性差异(P>0.05)。结论:PeroxiredoxinⅡ在正常及退变腰椎间盘髓核组织中差异表达。     

PeroxiredoxinⅡ在退变椎间盘髓核中的表达及其临床意义

目的：检测PeroxiredoxinⅡ在腰椎间盘髓核组织中的表达,分析其在椎间盘退变中的临床意义。方法：用蛋白免疫印迹（Western blot）的方法检测PeroxiredoxinⅡ在正常、突出及脱出腰椎间盘髓核中的表达情况。结果：PeroxiredoxinⅡ在退变椎间盘髓核中表达丰富,而在正常椎间盘髓核中表达微弱,两者比较差异显著（P〈0.05）,在突出和脱出椎间盘髓核中表达无显著性差异（P〉0.05）。结论：PeroxiredoxinⅡ在正常及退变腰椎间盘髓核组织中差异表达。     

几种椎间盘退变动物模型的建立和应用

椎间盘退变是一种年龄相关的退行性疾病,是引起下腰痛的主要因素,严重影响病人的生活质量,并显著增加家庭的经济负担。目前,缺少椎间盘退变的有效干预和治疗手段,部分原因是其发病机制尚未阐明。椎间盘退变动物模型的构建对于阐明该疾病的病理机制至关重要。椎间盘退变是一个复杂的过程,受机械应力、结构损伤、生物化学与基因表达等多种因素的影响。本文总结了应用异常机械应力、结构损伤、生物化学或化学诱导和基因敲除等方式构建的椎间盘退变动物模型。生物力学是维持椎间盘稳态的重要因素,异常的机械应力会导致椎间盘退变。同时,椎间盘退变常伴随结构性损伤,椎间盘结构破坏也会导致椎间盘发生退变。此外,生物化学或化学诱导和关键基因敲除也会导致椎间盘退变。本文按照造成异常机械应力的因素将机械应力模型分为加压模型和失稳模型;按照椎间盘结构将结构损伤模型分为髓核与纤维环损伤模型和软骨终板损伤模型。总结了生物化学或化学诱导模型以及新型的基因敲除模型。讨论了不同类型椎间盘退变动物模型的可能应用和局限性。     

人退变椎间盘软骨终板干细胞多向分化的研究

目的：为了分离和鉴定人退变椎间盘软骨终板干细胞。方法：收集因腰椎间盘退变性疾病行腰椎间盘摘除术并植骨融合的标本。在解剖显微镜下清理软骨终板组织,并消化软骨终板,提取软骨终板细胞。获得的软骨终板细胞经过琼脂糖三维筛选系统培养后,选取细胞克隆团并进行体外扩增,扩增后的细胞行流式细胞术检测干细胞标志物证实退变软骨终板中存在干细胞。结果：共聚焦免疫荧光提示退变椎间盘软骨终板组织中存在干细胞标志物STR01、CDl05、CD73、CD90阳性的细胞。经琼脂糖三维培养基筛选的CESCs在免疫表型上符合干细胞标准。结论：在人退变椎间盘的软骨终板中存在具有多向分化潜能的干细胞。     

人退变椎间盘软骨终板干细胞多向分化的研究

目的:为了分离和鉴定人退变椎间盘软骨终板干细胞。方法:收集因腰椎间盘退变性疾病行腰椎间盘摘除术并植骨融合的标本。在解剖显微镜下清理软骨终板组织,并消化软骨终板,提取软骨终板细胞。获得的软骨终板细胞经过琼脂糖三维筛选系统培养后,选取细胞克隆团并进行体外扩增,扩增后的细胞行流式细胞术检测干细胞标志物证实退变软骨终板中存在干细胞。结果:共聚焦免疫荧光提示退变椎间盘软骨终板组织中存在干细胞标志物STRO1、CD105、CD73、CD90阳性的细胞。经琼脂糖三维培养基筛选的CESCs在免疫表型上符合干细胞标准。结论:在人退变椎间盘的软骨终板中存在具有多向分化潜能的干细胞。     

