NDRG2与GFAP在不同脑区星形胶质细胞的表达与分布

目的:观察NDRG2(N-myc下游调节基因2)与GFAP(胶质纤维酸性蛋白)在不同脑区星形胶质细胞的表达与分布。方法:利用免疫荧光NDRG2与GFAP双标技术以及Western Blot技术观察皮层、海马及纹状体等不同脑区星形胶质细胞NDRG2和GFAP的表达与分布。结果:免疫荧光结果显示NDRG2阳性细胞广泛而均匀地分布于不同脑区,并与GFAP存在较好的共定位;NDRG2与GFAP标记的星形胶质细胞形态不尽相同。Western Blot结果显示NDRG2在皮层中表达比海马和纹状体多,而GFAP在海马中表达比皮层和纹状体多。结论:NDRG2广泛表达于不同脑区星形胶质细胞,并于GFAP存在较好的共定位。     

miR-27a-3p通过靶向Sema7A调控病毒性心肌炎心肌细胞损伤的机制研究

目的探讨微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)过表达对病毒性心肌炎(VMC)细胞损伤的影响及其可能的作用机制。方法原代培养大鼠心肌细胞,柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞建立VMC模型(CVB3组)。正常心肌细胞作为对照组,分别将miR-NC、miR-27a-3p mimics、si-NC,si-Sema7A分别转染至CVB3感染的心肌细胞,记为CVB3+miR-NC组、CVB3+miR-27a-3p组、CVB3+si-NC组、CVB3+si-Sema7A组。分别将miR-27a-3p mimics与pcDNA,miR-27a-3p mimics与pcDNA-Sema7A共转染至CVB3感染的心肌细胞,记为CVB3+miR-27a-3p+pcDNA组、CVB3+miR-27a-3p+pcDNA-Sema7A组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western blot法分别检测细胞中miR-27a-3p、信号蛋白7A(Sema7A)的表达水平;流式细胞术检测miR-27a-3p过表达或干扰Sema7A表达后心肌细胞的凋亡率;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)的含量;双荧光素酶报告基因验证miR-27a-3p与Sema7A的靶向关系;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。两组间比较采用独立样本t检验。结果与对照组比较,CVB3组miR-27a-3p的表达水平(1.01±0.09比0.42±0.04)降低,Sema7A的mRNA和蛋白表达水平(1.02±0.09比2.15±0.21、0.43±0.04比0.94±0.09)升高,TNF-α、IL-1水平[(403.56±38.16)pg/mL比(1156.48±63.59)pg/mL>(29.45±3.54)pg/mL比(136.57±12.47)pg/mL]升高,细胞凋亡率[(5.36±0.54)%比(24.58±2.14)%]升高,Bax、cleaved caspase-3的表达水平升高,Bcl-2的表达水平降低(P均<0.05);与CVB3+miR-NC组比较,CVB3+miR-27a-3p组TNF-α,IL-1水平[(1187.69±71.42)pg/mL比(516.28±48.31)pg/mL、(147.25±14.05)pg/mL比(43.68±5.02)pg/mL]和细胞凋亡率[(26.38±2.55)%比(10.24±1.15)%]降低,Bax、cleaved caspase-3表达水平降低,Bcl-2表达水平升高(P均<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-27a-3p可靶向调控Sema7A的表达;Sema7A过表达可逆转miR-27a-3p过表达对CVB3诱导的VMC细胞损伤的作用。结论miR-27a-3p过表达可降低VMC细胞中炎症因子的表达及抑制细胞凋亡从而减轻心肌损伤,其作用机制可能与靶向调控Sema7A的表达有关。     

二十五味珊瑚丸对D-半乳糖衰老鼠海马细胞形态和GFAP表达的影响

探讨二十五味珊瑚丸对D-半乳糖衰老模型大鼠海马锥体细胞形态和星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。采用颈背部皮下注射D-半乳糖制作大鼠衰老模型。于造模的第6周,给予二十五味珊瑚灌胃。之后取各组脑组织进行HE染色、GFAP免疫组化染色以及Western blotting。与模型组比较,二十五味珊瑚丸组大鼠海马CA3区锥体细胞层细胞丢失较少,细胞排列较紧密、整齐;DG区GFAP阳性的星形胶质细胞数量减少,胞体较小,突起较细;海马GFAP表达下降,差异有显著性(P0.05)。D-半乳糖衰老模型大鼠海马锥体细胞衰老变性且GFAP的表达增多;二十五味珊瑚丸可抑制D-半乳糖衰老模型大鼠海马锥体细胞的衰老变性和星形胶质细胞GFAP的表达。     

