共同性外斜视内直肌Myf-5表达研究

目的:观察共同性外斜视患者内直肌中Myf-5的表达变化,探讨其在共同性外斜视发病机制中的作用.方法:收集青岛大学医学院附属医院2009年12月-2010年11月住院手术治疗的共同性外斜视病人获得的内直肌段为斜视组,共16例.另选同期行眼球摘除或角膜移植供体取得的内直肌为成人对照组(共6例).所有的内直肌段固定切片后行Myf-5免疫组织化学染色,测Myf-5在眼外肌中表达的平均光密度值,对两组间平均光密度值进行比较.结果:Myf-5的平均光密度值在斜视组0.024±0.041,对照组0.233±0.024,两者差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:眼外肌中Myf-5表达的降低可能与斜视的发病有关.     

外直肌悬吊后徙术矫治大角度外斜视

目的:探讨矫治大角度外斜视在采用超常量徙后外直肌时,肌肉断端的缝合位置问题及外直肌悬吊后徙术的可行性。方法:对2 0 0 1年以来的15例外斜视(斜视度最小为2 5°,最大为4 5°)的患者采用外直肌悬吊后徙的方法,即:在外直肌止端后1mm两侧缘各做一套环式缝合结扎后,于肌止端剪断外直肌。由肌止点向后约5mm处,将肌肉缝线平行外直肌上下缘穿过浅层巩膜约2mm后穿出巩膜。测量肌止点与拟行肌肉缝线结扎点后肌肉断端的距离是否与术前拟行后徙量相符。确定后结扎缝线,形成吊床状。结果:15例外斜视患者,11例行双眼外直肌超常量徙后,4例在双眼外直肌徙后同时联合单眼内直肌缩短术,外直肌徙后均采用悬吊式徙后方法,术后观察6 - 12个月,1例残留5°外斜,其余14例均达到正常眼位。结论:超常量徙后外直肌时,采用悬吊后徙方法,既减少了眼外肌与眼球筋膜的大范围粘连及手术操作困难时易带来的巩膜意外损伤,又达到了超常量徙后矫治大角度外斜视的目的。手术操作简便易行,值得临床应用。     

牦牛Myf-5基因的克隆测序及其系统进化研究

本研究对牦牛(九龙牦牛)的生肌决定因子5(Myf-5)基因进行了T-A克隆测序和分析,并与多个物种的相应基因编码区核苷酸序列、氨基酸序列进行了比对分析,构建了物种间的系统进化树.结果 表明:①牦牛的Myf-5基因大小为3313 bp,由3个外显子和2个内含子组成,与普通牛等9个物种比较,在基因大小上有较大的差异,但外显子和内含子的组成一致.②牦牛、大额牛、瘤牛、水牛、普通牛、人、恒河猴、黑猩猩、狗、家鼠、软体贝壳、鸡、斑马鱼等物种间Myf-5基因编码区的核苷酸序列同源性较高,其中,牦牛、大额牛、瘤牛、水牛、普通牛间的同源性最高,达98.4%以上,说明Myf-5基因编码区核苷酸序列在动物物种间具有较高的保守性.③牦牛、大额牛、瘤牛、水牛、普通牛、黑猩猩、恒河猴、人、狗、家鼠、软体贝壳、鸡、斑马鱼等物种间Myf-5基因编码蛋白的氨基酸序列具有较高的同源性,保守性强,这一结果与编码区核苷酸序列的比对结果基本一致.④根据核苷酸序列,用NJ法构建的牦牛、大额牛、瘤牛、水牛、普通牛、人、恒河猴、黑猩猩、狗、家鼠、软体贝壳、鸡、斑马鱼等13个物种的分子系统进化树显示:牦牛、普通牛、瘤牛、水牛和大额牛在较近的亲缘关系下聚为一大类,人、黑猩猩和恒河猴聚为另一大类,然后这两类再和其他物种相聚.这一分类结果与各物种的动物学分类结果和血液蛋白、mtDNA水平上的聚类结果基本一致,支持牦牛、普通牛和瘤牛3个物种间不应该是属间或亚属间关系,而应是同一属下的不同种,将牦牛、普通牛和瘤牛划分在同一个属--牛属(Bos),而将水牛划分在另一个单独的属的观点.同时也显示该基因序列适合用于动物学分类.     

间歇性外斜视患儿的注意跟踪能力异常

间歇性外斜视是儿童眼科的常见疾病之一,也是目前眼科学研究的热点领域之一.本研究使用多物体跟踪实验范式,系统考察了间歇性外斜视儿童,相对于弱视儿童以及正常对照儿童,注意的容量是否存在异常.实验结果发现间歇性外斜视儿童和弱视儿童的注意跟踪能力都显著地差于正常对照儿童,而且间歇性外斜视儿童和弱视儿童的跟踪成绩基本没有差别,他们的注意跟踪功能的受损程度相近.本研究首次报道了间歇性外斜视儿童注意能力的行为异常,对进一步研究间歇性外斜视的发病机理和早期临床诊断具有潜在的参考意义.     

