λ噬菌体nutL序列突变对N蛋白生物功能的影响

λ噬菌体 Ｎ 蛋白不仅是抗转录终止的正调控因子,也是在翻译水平上阻遏自身基因表达的负调控蛋白．ｎｕｔ Ｒ Ｎ Ａ 位点（包括 ｂｏｘ Ａ 和 ｂｏｘ Ｂ）参与了这两种生物效应．对位于左向操纵子（ｐ Ｌ）的 ｎｕｔ Ｌ 序列进行了突变后,证明 ｎｕｔ Ｌ 缺失及 ｂｏｘ Ｂ 第 ６ 位核苷酸突变使 Ｎ 丧失了正、负调控功能,提示 ｎｕｔ Ｌ 在 Ｎ 介导的调控反应中是必需的．ｎｕｔ Ｌ 序列中 ｂｏｘ Ａ 单碱基突变使 Ｎ 丧失了正调控功能,部分保留了负调控功能．这种负调控作用导至极性效应,使 ｌａｃ Ｚ基因转录水平明显下降．     

SARS-CoV N蛋白抗原表位的筛选和鉴定

利用噬菌体展示的线性12肽库从马抗SARS-CoV IgG筛选SARS-CoV的抗原表位.经生物淘洗富集的噬菌体克隆被测序.获得两个共有序列DXXDP和TXTLL.它们分别与SARS-CoV N蛋白341-345和392-396位氨基酸序列高度同源.含共有序列的克隆在ELISA竞争抑制试验中与SARS-CoV N蛋白竞争结合马抗SARS-CoVIgG.将两个共有序列肽通过基因重组技术成功展示到大肠杆菌鞭毛,获得重组菌F1和F2.用重组菌F1和F2免疫接种试验Balb/c小鼠产生的血清均能与SARS-CoVN蛋白特异结合.说明DXXDP和TXTLL是SARS-CoVN蛋白的两个连续抗原表位.     

Escherichia coli 核糖体蛋白质突变影响Lambda噬菌体N基因的表达

λ Nam 7除其cI基因是cI 857温度敏感突变外,其N基因携有amber无义突变,故在Eseherichia coli A19(met,thi,his-95,rna-19,rel-1)上不能增殖。λcI 857只有cI 857温度敏感突变,其N基因是野生型,所以能以E. coli A19为宿主进行增殖。λcI 857和λ Nam7只有1个N基因之差。λcI 857在A19及其衍生株上增殖的优劣,可以作为判断N基因表达程度高低的标准。本文以24种核糖体蛋白质突变体为宿主,测定λcI 857的成斑率。结果在S3+L22,S4+L16+L24,S21+L25,L24,缺L1,缺S3等突变体中,成斑率下降到10~(-6)—10~(-6);在S3+S18+L6+L24+L27和L27突变体中,成斑率分别提高6.02和3.56倍。以上结果说明核糖体蛋白质突变影响λ N基因的表达。     

SARS病毒N蛋白、E蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定

本研究通过RT-PCR反应获得了SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(E)基因,将n基因和e基因克隆到大肠杆菌表达载体pGEX KG上,并在大肠杆菌中以可溶形式获得高效表达,表达产物经亲和层析纯化.重组蛋白N与SARS病毒抗体呈现特异性的反应,为进一步研究SARS病毒感染免疫应答机制和早期诊断奠定基础     

SARS病毒N蛋白、E蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定

本研究通过RT-PCR反应获得了SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(E)基因,将n基因和e基因克 隆到大肠杆菌表达载体pGEX-KG上,并在大肠杆菌中以可溶形式获得高效表达,表达产物经亲和层析纯化。重 组蛋白N与SARS病毒抗体呈现特异性的反应,为进一步研究SARS病毒感染免疫应答机制和早期诊断奠定基础     

蛋白激酶抑制剂噬菌体的构建和功能研究

人工合成编码ｃＡＭＰ信赖蛋白激酶（ｃＡＰＫ）的热稳定抑制剂第５－２４位氨基酸「ＰＫＩ（５－２４）」的ＤＮＡ片段,并将之克隆到ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ载体ｆｄ－ｔｅｔ－ＤＯＧ１使中,使ＰＫＩ（５－２４）以融合于ｇ３ｐ蛋白的形式展示了噬菌体是到了ＰＫＩ噬菌体,蛋白激酶抑制活性测定表达ＰＫＩ噬菌体可有铲地抑制ＣＡＰＫ的活性。结合实验结果显示ＰＫＩ噬菌体能与固相化小鼠ＣＡＰＫ催化亚基α（Ｈｉｓ６－ｍＣα     