Aβ325～35诱导大鼠记忆减退与星形胶质细胞及NOS阳性细胞变化

目的　探讨Aβ2 5～ 3 5诱导模拟人类Alzheimer‘s病 (AD)的大鼠病理模型中星形胶质细胞变化与一氧化氮合酶神经元损伤引起的老年性记忆减退之间的关系。方法　双侧海马内注射 β-淀粉样多肽 2 5～ 3 5片段 (Aβ2 5～ 3 5 )制作大鼠AD模型 ,注射一周后采用NOS组化染色、GFAP免疫组化染色及NOS组化和GFAP双重染色分析大鼠海马GFAP与NOS的表达。结果　海马内注射Aβ2 5～ 3 5后出现海马星形胶质细胞增生、肥大、数目明显多于对照组 (P <0 0 5 ) ,并出现一氧化氮阳性星形胶质细胞 ;海马一氧化氮神经元数量较对照组显著减少 (P <0 0 5 )。结论　AD模型大鼠学习记忆功能低下与Aβ神经毒性导致NOS阳性神经元损伤、死亡直接相关 ,反应性星形胶质细胞参与Aβ导致NOS神经元细胞毒性损伤作用 ,间接导致学习记忆能力减退     

LPS诱导海马星形胶质细胞活化与活化的星形胶质细胞对海马神经元的影响

探讨脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对长时间存活大鼠海马内星形胶质细胞的反应以及对神经元的影响。方法:本实验用10只健康成年雄性SD大鼠,海马CA3区注射LPS 10μ1．7和14d后,尼氏染色观察神经元的变化,免疫组织化学染色结合图像分析方法观察海马CA3区注射部位胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein GFAP)、的表达变化。结果:脂多糖可促进海马星形胶质细胞的活化,但并不能引起海马区神经元的损伤。结论:星形胶质细胞在脑损伤后的脑内炎症反应起了一定的作用,但并不能引起神经元的损伤。     

低氧联合LPS刺激对星形胶质细胞中炎性因子和BNIP3表达的影响*

目的:探讨在低氧联合脂多糖(LPS)作用下,星形胶质细胞中B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B 19-kD相互作用蛋白3(BNIP3)的表达和炎症反应变化。方法:将体外培养的原代星形胶质细胞和神经元进行下列分组:常氧组、LPS组、低氧组和LPS+低氧组(每组设置3个复孔)。LPS处理后,低氧组和LPS+低氧组放入低氧细胞孵箱,LPS组和常氧组放入正常的细胞孵箱。LPS浓度:100 ng/ml,氧气浓度为0.3%。处理时间为24 h。原代的星形胶质细胞进行上述的分组,时间点设为6 h、12 h和24 h。Western blot检测BNIP3的表达变化,RT-PCR和ELISA分别检测星形胶质细胞的肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)mRNA水平变化和分泌情况。结果:与常氧组比较,低氧组炎症因子的表达没有变化,LPS组和LPS＋低氧组的炎症因子TNF-ɑ、IL-1β和IL-6 mRNA水平升高(P＜0.01);与LPS组比较,LPS＋低氧组炎症因子IL-1β和IL-6 mRNA水平进一步升高(P＜0.05,P＜0.01)。与常氧组比较,低氧组炎症因子的分泌水平没有变化,LPS组和LPS＋低氧组的炎症因子TNF-ɑ和IL-6 分泌水平升高(P＜0.01),IL-1β的水平没有变化;与LPS组比较,LPS＋低氧组炎症因子TNF-ɑ和IL-6分泌水平没有进一步升高。BNIP3在体外培养的神经元和星型胶质细胞中都有表达;在星形胶质细胞中,与常氧组比较,LPS组BNIP3的表达没有变化,低氧组和LPS+低氧组BNIP3的表达明显增加(P＜0.01);在神经元中,与常氧组比较,LPS组BNIP3的表达没有变化,低氧组和LPS+低氧组BNIP3的表达增加(P＜0.05,P＜0.01);与神经元的低氧组比较,星形胶质细胞的低氧组BNIP3的表达增加更明显(P＜0.01)。在星形胶质细胞中LPS联合低氧刺激6、12、24 h后BNIP3蛋白的表达,与常氧组相同时间点比较,LPS组BNIP3的表达没有变化,低氧组和LPS+低氧组BNIP3的表达增加(P＜0.05,P＜0.01);与低氧组相同时间点比较,6 h和12 h的LPS＋低氧组BNIP3的表达增加的更高(P＜0.01)。结论:低氧联合LPS刺激可以增强星形胶质细胞的炎症反应,LPS能增加低氧下星形胶质细胞中BNIP3的表达,提示BNIP3在星形胶质细胞的炎性反应中可能具有一定的调节作用。     

