消炎痛对猪胃H~＋／K~＋－ATP_（ase）抑制的动力学

消炎痛作为一种可引起胃粘膜急性病变的药物,用分离提纯的猪胃Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ证明,它可以显著的抑制此酶的活力,０．１ｍｇ／ｍＬ时即可抑制酶活力２７％,０．５ｍｇ／ｍＬ时可抑制全部活力,其Ｋ（０．５）为０．１８ｍｇ／ｍＬ。消炎痛对Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制随３０℃时预保温时间的延长而加剧,１０ｍｉｎ预保温可抑制总活力的５０％。消炎痛并不影响Ｈ＋／Ｋ＋－ＴＡＰａｓｅ的转换温度（３９℃）以及最适ｐＨ（约ｐＨ７．５）,但酸性条件下消炎痛对Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ抑制比碱性条件下强烈。在我们的实验条件下,消炎痛对Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制与Ｈ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ量成正比,它不影响酶的Ｋｍ值（０．１１ｍｍｏｌ／Ｌ）,而是显著降低Ｖｍａｘ,因而它是此酶的可逆性非竞争性抑制剂,其Ｋｉ为０．３２ｍｍｏｌ／Ｌ。     

消炎痛对猪胃H^＋／K^＋—ATP抑制的动力学

消炎痛作为一种要引起胃粘膜急性病变的药物,用分离提纯的猪胃Ｈ＾＋／Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ证明,它可以显著的抑制此酶的活力,０．１ｍｇ／ｍＬ时即可抑制酶活力２７％,０．５ｍｇ／ｍＬ时可抑制全部活力,其Ｋ０．５为０．１８ｍｇ／ｍＬ。消炎痛对Ｈ＾＋／Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制随３０℃时预保温时间的延长而加剧,１０ｍｉｎ预保温可抑制总活力的５０％。消炎痛并不影响Ｈ＾＋／Ｋ＾＋－ＴＡＰａｓｅ的转换温度以及最适     

跨膜Ca~(2+)梯差对大豆下胚轴质膜H~+-ATPase活力的影响

采用两相法得到高纯度封闭的大豆下胚轴质膜微囊,研究了跨膜Ｃａ２＋梯差对质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ质子转运和ＡＴＰ水解活力的影响。结果表明,在１０００：０．１,１０００：０．５,１０００：１及１０００：１０（μｍｏｌ／Ｌ：μｍｏｌ／Ｌ）几种梯差下,随着跨膜钙梯差的减小,质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ质子转运活力逐步降低。然而,上述几种梯差对Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ水解活力的影响却很小。进一步研究发现,１０００：０．１及１０００：１（μｍｏｌ／Ｌ：μｍｏｌ／Ｌ）两种梯差对Ｋｍ值没有影响,但Ｋ＋对Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ的激活作用在两种梯差下存在显著差别。ＭＣ５４０荧光、ＤＰＨ荧光偏振结果表明,跨膜钙梯差影响着膜脂的聚集状态和流动性。本文对跨膜Ｃａ２＋梯差对于大豆下胚轴质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ水解与质子转运活力影响的可能机制进行了讨论。     

ABA、IAA和CaM对发育菜豆子叶质膜H~＋－ATPase活力的效应

以亲水性两相分配法从发育菜豆子叶制备的质膜制剂经冻融循环操作,部分膜微囊可转变成密闭的翻转型。取冻融４次的质膜微囊用于Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ试验表明,ＡＴＰａｓｅ活力为ＡＢＡ和ＣａＭ显著地激活,但受ＩＡＡ显著抑制;质子泵活力被ＡＢＡ显著促进,但为ＣａＭ显著抑制,ＩＡＡ对质子泵活力无显著效应。可以认为：ＡＢＡ促进发育菜豆子叶吸收光合同化物可能是通过促进质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活力,从而促进质子／蔗糖同向运输而获得;ＩＡＡ则可能对菜豆子叶的质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ无显著效应。在激素信号传导途径中,ＣａＭ对质膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活力可能无直接影响。     