大豆异黄酮对MMTV-erbB-2 转基因小鼠乳腺肿瘤中MMP-2 和TIMP-2 表达影响的研究

目的:利用MMTV-erbB-2转基因小鼠,探讨食物中大豆异黄酮对MMTV-erbB-2转基因小鼠乳腺肿瘤发生发展的影响。方法:选择健康雌性MMTV-erbB-2转基因小鼠60只,随机分为实验组(自鼠龄四周起喂养含有大豆异黄酮的豆饲料和对照组(喂养不含大豆异黄酮的普通饲料)。观察两组小鼠生长情况,观察各组小鼠乳腺肿瘤的发病率和潜伏期、记录肿瘤生长情况,并通过HE染色观察其病理类型,免疫组织化学染色SP法检测各组小鼠乳腺癌组织及正常乳腺组织中MMP-2和TIMP-2的表达并分析其关系。结果:豆饲料干预组,普通饲料干预组小鼠乳腺肿瘤的发瘤率分别为36.7%,66.7%,豆饲料干预组小鼠乳腺肿瘤发瘤率与对照饲料干预组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠肿瘤多生长在第2-3对乳腺上,两组小鼠乳腺肿瘤最大平均直径及潜伏期相比较差异无统计学意义。两实验组小鼠乳腺肿瘤组织经HE染色后全部确定为乳腺癌组织。两实验组小鼠乳腺肿瘤组织中MMP-2和TIMP-2表达均高于正常乳腺组织,差异有统计学意义(P<0.05),MMP-2和TIMP-2在乳腺肿瘤组织中表达呈负相关,在正常乳腺组织中表达无相关性。MMP-2在豆饲料干预组,普通饲料干预组小鼠乳腺肿瘤组织中的阳性率分别为83.3%,73.9%,各实验组阳性率相比较差异无统计学意义(P=0.888);TIMP-2在豆饲料干预组,普通饲料干预组小鼠乳腺肿瘤组织中的阳性率分别为33.3%,43.5%,各实验组阳性率相比较差异无统计学意义。结论:大豆异黄酮能抑制MMTV-erbB-2转基因小鼠乳腺肿瘤的发生,但其对小鼠乳腺肿瘤的作用与MMP-2及TIMP-2的表达无明显相关,具体机制尚待进一步研究。     

基因MMP-2、PTEN和Fn的表达与胃癌临床病理因素的关系

为了探讨基因MMP-2、PTEN和FN与胃癌临床病理因素的关系,采用免疫组织化学方法,检测了56例胃癌中MMP-2、PTEN和Fn的表达.结果表明:MMP-2、PTEN的阳性表达和Fn的异常表达分别为58.9%、55.4%和60.7%.低分化癌中MMP-2的表达和Fn的异常高于高分化癌(P<0.05).MMP-2的表达和Fn的异常与胃癌浸润深度、淋巴结转移正相关(P<0.05),PTEN的表达与淋巴结转移负相反(P<0.05).MMP-2和PTEN的表达呈负相关(P<0.05),MMP-2表达和Fn的异常呈正相关(P<0.01),PTEN表达与Fn异常之间无明显相关性(P>0.5).通过该研究发现,检测胃癌组织中MMP-2、PTEN和Fn的表达,有助于了解胃癌的发展和评估胃癌患者的预后.     

人静脉移植物基质金属蛋白酶-2和波型蛋白的表达

目的:探讨人静脉移植物基质金属蛋白酶-2(Matrix Metalloproteinase-2,MMP-2)和波型蛋白(Vimentin)的表达情况。方法:应用免疫荧光组织化学技术对30个静脉移植物再塞标本中MMP-2、Vimentin的表达进行了检测,用激光共聚焦显微镜拍片,图片用Silicon Graphics Octane进行处理。结果:在正常静脉血管,有少量MMP-2的表达;Vimentin的表达较弱。在静脉移植的血管, MMP-2的表达显著增加,是正常血管的3．5倍;Vimentin(波形蛋白)在中膜和内膜的表达明显增多。另外,统计分析表明MMP-2在新内膜的表达均显著高于在中膜的表达(P＜0．01)。结论:在静脉移植物的新内膜,MMP-2和Vimentin的表达均上调,提示这些重要分子在新内膜的形成和静脉再狭窄的病理过程中具有重要的作用。     