IL-12，IFN-γ，EPO及铁蛋白在急性白血病患者血清中的表达及临床意义

目的:研究急性白血病患者血清白介素-12(IL-12)、γ干扰素(IFN-γ)、促红细胞生成素(EPO)、铁蛋白的表达及临床意义。方法:选取2015年8月至2016年7月我院收治的76例急性白血病患者视为观察组,初治组31例,缓解组25例,复发组20例;另选择同期在我院进行健康体检的76例视为对照组。比较急性白血病患者、健康人群及不同疾病阶段的血清IL-12、IFN-γ、EPO、铁蛋白水平。结果:观察组的IL-12、IFN-γ水平显著低于对照组,EPO、铁蛋白水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。初治组、复发组的血清IL-12、IFN-γ显著低于缓解组[(84.21±5.43)pg/mL、(98.7±7.98)pg/mL比(112.43±10.21)pg/mL,(38.54±3.56)pg/mL、(49.87±4.02)pg/mL比(108.32±8.43)pg/mL](P0.05),EPO、铁蛋白水平显著高于缓解组[(402.32±42.31)mIU/mL、(321.58±30.21)mIU/mL比(98.21±9.45)mIU/mL,(653.21±54.24)ng/mL、(512.87±43.45)ng/mL比(342.15±25.12)ng/mL](P0.05)。结论:急性白血病患者血清IL-12、IFN-γ水平较低,EPO、铁蛋白的表达较高,可通过监测上述指标变化评估病情及预后。     

活化星形胶质细胞NGF、IL-6表达的时间特性

目的:研究星形胶质细胞活化后神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达的时间规律性,探讨星形胶质细胞活化后启动保护性机制与损伤性机制的时间特性.方法:体外分离培养星形胶质细胞,分为对照组、活化组、抑制组.通过光学显微镜及免疫荧光化学观察各组细胞的形态变化;应用半定量RT-PCR方法分析各组细胞间胶原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA及NGF mRNA、IL-6 mRNA表达变化;用ELISA法检测各组细胞上清液中不同时间点(6h,24h,48h,72h)NGF、IL-6的含量.结果:活化组与对照组比较,细胞胞体变大,GFAP荧光增强;RT-PCR示GFAP mRNA、NGF mRNA、IL-6 mRNA表达均明显增高,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);ELISA法检测示星形胶质细胞活化后NGF分泌量在活化后24小时达到高峰,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);活化后48小时IL-6的含量达到高峰,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);应用抑制剂Genistein干预后,与活化组相比,抑制组细胞胞体变小,星形胶质细胞活化被抑制,GFAP mRNA表达下降,NGF mRNA、IL-6 mMRA表达亦下降,与活化组比较差异有显著性(P＜0.01).结论:星形胶质细胞活化后NGF、IL-6表达均上调,但NGF表达时间早于IL-6表达时间,表明在星形胶质细胞活化的早期,可能其神经保护作用占主导,而后期其神经毒性作用逐渐明显;Genistein能抑制星形胶质细胞活化,使NGF、IL-6表达下调.     

IL-1β对星形胶质细胞的激活作用

目的研究IL-1β对体外原代培养的星形胶质细胞中的激活及增殖作用,并探讨IL-1β对星形胶质细胞细胞周期的影响.方法将单层培养于盖玻片上的纯化的星形胶质细胞分为4组,分别采取血清培养和血清剥夺培养,加入不同浓度IL-1β,其浓度依次为0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml,作用24小时.采用免疫细胞化学观察GFAP和PCNA的表达.并且采用流式细胞术观察其对星形胶质细胞周期的影响.结果血清培养时不同浓度IL-1β组的星形胶质细胞GFAP表达和细胞指数无明显改变,PCNA表达较对照组明显增强,但是1ng/ml和10ng/ml IL-1β时星形胶质细胞PCNA表达无明显变化.而血清剥夺时不同浓度IL-1β组的星形胶质细胞GFAP和PCNA表达较对照组明显增强,S和G2/M期的细胞指数较对照组增多.结论 IL-1β激活星形胶质细胞,上调GFAP和PCNA的表达,并启动细胞周期进程,促使星形胶质细胞进入增殖周期.这对中枢神经系统损伤和疾病时反应性胶质增生及胶质瘢痕的形成机制起着重要作用.     

正加速度暴露对大鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的探讨正加速度( Gz)重复暴露后不同时间海马星形胶质细胞GFAP表达的变化.方法 SD大鼠60只,随机分成对照组、 Gz重复暴露后1h、6h、12h、24h和48h组,每组10只.采用动物离心机,建立 Gz引发急性脑缺血模型;应用免疫组织化学技术,分别检测 Gz重复暴露后不同时间,海马星形胶质细胞GFAP的表达状况.结果海马星形胶质细胞GFAP阳性细胞数,在 Gz暴露后1h即显著增加,于12h达到高峰,而后逐渐下降,48h仍维持在较高水平,实验组与对照组比较,有显著性差异.结论 Gz重复暴露导致海马星形胶质细胞GFAP表达上调,可能对神经元的缺血损伤起保护作用.     