K^＋对大豆下胚轴质膜H^＋—ATPase水解与质子转运活力偶联的影响

以大豆（ Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ Ｌ．） 下胚轴为材料, 采用二相法制得高纯度质膜微囊。实验发现,Ｋ＋ 对质膜Ｈ＋＿ＡＴＰａｓｅ水解活力和转运活力刺激差别显著,对转运活力刺激８５０％ , 对水解活力仅刺激２８ ．２％ 。动力学结果表明,有Ｋ＋时ＡＴＰ水解的Ｋｍ 值为０．７０ ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｖｍａｘ 为３４４ ．８ ｎｍｏｌ Ｐｉ·ｍｇ－１ ｐｒｏｔｅｉｎ·ｍｉｎ－１ ; 无Ｋ＋ 时ＡＴＰ水解的Ｋｍ 值为１ ．１４ｍｍｏｌ／Ｌ, Ｖｍａｘ为２８５．７ ｎｍｏｌ Ｐｉ·ｍｇ－１ ｐｒｏｔｅｉｎ·ｍｉｎ－１ 。Ｋ＋ 对ＡＴＰ水解的最适ｐＨ 值也有影响,有Ｋ＋ 时为６ ．５ ,无Ｋ＋ 时降低到６．０ 。进一步实验发现,Ｋ＋ 对羟胺和钒酸钠的抑制作用影响较大,Ｋ＋ 可以提高质膜Ｈ＋＿ＡＴＰａｓｅ 对羟胺和钒酸钠的敏感性。结果表明,Ｋ＋ 可以调节大豆下胚轴质膜Ｈ＋＿ＡＴＰａｓｅ 水解与转运活力之间的偶联程度     

盐胁迫下无花果细胞质和液泡膜H^＋—ATPase活性对脯氨酸积累 …

盐胁迫降低无花果振荡培养细胞培养液ＰＨ添加质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性抑制剂Ｎａ３ＶＯ４则抑制盐诱导的培养液ＰＨ下降,表明盐诱导培养液Ｈ下降主要是细胞质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性增加的结果。ＮａＣｌ处理提高活体细胞质膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性,而降低膜微囊Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性,培养液中添加Ｎａ３ＶＯ４ ５０μｍｏｌ／Ｌ完全抑制盐胁迫下无花果细胞游离脯氨酸只累,但添加更高浓度Ｎａ３ＶＯ４,则提高     

三丁基锡对人红细胞膜Na^＋,K^＋—ATPase活性的抑制作用

三丁基锡（ＴＢＴ）是人红细胞膜上Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的一种抑制剂。该化合物对Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ有很强的抑制能力。在正常的反应体系中,ＴＢＴ浓度仅为１０μｍｏｌ／Ｌ时,该酶的活性全部丧失;其抑制Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的ＩＣ５０值为２．２μｍｏｌ／Ｌ．Ｋ＾＋能增强ＴＢＴ的这种抑制作用,ＴＢＴ为Ｋ＾＋的反竞争性抑制剂。     

三丁基锡对人红细胞膜Na~＋，K~＋－ATPase活性的抑制作用

三丁基锡（ＴＢＴ）是人红细胞膜上Ｎａ~＋,Ｋ~＋－ＡＴＰａｓｅ的一种抑制剂．该化合物对Ｎａ~＋,Ｋ~＋－ＡＴＰａｓｅ有很强的抑制能力．在正常的反应体系中,ＴＢＴ浓度仅为１０μｍｏｌ／Ｌ时,该酶的活性全部丧失;其抑制Ｎａ~＋,Ｋ~＋－ＡＴＰａｓｅ的ＩＣ＿（５０）值为２．２μｍｏｌ／Ｌ．Ｋ~＋能增强ＴＢＴ的这种抑制作用,ＴＢＴ为Ｋ~＋的反竞争性抑制剂．     

消炎痛对猪胃H~ /K~ -ATP酶质子转运功能的抑制

作为猪胃H~ /K~ -ATPase的非竞争性抑制剂,消炎痛明显抑制H~ /K~ -ATPase泡囊的质子转运功能,造成质子泄漏。在0.15 mg/ml蛋白浓度下,4%的消炎痛结合于H~ /K~ -A- TPase泡囊上。它能渗入膜脂相并显著降低膜的流动性,并使H~ /K~ -ATPase内源荧光受到淬灭。从实验结果看来,消炎痛对猪胃H~ /K~ -ATPase质子转运功能的抑制来自对酶蛋白和膜结构影响两个方面,而非仅抑制酶蛋白本身的功能。     

H2O2和.OH及其清除剂对大麦叶片液泡膜微囊质子转运活性的影响

大麦叶片液泡膜微囊经Ｈ２Ｏ２ 和·ＯＨ处理后,Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ 和Ｈ＋ＰＰａｓｅ 水解活性和泵运质子活性下降, Ｈ＋ＰＰａｓｅ 对Ｈ２Ｏ２ 更敏感一些。同时加入与Ｈ２Ｏ２ 和·ＯＨ 相同浓度的抗坏血酸（ＡｓＡ） 或甘露醇可显著恢复两种酶的活性和质子转运活性。Ｈ２Ｏ２ 和·ＯＨ 处理后,Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ 米氏常数（ Ｋｍ） 变大,Ｈ＋ＰＰａｓｅ 的最大反应速度（ Ｖｍａｘ） 减小     