MMP-2及TIMP-2的表达与胶质瘤复发相关性的研究

目的:探讨基质金属蛋白酶类与胶质细胞瘤浸润性生长之间的关系及其在胶质瘤复发中的作用。以及基质金属蛋白酶及其抑制因子(MMP-2、TIMP-2)的阳性表达与胶质细胞瘤病理分级及预后的关系。方法:应用免疫组织化学染色法(SP法)检测48例人脑原发和复发胶质细胞瘤组织中MMP-2、TIMP-2的表达。结果:Ⅲ、Ⅳ级和复发胶质细胞瘤中的MMP-2蛋白的表达显著高于Ⅰ、Ⅱ级(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ级胶质细胞瘤中的TIMP-2蛋白的表达显著高于复发胶质细胞瘤(P<0.05)而与Ⅲ、Ⅳ级细胞瘤无显著性差异(P>0.05);Ⅲ、Ⅳ级和复发胶质细胞瘤中的MMP-2,TIMP-2蛋白的表达无显著差异(P>0.05);同级别胶质细胞瘤中MMP-2、TIMP-2的表达之间无明显相关性(P>0.05);正常脑组织中无表达。结论:MMP-2、TIMP-2的表达与胶质细胞瘤的恶性程度有关,低级别中,MMP-2与TIMP-2成正相关;MMP-2的高表达,TIMP-2的低表达与胶质细胞瘤的侵袭有关,MMP-2、TIMP-2的表达水平有可能成为判定胶质细胞瘤恶性程度、侵袭能力和预后的诊断指标,而且TIMP-2可能更加敏感。     

人基质金属蛋白酶2催化区的克隆与表达

为从随机肽库中寻找具有基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )抑制活性的新型小肽抑制剂 ,应用PCR法从含有人MMP 2基因的质粒中扩增了人MMP 2的催化区 .序列分析结果表明无氨基酸突变 .然后构建人MMP 2催化区的表达载体pET MCD ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,经IPTG诱导表达人MMP 2催化区 .经包涵体分离、变性、金属螯合层析纯化和复性等过程 ,复性后的人MMP 2催化区具有较好的明胶水解活性 .     

UVA-mediated downregulation of MMP-2 and MMP-9 in human epidermal keratinocytes

While human dermal fibroblasts increase the expression and secretion of distinct matrix metalloproteinases (MMPs) in response to ultraviolet (UV) irradiation, much less is known about regulation of MMPs with regard to normal human epidermal keratinocytes (NHEK). In this in vitro study, the effect of ultraviolet A (UVA) irradiation on gelatinase expression and secretion by NHEK was investigated. Irradiation of NHEK with non-toxic doses of UVA resulted in a dose-dependent downregulation of MMP-2 (gelatinase A) and MMP-9 (gelatinase B). A single dose of 30JUVA/cm(2) lowered MMP-2 activity to 26% and MMP-9 activity to 33% compared with mock-irradiated cells at 24h after irradiation. Downregulation of MMP-2 and MMP-9 steady-state mRNA levels was observed at 4h after UVA irradiation. The inhibitory effect of UVA on gelatinases was mediated by UVA-generated singlet oxygen (1O(2)). These findings suggest an inverse response to UVA irradiation in NHEK than in fibroblasts.     