PSP下调miR-345-5p对雨蛙素诱导的AP腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达

目的探讨黄精多糖（PSP）对雨蛙素诱导的急性胰腺炎（AP）腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达的影响及分子机制。 方法取对数期大鼠胰腺腺泡细胞AR42J,采用100 nmol/L雨蛙素处理细胞6 h,建立AP腺泡细胞损伤模型,并采用不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP处理AP细胞（AP+PSP-L、AP+PSP-M、AP+PSP-H）。试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性以及培养液中白细胞介素-6 （IL-6）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）和IL-1β水平,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测miR-345-5p表达水平。将miR-345-5p抑制物转染AR42J细胞,检测下调miR-345-5p表达对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。将miR-345-5p模拟物转染AR42J细胞,检测上调miR-345-5p表达和PSP处理对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。两组比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,AP细胞MDA含量、IL-6、TNF-α、IL-1β水平和miR-345-5p表达水平均升高,SOD和GPx活性降低（P < 0.05）。与AP细胞比较,不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP作用的AP细胞中MDA含量[（1.08± 0.07）比（0.88±0.06）,（0.73±0.06）,（0.60±0.05） nmol/mg]降低,SOD [（43.01±4.37）比（59.60±5.62）,（72.37±6.32）,（94.21±8.70） U/mg]和GPx活性[（29.03±2.51）比（44.11± 4.71）,（58.07±4.20）,（72.67± 6.56） U/mg]均升高,培养液中IL-6 [（310.72±22.27）比（257.01±20.85）,（192.28±17.70）,（146.93±11.90） pg/mL]、TNF-α [（223.82±21.87）比（175.57±15.85）,（137.00±11.31）,（89.26±7.05） pg/mL]、IL-1β表达水平[（41.66±3.85）比（33.82±3.20）,（26.15±2.56）,（20.14±1.71） pg/mL]和miR-345-5p表达水平（2.78±0.24比2.38±0.21,1.91±0.12,1.25±0.13）均降低,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P均< 0.05）。下调miR-345-5p表达后,AP细胞中MDA含量[（1.13±0.08）比（0.72±0.06） nmol/mg]降低,SOD活性[（41.31±3.98）比（81.73±7.62） U/mg]和GPx [（28.82±2.97）比（61.41±5.81） U/mg]升高,培养液中IL-6 [（314.65±25.02）比159.76±11.93） pg/mL]、TNF-α [（235.18±23.13）比（100.41±8.09） pg/mL]和IL-1β水平[（48.67±4.50）比（27.73±2.54） pg/mL]降低（P均< 0.05）。上调miR-345-5p表达可逆转PSP对AP细胞的影响。其中MDA含量[（0.58±0.03）比（0.95±0.08） nmol/mg]升高、SOD活性[（96.52±9.54）比（54.24±4.15） U/mg]、GPx活性[（79.62±6.23）比（39.81±3.84） U/mg]降低、IL-6 [（145.38±12.49）比（275.38± 21.55） pg/mL]、TNF-α [（84.83±7.81）比（183.73±16.39） pg/mL]和IL-1β [（19.38±1.85）比（36.97±3.62） pg/mL]的表达水平升高（P均< 0.05）。 结论PSP以剂量依赖方式减轻雨蛙素诱导AP细胞炎症反应和氧化应激损伤,其机制与下调miR-345-5p表达有关。     