耐低钾水稻的根质膜ATPase和H^＋分泌特性

对耐低钾和不耐低钾的水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）“威优４９”和“远诱１号”的根原生质膜ＡＴＰａｓｅ性质的研究表明,这两种水稻的质膜ＡＴＰａｓｅ活性的最适ｐＨ均为６０,均在底物ＡＴＰ浓度为３ｍｍｏｌ／Ｌ时达到最大反应速度,Ｋｍ值均在０．８５左右。Ｋ＋对这两种水稻的质膜ＡＴＰａｓｅ活性均具有促进作用。当介质中［Ｋｍ］≤５０ｍｍｏｌ／Ｌ时随［Ｋ＋］的增大,对耐低钾品种根质膜ＡＴＰａｓｅ活性的促进作用明显大于不耐低钾品种;当介质［Ｋ＋］在１００～２００ｍｍｏｌ／Ｌ之间时,Ｋ＋对两种水稻品种质膜ＡＴＰａｓｅ活性的刺激效应的差别减小。这两个水稻品种的基础Ｈ＋分泌没有明显差别,但钾刺激的Ｈ＋分泌存在差异,Ｋ＋对耐低钾品种Ｈ＋分泌的刺激效应大于不耐低钾品种。抑制剂实验表明在耐低钾和不耐低钾的水稻品种中,Ｋ＋刺激的根质膜ＡＴＰａｓｅ活性,Ｋ＋刺激的Ｈ＋分泌和Ｋ＋吸收之间存在着紧密的联系。对Ｋ＋刺激的质膜ＡＴＰａｓｅ活性和Ｈ＋分泌的抑制会减少根对Ｋ＋的吸收量。推测耐低钾水稻的质膜ＡＴＰａｓｅ和Ｈ＋分泌对Ｋ＋更为敏感,特别是在低浓度Ｋ＋存在时,可能是耐低钾水稻更能利用低浓度Ｋ＋、在低钾环境中能更好生长的一个原因。     

大豆液泡膜H~+-ATPase泵质子活性的研究

研究了大豆液泡膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ泵质子特性。液泡膜Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ泵质子活性受ＮＥＭ、ＮＢＤ－Ｃｌ、ＤＣＣＤ和ＮＯ３－的抑制。泵质子活性由二价阳离子启动,其有效性依次为Ｆｅ２＋＞Ｍｇ２＋＞Ｍｎ２＋,它以ＡＴＰ为最适底物,ＡＤＰ为竞争性抑制剂;最适ｐＨ为７．０,最适温度为５０°Ｃ。     

杜氏盐藻细胞质膜氧化还原系统与K^＋吸收

杜氏盐藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ）细胞表面存在氧化ＮＡＤＨ 与还原Ｆｅ（ＣＮ）３－６ 的氧化还原系统（ｒｅｄｏｘｓｙｓｔｅｍ ）。该系统在氧化ＮＡＤＨ 时,抑制Ｋ＋ 的吸收,在还原Ｆｅ（ＣＮ）３－６ 时, 促进Ｋ＋ 的吸收,当ＮＡＤＨ 同时存在时, 促进效应最显著, 高达７３５％ 。外源ＮＡＤＨ 促进藻细胞的氧吸收达１６５％ ,而使胞质ｐＨ 下降; 当ＮＡＤＨ 存在时, Ｆｅ（ＣＮ）３－６ 被快速地还原, 同时藻细胞膜外酸化程度增加。质膜Ｈ＋ －ＡＴＰａｓｅ和氧化还原系统的典型抑制剂都不同程度地抑制Ｋ＋ 吸收; 并且钒酸盐对Ｋ＋ 吸收的抑制可以被加入ＮＡＤＨ 和Ｆｅ（ＣＮ）３－６ 而部分恢复, 表明质膜Ｈ＋ －ＡＴＰａｓｅ和氧化还原系统共同参与了细胞Ｋ＋ 的吸收过程     

大豆液泡膜H^＋—ATPase功能与构象关系的初步研究

大豆液泡膜Ｖ型Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ是ＡＴＰａｓｅｓ中的一种,它在植物细胞的生长发育中有重要的作用。利用竹红菌乙素（ＨＢ）和ＫＩ这两种分别猝灭蛋白质疏水区域内源荧光和亲水区域内源荧光的荧光猝灭剂,在不同ｐＨ值、温度条件下对纯化的大豆液泡膜Ｖ型ＡＴＰａｓｅ进行荧光猝灭实验,初步探讨了Ｖ型Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的水解活性同其蛋白质折叠状态间的关系。研究表明,通过比较不同ｐＨ值、温度条件下蛋白质疏水区域和亲     