Isolation and characterization of human monoclonal antibodies specific to MMP-1A, MMP-2 and MMP-3

Matrix metalloproteinases (MMPs), a group of more than 20 zinc-containing endopeptidases, are up-regulated in many diseases, but the use of MMP inhibitors for therapeutic purposes has often been disappointing, possibly for the limited specificity of the drugs used in clinical trials. In principle, individual MMPs could be specifically drugged by monoclonal antibodies, either by inhibition of their catalytic activity or by antibody-based pharmacodelivery strategies. In this article we describe the isolation and affinity maturation of recombinant antibodies (SP1, SP2, SP3) specific to the murine catalytic domains of MMP-1A, MMP-2 and MMP-3. These novel reagents allowed a systematic comparative immunofluorescence analysis of the expression patterns of their cognate antigens in a variety of healthy, cancerous and arthritic murine tissues. While all three MMPs were strongly expressed in tumor and arthritis specimens, MMP-1A was completely undetectable in the normal tissues tested, while MMP-2 and MMP-3 exhibited a weak expression in certain normal tissues (e.g., liver). The new antibodies may serve as building blocks for the development of antibody-based therapy strategies in mouse models of pathology.     

MMP-9 and MMP-2 gelatinases and TIMP-1 and TIMP-2 inhibitors in breast cancer: correlations with prognostic factors

The goal of our study was to analyse the prognostic values for some matrix metalloproteinases (MMPs) and tissue inhibitors of matrix metalloproteinases (TIMPs) in breast cancer. We evaluated the activity and the expression levels of MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2 in malignant versus benign fresh breast tumor extracts. For this purpose, gelatinzymography, immunoblotting and ELISA were used to analyse the activity and expression of MMPs and TIMPs. We found that MMP-9 expression level and activity are increased in malignant tumors. In addition, MMP-9/TIMP-1 and MMP-2/TIMP-2 ratio values obtained by us were significantly different in malignant tumors compared to benign tumors. We suggest that the abnormal MMP-9/TIMP-1 balance plays a role in the configuration of breast invasive carcinoma of no special type and also in tumor growth, while altered MMP-2/TIMP-2 ratio value could be associated with lymph node invasion and used as a prognostic marker in correlation with Nottingham Prognostic Index. Finally, we showed that in malignant tumors high expression of estrogen receptors is associated with enhanced activity of MMP-2 and increased bcl- 2 levels, while high expression of progesterone receptors is correlated with low TIMP-1 protein levels.     

MMP-2和TIMP-2基因启动子区多态性与卵巢上皮性癌关系的研究

为探讨MMP-2和TIMP-2基因启动子区单核苷酸多态性(SNPs)与卵巢上皮性癌发病风险的关系, 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测了246例卵巢上皮性癌患者和324例对照妇女的MMP-2 C-1306T、C-735T和TIMP-2 G-418C 3个SNPs的基因型。结果显示, MMP-2 C-1306T SNP的等位基因及基因型频率分布在卵巢癌与对照组间无显著差异(P=0.55和P=0.42); 但卵巢癌组MMP-2 C-735T SNP的C等位基因和C/C基因型频率(80.7%和66.7%)明显高于对照组(75.5%和55.9%), 与T/T+C/T基因型比较, 携带C/C基因型可以显著增加卵巢癌的发病风险(OR=1.58, 95% CI=1.12~2.23), 进一步分层分析显示, C/C基因型主要与宫内膜样癌和年龄≥50岁妇女的发病风险显著相关, OR值分别为1.69(95%CI=1.03~2.79)和1.71(95% CI=1.14~2.57); 对MMP-2 C-1306T、C-735T 2个SNPs的单体型分析显示, 4种单体型频率(T_-1306-T_-735、T_-1306-C_-735、C_-1306-T_-735和C_-1306-C_-735)在两组间分布无显著差异(P=0.24); 虽然TIMP-2 G-418C SNP的等位基因及基因型频率在卵巢癌组与对照组间分布无显著性差异(P=0.33和P=0.47), 但以病理类型分层分析显示, 携带TIMP-2 G-418G/G基因型有增加宫内膜样癌发病风险的趋势(OR=1.62, 95%CI=0.94~2.78)。以上结果提示, MMP-2基因启动子区C-735T SNP的C/C基因型可能是卵巢上皮性癌发病的潜在危险因素, 而C-1306T SNP可能与卵巢上皮性癌的发病风险无关; TIMP-2 G-418C SNP可能与不同病理类型的卵巢上皮性癌发病风险有关。