胃饥饿素对小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制研究

目的探讨胃饥饿素对小鼠急性肺损伤的保护作用和机制。方法将60只小鼠采用随机数字表法分为6组:对照组、模型组、胃饥饿素低、中、高剂量组和地塞米松组。对照组和模型组腹腔注射0.2 mL生理盐水,胃饥饿素各组分别注射400、200、100 μg/ kg溶液,地塞米松组注射2 mg/kg。给药后1 h,对照组滴注等体积生理盐水,其余各组鼻腔滴入10 μg (20 μL)脂多糖 (LPS)。24 h后,测量肺湿/干重 (W/D),ELISA测量支气管肺泡灌洗液 (BALF)中肿瘤坏死因子 (TNF)-α、白细胞介素 (IL)-6和血清中TNF-α、IL-6和IL-1β含量,苏木精-伊红染色检测肺组织病理学形态,蛋白免疫印迹法测量肺组织中IL-1β p17、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 (caspase-1) p20、Nod样受体家族3 (NLRP3)和消皮素 (GSDMD)蛋白表达。体外培养肺泡巨噬细胞,分为对照组、LPS+三磷酸腺苷 (ATP)组、低、中和高剂量胃饥饿素组。碘化吡啶 (PI)染色观察细胞焦亡,蛋白免疫印迹法检测细胞中IL-1β p17、 caspase-1 p20、NLRP3和GSDMD蛋白表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结?果与对照组比较,模型组肺W/D (4.03±0.46比12.71±0.68)、BALF中TNF-α (3.92±0.59比12.83±0.66)、IL-6 (23.94±3.51比159.03±5.21)、血清中TNF-α (2.67±0.29比13.23±0.76)、IL-6 (26.73±2.61比141.64±3.86)和IL-1β (43.89±4.19比249.03±5.38)含量升高,肺组织IL-1β p17 (0.67±0.02比0.93±0.02)、caspase-1 p20 (0.67±0.04比1.02±0.08)、NLRP3 (0.58±0.04比0.91±0.03)和GSDMD蛋白表达 (0.46±0.06比1.06±0.09)上调,差异具有统计学意义 (P均< 0.05)。与模型组比较,低、中和高剂量胃饥饿素组和地塞米松组肺W/D (12.71±0.68比11.13±0.53,7.56±0.31,6.12±0.32,6.14±0.34)、BALF中TNF-α (12.83±0.66比9.89±0.47,9.78±0.53,7.33±0.27,6.27±0.38)、IL-6 (159.03±5.21比130.32±2.49,122.87±3.31,67.42±1.70,56.45±3.33)以及血清中TNF-α (13.23±0.76比10.14±0.52,9.04±0.46,6.43±0.38,6.35±0.26)、IL-6 (141.64±3.86比121.89±3.34,116.42±2.68,71.23±3.02,78.54±5.13)和IL-1β含量 (249.03±5.38比230.14±5.53,196.53±6.41,100.67±3.50,91.56±4.29)呈浓度依赖性减低,肺组织IL-1β p17 (0.93±0.02比0.84±0.01,0.71±0.02,0.61±0.04,0.60±0.02)、caspase-1 p20 (1.02±0.08比0.90±0.03,0.81±0.02,0.63±0.03,0.61±0.03)、NLRP3 (0.91±0.03比0.85±0.03,0.68±0.05,0.64±0.02,0.68±0.03)和GSDMD蛋白表达 (1.06±0.09比0.71±0.02,0.75±0.02,0.67±0.03,0.61±0.01)呈浓度依赖性下调,差异具有统计学意义 (P均 < 0.05)。与对照组比较,LPS+ATP组PI阳性细胞数增加,细胞肿胀和膜破裂,肺泡巨噬细胞中IL-1β p17 (0.44±0.01比0.99±0.03)、caspase-1 p20(0.37±0.01比1.32±0.02)、NLRP3 (0.39±0.02比1.31±0.01)和GSDMD表达 (0.39±0.01比0.83±0.02)上调,差异具有统计学意义 (P均 < 0.05)。与LPS+ATP组比较,低、中和高剂量胃饥饿素组PI阳性细胞数呈剂量依赖性减少,细胞肿胀和膜破裂缓解,肺泡巨噬细胞中IL-1β p17 (0.99±0.03比0.55±0.02,0.45±0.02,0.31±0.02)、caspase-1 p20 (1.32±0.02比0.45±0.02,0.42±0.02,0.09±0.01)、NLRP3 (1.31±0.01比0.90±0.02,0.82±0.02,0.33±0.01)和GSDMD (0.83±0.02比0.67±0.04,0.49±0.01,0.35±0.02)表达呈剂量依赖性下调,差异具有统计学意义 (P 均 < 0.05)。结论胃饥饿素对小鼠急性肺损伤具有保护作用,该作用可能与NLRP3炎性小体介导炎症反应和肺泡巨噬细胞焦亡有关。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠模型中痩素及白介素-8 的表达分析

目的:观察COPD大鼠模型中瘦素(leptin)、白细胞介素8(IL-8)的表达情况,分析其相关性,探讨leptin在COPD发生发展中的作用及意义.方法:36只雄性SD大鼠随机分为①健康对照组;②COPD模型1组:分别于第(1、14)d经气管内注入内毒素200ug,熏5％香烟(第1、14d除外),2h/d,共4周;③COPD模型2组:单纯熏5％香烟2h/d,共12周.观察肺组织病理变化,免疫组化法测定leptin、IL-8在支气管肺组织的表达情况,放免法测定血清leptin及IL-8浓度.结果:细胞因子leptin及炎性因子IL-8在支气管肺组织阳性表达.LPS联合熏烟诱导COPD1组支气管肺组织中leptin(52.67±04.72)和IL-8(59.56± 3.94)表达较单纯熏烟诱导COPD2组leptin(38.89± 2.57)和IL-8(55.22± 3.42)表达明显升高,P＜0.05,两组COPD大鼠模型支气管肺组织中leptin及IL-8表达较正常对照组leptin( 1690± 1.52)和IL-8 (28.00± 4.24)表达均明显增高,P＜0.05,COPD1组血清中leptin(3.26± 0.95)ng/mL和IL-8( 107.51±13.38 )pg/mL-较COPD2组中leptin(2.42± 0.69 )ng/mL和IL-8((94.07± 11.20)pg/mL明显增高,P＜0.05,两组COPD大鼠模型血清中leptin及IL-8浓度较正常对照组leptin(0.95±0.56)ng/mL和IL-8( 39.48± 6.35 )pg/mL浓度显著升高,P＜0.05.血清中Leptin与IL-8表达水平呈显著正相关(r值分别为0.72 0.67 0.84均P＜0.05).经过q检验,两两之间比较均有统计学意义.结论:leptin和IL-8均参与COPD炎症反应过程,并且具有相关性,LPS促进二者的表达.     