盐胁迫下钙对大麦根系质膜和液泡膜功能的保护效应（简报）

盐胁迫下外加钙可增强大麦根系质膜液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ、液泡膜质子泵和Ｎａ＾＋／Ｈ＾＋逆向运输活性,促进根系对Ｋ＾＋的选择性吸收和运输,降低叶片的Ｎａ＾＋／Ｋ＾＋比。     

脱落酸对线粒体Na^＋—K^＋ATPase活性的影响

在提取大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍ ａｘ）黄化子叶的线粒体时,于清洗和悬浮介质中加入ＡＢＡ,发现４０ μｍ ｏｌ／Ｌ（±） ＡＢＡ 对线粒体膜结合Ｎａ＋ －Ｋ＋ ＡＴＰａｓｅ 活性及线粒体吸氧速率有明显的促进作用。ＡＢＡ 可使１６℃与２７℃培养的大豆子叶线粒体膜结合Ｎａ＋ －Ｋ＋ ＡＴＰａｓｅ Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图的折点温度分别下降６．３℃和５．９℃,并将该酶的底物动力学曲线由正协同曲线转变为非协同曲线。表明ＡＢＡ 可降低线粒体的膜相变温度     

玉米细胞质分子伴侣Hsp70的ATPase活性

玉米胚乳细胞中纯化的细胞质Ｈｓｐ７０蛋白有低水平的ＡＴＰａｓｅ活性,它在５０℃、ＰＨ５．８、２０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＫＣｌ条件下活性最高,Ｃａ＾２＋和Ｍｇ＾２＋抑制其活性。大肠杆菌ＤｎａＪ蛋白能将玉米细胞质Ｈｓｐ７０的ＡＴＰａｓｅ活性提高６倍,而ＧｒｐＥ蛋白对其影响很小。８种不同的人工合成多肽均能刺激该蛋白折ＡＴＰａｓｅ活性,增加幅度从２．５倍到１０倍痫水性不同的氨基酸对Ｈｓｐ７０的ＡＴＰａｓｅ活性影响     

小麦根液泡膜上存在两种类型ATPase

采用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ柱层析的方法在小麦根液泡膜中分离出两种ＡＴＰａｓｅ,一种需Ｍｇ＾２＋存在于表现催化活性,受质子通道抑制剂ＤＣＣＤ（二环已基碳二亚胺）的抑制和Ｃｌ＾－的激活,为需Ｍｇ＾２＋ＡＴＰａｓｅ,另一种不需Ｍｇ＾２＋就可表现出催化活性,受Ｃａ＾２＋的强烈激活,不受ＤＣＣＤ的抑制和Ｃｌ＾－激活,可能前者与转运质子有关,后者与Ｃａ＾２＋的转运有关。     

温度和底物对大豆液泡膜H~+-ATPase二级结构的影响

利用圆二色性光谱,检测了纯化的大豆液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ在不同条件下蛋白二级结构的变化。液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的圆二色光谱对温度敏感,２５℃、３７℃分别保温１０分钟２０分钟,２０８ｎｍ和２２２ｎｍ双负峰变小,酶蛋白α－螺旋含量减少,与２５℃相比较,３７℃保温时酶蛋白构象的变化更为剧烈、迅速。不同磷酸数目的腺苷酸处理,液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰａｓｅ的α－螺旋含量均降低,降低程度为ＡＤＰ＞ＡＭＰ＞     

败血症大鼠心肌钙通道分布的变化

本研究用结扎盲肠及穿刺（ＣＬＰ）引起败血症。结果证明：大鼠心肌钙通道在早期败血症（ＥＳ,ＣＬＰ后９ｈ）时由心肌轻型囊泡向心肌肌膜转运增多;在晚期败血症（ＬＳ,ＣＬＰ后１８ｈ）时由心肌肌膜向心肌轻型囊泡转运增多。败血症时大鼠心肌肌膜和心肌轻型囊泡钙通道的再分布与ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶（ＰＫＡ）,Ｃａ（２＋）／钙调素依赖性蛋白激酶（ＰＫＭ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）磷酸化作用无关。败血症时大鼠心肌肌膜和心肌轻型囊泡上肾上腺能β－受体、Ｍ－胆碱受体和Ｎａ＋／Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ的变化规律和钙通道的一样,它们可能是败血症时的一种非特异性变化。