SARS病毒N蛋白的原核重组载体的构建和表达

将SARS病毒N蛋白的基因克隆到原核表达载体 pGEX KG上 ,使其在大肠杆菌DH5α菌株中以与GST蛋白融合的形式表达。采用GluthathionSepharose 4B亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,并用SDS PAGE和WesternBlot对表达的融合蛋白进行分析鉴定。结果表明 ,本实验成功地构建了高效表达SARS病毒N蛋白的重组表达载体 ,所获得的融合蛋白可以直接用于SARS抗体的检测 ,可用于SARS的早期诊断及SARS疫苗的研究。     

β-萘黄酮能抑制荧光素酶活性

目的：研究β-萘黄酮对荧光索酶活性的影响。方法：利用人GCLC基因调控序列驱动的GCLC．PGL3．enhancer-Luciferase报道载体（PL45）转染人肺腺癌细胞A549,人肝癌细胞HepG2,人子宫颈癌细胞HeLa,人乳腺癌细胞MCF-7,人肝癌细胞Bel-7402,人支气管上皮细胞16HBE,β-萘黄酮刺激后,双荧光素酶报告基因检测系统分析其对GCLC基因表达的影响。westerblot检测β-NF刺激16HBE细胞后GCLC蛋白水平的变化。β-萘黄酮刺激转染了表达Luciferase的真核表达载体pRC／CMV2．1uc＋的A549和HepG2细胞后,双荧光素酶报告基因检测系统分析其对Luciferase基因表达的影响。PIA5转染A549和HepG2细胞,裂解细胞后用p-NF刺激,双荧光素酶报告基因检测系统分析其对Luciferase基因的影响。结果：在各种细胞中,转染PL45报道载体后,β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降（p〈0．01）。westerblot结果显示β-NF处理组GCLC蛋白的表达较DMsO对照蛆明显升高。在A549和HepG2细胞中,转染pRC／CMV2．1uc＋载体后,β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降（P〈0．01）。PIA5转染A549和HepG2细胞,裂解细胞后用β-NF刺激,β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降（P〈0．01）。结论：β-萘黄酮直接抑制了荧光素酶的活性     

利用移码突变和终止密码子提高下游目的基因的表达水平

目的:在基因结构复杂的慢病毒载体插入报告基因并提高目的基因表达量。方法:慢病毒载体上有复杂的基因排列,为了不影响慢病毒载体的活性,必须尽量保留原有的基因,替换不必要的基因。首先将报告基因萤光素酶插入慢病毒载体替换基因Env后,结果检测不到报告基因的表达。为了提高报告基因的表达水平,将报告基因的读码框向后移动一个碱基,同时在其上游增加一个终止密码子,然后检测报告基因的表达水平。结果:通过移动报告基因的读码框同时在上游增加终止密码子,使报告基因的表达水平大大提高。结论:在构建基因表达载体时,通过改变目的基因与上游起始密码子ATG之间的相对位置以及增加终止密码子,可以大幅提高目的基因的表达水平。     

l-Lysine repression of penicillin biosynthesis and the expression of penicillin biosynthesis genes acvA and ipnA in Aspergillus nidulans

The addition of 0.1 M L-lysine to the fermentation medium reduced the production of penicillin by about 50% in Aspergillus nidulans. To analyse this effect at the molecular level, the expression of the penicillin biosynthesis genes acvA and ipnA, encoding delta-(L-alpha-aminoadipyl)-L-cysteinyl-D-valine synthetase and isopenicillin N synthetase, was studied by using translational fusions with different reporter genes (strain AXB4A, acvA-uidA, ipnA-lacZ fusions; AXB4B, acvA-lacZ, ipnA-uidA fusions) integrated in single copy at the chromosomal argB locus of Aspergillus nidulans. Irrespective of the reporter genes used the expression of acvA and ipnA fusion genes was repressed in L-lysine grown cultures. The expression of a fusion gene of an A. nidulans primary metabolism gene (oliC-lacZ) was not affected by L-lysine.