慢性阻塞性肺疾病大鼠模型中瘦素及白介素-8的表达分析

目的：观察COPD大鼠模型中瘦素（1eptin）、白细胞介素8（IL-8）的表达情况,分析其相关性,探讨leptin在COPD发生发展中的作用及意义。方法：36只雄性SD大鼠随机分为①健康对照组;②COPD模型1组：分别于第（1、14）d经气管内注入内毒素200ug,熏5％香烟（第1、14d除外）,2h／d,共4周;⑧COPD模型2组：单纯熏5％香烟2h／d,共12周。观察肺组织病理变化,免疫组化法测定leptin、IL-8在支气管肺组织的表达情况,放免法测定血清leptin及IL-8浓度。结果：细胞因子leptin及炎性因子IL-8在支气管肺组织阳性表达。LPS联合熏烟诱导COPDl组支气管肺组织中leptin（52．67±04．72）和IL-8（59．56±3．94）表达较单纯熏烟诱导COPD2组leptin（38．89±2．57）和IL-8（55．22±3．42）表达明显升高,P〈0．05,两组COPD大鼠模型支气管肺组织中leptin及IL-8表达较正常对照组leptin（16．90＋1．52）和IL-8（28．00±4．24）表达均明显增高,P〈0．05,COPD1组血清中leptin（3．26±0．95）ng／mL和IL-8（107．51±13.38）pg／mL较COPD2组中leptin（2．42±0．69）ng／mL和IL-8（（94．07±11．20）pg／mL明显增高,P〈0．05,两组COPD大鼠模型血清中leptin及IL培浓度较正常对照组leptin（0．95±0．56）ng／mL和IL-8（39．48±6．35）pg／mL浓度显著升高,P〈0．05。血清中Leptin与IL-8表达水平呈显著~-ffn关（r值分别为0．720．670．84均P〈0．05）。经过q检验,两两之间比较均有统计学意义。结论：leptin和IL-8均参与cOPD炎症反应过程,并且具有相关性,LPS促进二者的表达。     

胰高血糖素样肽1对脂多糖诱导的血管内皮细胞炎性反应的影响

目的：探讨胰高血糖素样肽1（glucagon like peptide 1,GLP-1）对脂多糖（1ipopolysaccharide,LPS）诱导的血管内皮细胞（VEC）炎性反应的影响。方法：以体外培养的人动脉VEC为研究模型,将细胞分为四组（对照组、LPS刺激组、LPS±GLP-1组、GLP-1组）,Rhodamin-Phalloidin检测肌动蛋白骨架F-actin分布,用苏木素-伊红（HE）染色观察细胞间连接的形态特征,用示踪剂Rhodamine Bisothiocyanate-Dextran检测VECs单层通透性变化改变,酶联免疫吸附实验检测细胞分泌白介素（IL）-6和IL-8的变化。结果：GLP-1（100nM）可减少LPS（1μg／mL）刺激后细胞肌动蛋白骨架F-actin应力纤维的形成,并抑制LPS刺激后细胞间连接的中断。Rhodamine B isothiocyanate-Dextran细胞通透性检测结果显示：GLP-1可明显降低LPS刺激引起的VEC通透性增加[由（2．57±0．19）×10^-5cm／s降至（2．10±0．18）×10^-5cm／s,P〈0．05]。此外,GLP-1可抑制LPS刺激后VEC中炎性细胞因子IL-6和IL-8的表达[分别由（42130±6522）pg／ml降至（27478±5096）pg／ml和（18376±1561）pg／ml降至（14414±927）pg／ml,均P〈0．05]。结论：GLP-1可对抗LPS刺激引起的VEC炎症反应和细胞通透性增加．改善LPS诱导的内皮细胞炎性损伤。     

血必净干预对慢性阻塞性肺疾病大鼠体内炎症因子的影响

目的：通过观察血必净干预对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠体内炎症因子的影响,探讨血必净治疗COPD的机制。方法：36只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、COPD模型组（简称模型组）、血必净干预组（简称干预组）,每组12只。采用香烟烟雾暴露加气管内滴注脂多糖法建立COPD大鼠模型。造模时间共30天,其中干预组在后15天给予血必净4ml／Kg体重尾静脉注射。分别测定各组肺功能,肺组织病理学变化,血清及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）浓度。结果：模型组大鼠FEV0．3／FVC[（57．8±5．6）％]和动态肺顺应性（Cydn）[（0．098＋0．006）cmH20·mL^-1·s^-1,lcmH20=0．098kPa]均明显低于对照组[（81．4±3．1）％和（0．195±0．012）cmH20·mL^-1·S^-1],而干预组大鼠[（67．2±3．2）％和（0．142±0．024）cmH20·mL‘S‘。]则较模型组有显著提高,差异均具有统计学意义（t值分别为-13．940、-15．165、-5．552、-6．927,均P〈0．01）;模型组大鼠平均气道阻力（RI）[（0．802±0．070）mL／cmH20]明显高于对照组[（0．224±0．069）mL／cmH20],而干预组[（0．475±0．050）mL／cmH20]则较模型组有明显下降,差异均具有统计学意义（t值分别为-22．389、-12．658,均P〈0．01）;模型组大鼠血清和肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-8浓度[（27．8±7．4）pg／mL和（340．0±79．6）pg／mL、（209．9±82．1）pg／mL和（337．3±96．4）pg／mL、（37．7±11．4）pg／mL和（69．6±18．9）pg／mL]均显著高于对照组,差异均具有统计学意义（t值分别为-12．466、-19．648、-11．749、-16．364、12．550、14．834,均P〈0．01）,而干预组大鼠[（9．6±5．6）pg／mL和（45．6±22．9）pg／mL、（36．3±17．9）pg／mL和（42．9±20．5）pg／mL、（10．3±5．6）pg／mL和（15．7±8．0）pg／mN．~4较模型组有显著降低,差异均具有统计学意义（t值分别为-9．367、-17．390、-10．106、-14．631、10．475、12．772,均P〈0．01）。结论：COPD大鼠血清及肺泡灌洗液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8的浓度均显著增高,血必净干预能显著下调上述关键致炎因子的表达,并与其临床症状、肺功能、病理学改变相印证。因此,我们推测：血必净可能通过下调COPD炎症时TNF-α、IL-6、IL-8等关键致炎因子的表达,进一步抑制气道炎症的级联效应来发挥其强大的抗炎作用。     

妊娠期肝内胆汁淤积症患者外周血中维生素D受体 与Th1/Th2 型细胞因子的变化

目的:研究妊娠期肝内胆汁淤积症患者外周血中维生素D受体的表达与Th1/Th2型细胞因子干扰素-γ/白细胞介素-4(IFN-γ/IL-4)的变化关系,探讨ICP发病机制。方法:选取ICP患者31例(ICP组),孕周相匹配的正常孕妇31例(正常对照组)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法),检测两组孕妇血清中Th1型细胞因子(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的水平;采用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(qRT-PCR),检测两组孕妇外周血单个核细胞维生素D受体(VDR)mRNA的表达水平,采用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参,根据相对定量公式:2-△△CT分析VDR mRNA的表达水平。结果:(1)ICP组外周血清中IFN-γ的浓度[(230.93±36.04)pg/ml]明显高于正常对照组[(138.37±25.08)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.01)。ICP组血清中IL-4浓度[(9.99±3.19)pg/ml]和正常对照组[(8.58±2.43)pg/ml]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ICP组IFN-γ/IL-4比值(24.56±6.91)高于正常对照组(17.13±4.84),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)ICP组外周血单个核细胞维生素D受体mRNA的表达明显低于正常对照组(P<0.01),正常对照组VDR的表达定义为1.0,ICP组的表达量为0.4。(3)ICP组外周血中VDR的表达水平与IFN-γ浓度呈明显负相关(r=-0.833,P<0.01),与IL-4浓度无明显相关(r=-0.109,P>0.05),与IFN-γ/IL-4比值呈负相关,但相关性不强(r=-0.356,P=0.049<0.05)。结论:ICP患者外周血Th1/Th2型细胞因子平衡由Th2向Th1偏移,可能与ICP孕妇外周血单个核细胞VDR的表达减少有关。     

下调TLR4对LPS诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制

目的探讨TLR4对脂多糖（LPS）诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制。 方法将3条siRNA-TLR4-1、siRNA-TLR4-2和siRNA-TLR4-3转染至16HBE细胞中,筛选出最佳的siRNA-TLR4干扰序列进行实验。实验分为对照组（未处理）、LPS组（给予50 μg/ml LPS处理）、LPS+siNC组（转染siRNA-NC后给予50 μg/ml LPS处理）和LPS+siTLR4组（分别转染设计的3条siRNA-TLR4后给予50 μg/ml LPS处理）,采用RT-PCR检测TLR4、IL-6和TNF-α mRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达。多组间比较使用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q,两组间比较采用独立样本t检验。 结果LPS组与LPS+siTLR4-2组TLR4 mRNA（2.05±0.12,3.28±0.15）和蛋白表达（0.38±0.03,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t?= 11.091,11.585,P均< 0.001）;LPS组与LPS+siTLR4-3组TLR4 mRNA（1.39±0.09,3.28±0.15）和蛋白表达（0.31±0.02,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t?= 20.857,12.650,P均?< 0.001）且siRNA-TLR4-3的效果最为显著。与对照组相比,LPS组、LPS+siNC组和LPS+siTLR4组细胞中IL-6 mRNA（11.42±1.05,11.38±1.34,6.22±0.35,0.97±0.06,F?= 98.803,P均< 0.01）、TNF-α mRNA（15.76±1.12,15.69±0.87,7.54±0.41,1.03±0.09,F?= 278.064,P均< 0.01）、Cleaved Caspase-3蛋白（0.75±0.06,0.77±0.05,0.38±0.03,0.13±0.02,F?= 154.851,P均< 0.01）、Bax蛋白（0.48±0.05,0.52±0.05,0.33±0.02,0.11±0.02,F?= 71.310,P均< 0.01）、NF-κBp65蛋白（0.64±0.05,0.67±0.05,0.45±0.04,0.28±0.02,F?= 56.571,P?均?< 0.01）的表达水平和细胞凋亡率[（21.36±2.85）﹪,（20.94±3.22）﹪,（13.08±1.16）?﹪,（7.25±1.28）﹪,F?= 25.685,P均< 0.01]均明显升高,而细胞活力（0.53±0.04,0.51±0.04,0.78±0.06,1.15±0.08,F?= 80.811,P均< 0.01）和Bcl-2蛋白（0.28±0.03,0.25±0.03,0.40±0.03,0.69±0.06,F?= 76.762,P均< 0.01）、IκBα蛋白（0.38±0.03,0.35±0.03,0.44±0.03,0.72±0.06,F?= 53.635,P均< 0.01）的表达水平均明显降低;与LPS组相比,LPS+siTLR4组中IL-6 mRNA、TNF-α mRNA、Cleaved Caspase-3蛋白、Bax蛋白、NF-κBp65蛋白的表达水平和细胞凋亡率均明显降低,差异有统计学意义（t = 8.138,11.937,9.553,4.825,5.140,4.661,P均< 0.01）,而细胞活力和Bcl-2蛋白、IκBα蛋白的表达水平均明显升高,差异有统计学意义（t = 6.005,4.899,3.674,P < 0.05）,而LPS组和LPS+siNC组间差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论下调TLR4可通过抑制NF-κB通路激活抑制LPS诱导的细胞凋亡和炎症反应减轻16HBE细胞损伤。     

Differential regulation of cytokine and chemokine production in lipopolysaccharide-induced tolerance and priming

LPS pretreatment of human pro-monocytic THP-1 cells induces tolerance to secondary LPS stimulation with reduced TNFalpha production. However, secondary stimulation with heat-killed Staphylococcus aureus (HKSa) induces priming as evidenced by augmented TNFalpha production. The pro-inflammatory cytokine, IFNgamma, also abolishes suppression of TNFalpha in LPS tolerance. The effect of LPS tolerance on HKSa and IFNgamma-induced inflammatory mediator production is not well defined. We hypothesized that LPS, HKSa and IFNgamma differentially regulate pro-inflammatory mediators and chemokine production in LPS-induced tolerance. THP-1 cells were pretreated for 24 h with LPS (100 ng/ml) or LPS (100 ng/ml) + IFNgamma (1 microg/ml). Cells were subsequently stimulated with LPS or HKSa (10 microg/ml) for 24 h. The production of the cytokines TNFalpha, IL-6, IL-1beta, and GMCSF and the chemokine IL-8 were measured in supernatants. LPS and HKSa stimulated TNFalpha (3070 +/- 711 pg/ml and 217 +/- 9 pg/ml, respectively) and IL-6 (237 +/- 8.9 pg/ml and 56.2 +/- 2.9 pg/ml, p < 0.05, n = 3, respectively) in control cells compared to basal levels (< 25 pg/ml). LPS induced tolerance to secondary LPS stimulation as evidenced by a 90% (p < 0.05, n = 3) reduction in TNFalpha. However, LPS pretreatment induced priming to HKSa as demonstrated by increased TNFalpha (2.7 fold, from 217 to 580 pg/ml, p < 0.05, n = 3 ). In contrast to suppressed TNFalpha, IL-6 production was augmented to secondary LPS stimulation (9 fold, from 237 to 2076 pg/ml, p < 0.01, n = 3) and also primed to HKSa stimulation (62 fold, from 56 to 3470 pg/ml, p < 0.01, n = 3). LPS induced IL-8 production and to a lesser extent IL-1beta and GMCSF. LPS pretreatment did not affect secondary LPS stimulated IL-8 or IL-1beta, although HKSa stimulation augmented both mediators. In addition, IFNgamma pretreatment reversed LPS tolerance as evidenced by increased TNFalpha levels while IL-6, IL-1beta, and GMCSF levels were further augmented. However, IL-8 production was not affected by IFNgamma. These data support our hypothesis of differential regulation of cytokines and chemokines in gram-negative- and gram-positive-induced inflammatory events. Such changes may have implications in the pathogenesis of polymicrobial sepsis.