功能矫形前伸青春期大鼠下颌后翼外肌MyoD、myogenin的表达

目的：探讨＂应力-生长（改建）＂在细胞水平上的体现,为功能矫形治疗和矫治效果的保持提供新思路和实验依据。方法：本实验选用20只4周龄,雄性SD大鼠随机分为8组。其中实验组大鼠经戊巴比妥麻醉后佩戴上颌斜面导板,对照组未佩用。依据时间不同又分为四组：1d,7d,14d,21d。采用RT-PCR技术分析各组大鼠翼外肌组织中肌分化相关基因MyoD、myogenin mRNA的表达变化。结果：未施加功能矫形力的大鼠翼外肌组织MyoD表达伴随其生长发育呈现递减趋势,实验组在第7 d出现表达上调。同时,力学刺激后实验组动物myogenin的表达与对照组相比较在14 d组出现明显上调。结论：功能矫形力作用于翼外肌组织可以诱导MyoD和myogenin的表达上调进而诱导成肌细胞的分化。     

大鼠脑内5-HT能神经元对咽肌的支配及调控

用ＰＲＶ和５－ＨＴ免疫组织化学双标记方法研究脑内５－ＨＴ能神经元对咽肌的神经支配及调控。观察到中缝核群的中缝苍白核、中缝隐核、中缝大核、中缝桥核、中缝正中核、中缝背核、和中缝尾侧线形核等部位有ＰＲＶ和５－ＨＴ双标记细胞,直接证明中缝核群的５－ＨＴ能神经元投射到支配咽肌的疑核运动神经元和孤束核中的前运动神经元,调控咽肌的运动。并推测脑干中缝核群中的５－ＨＴ能神经元对咽肌运动的调控可能经由５ＨＴ３和５ＨＴ１Ａ两种受体介导。     

功能矫形前伸青春期大鼠下颌后翼外肌MyoD、myogenin 的表达

目的:探讨\"应力-生长(改建)\"在细胞水平上的体现,为功能矫形治疗和矫治效果的保持提供新思路和实验依据。方法:本实验选用20只4周龄,雄性SD大鼠随机分为8组。其中实验组大鼠经戊巴比妥麻醉后佩戴上颌斜面导板,对照组未佩用。依据时间不同又分为四组:1d,7d,14d,21d。采用RT-PCR技术分析各组大鼠翼外肌组织中肌分化相关基因MyoD、myogenin mRNA的表达变化。结果:未施加功能矫形力的大鼠翼外肌组织MyoD表达伴随其生长发育呈现递减趋势,实验组在第7 d出现表达上调。同时,力学刺激后实验组动物myogenin的表达与对照组相比较在14 d组出现明显上调。结论:功能矫形力作用于翼外肌组织可以诱导MyoD和myogenin的表达上调进而诱导成肌细胞的分化。     

一个常染色体显性遗传先天性眼外肌 纤维化家系A

为寻找疾病相关基因,通过随访调查、体检、病理检查等手段,发现了一眼外肌纤维化家系4代中有15人患有眼外肌纤维化综合征,主要表现先天性上眼睑下垂、下颌上举、头后仰、双眼固定下转位和被动牵拉试验阳性,眼外肌病理检查结果为肌纤维化和玻璃样变性,所有阳性体征者除眼球运动限制程度有区别外,其他眼部症状基本相同。遗传分析表明,该疾病属常染色体显性遗传。该家系可作为寻找眼外肌纤维化疾病相关基因的宝贵资源。Abstract: To discover novel disease genes, a family with congenital fibrosis of the extraocular muscle was studied by a follow-up investigation, eye examinations and histo-pathological examination. There were fifteen cases suffering from congenital general fibrosis syndrome in four generations. They have congenital blepharoptosis, head tilt, chin lift, primary gaze fixed in a hypo- and exotropic position. The diagnosis is confirmed with positive forced duction testing in the affected eye. Furthermore, fibrosis of the extraocular muscles and hyaline degeneration was confirmed by histo-pathological examination. Except for different levels of restriction of the eyeball movements , other eye symptoms in positive patients are substantially identical. The genetic analysis showed that this disease was caused by autosomal dominant inheritance. The pedigree may be precious resource candidate for discovering disease gene related with congenital fibrosis of the extraocular muscle.     

外泌体:运动防治肌少症的新靶点

肌少症是一种以增龄性的肌肉质量减少及生理功能减退为主要特征的综合征,其发病率逐年上升,严重影响老年人生活质量。众所周知,运动促进机体健康,建立与保持骨骼肌肉功能,被视为防治肌少症的主要干预方法。其中,有氧运动和抗阻运动被广泛关注。新兴研究表明,各种细胞来源外泌体作为介质具有促进骨骼肌再生和肌蛋白合成的功能,且运动介导外泌体可通过携带其miRNA和蛋白质在肌少症中的防治中发挥关键作用,已成为运动防治肌少症的新方向。因此,本文就不同运动方式与外泌体在防治肌少症中的最新研究进行总结,以期为肌少症的防治提供理论依据。     

草鱼生肌因子5基因的克隆及其组织表达谱分析

目的:获得草鱼生肌因子5(Myf-5)基因序列,分析其在草鱼不同组织和不同发育阶段中的表达规律。方法:根据鲤鱼Myf-5基因序列设计引物,用草鱼肌肉组织总RNA,经RT-PCR扩增其Myf-5基因序列;利用半定量RT-PCR分析草鱼Myf-5基因在草鱼不同组织和不同发育阶段的mRNA表达特性。结果:获得了草鱼Myf-5基因开放读框序列723 bp,GenBank登录号为GU290227;该基因编码由240个氨基酸残基组成的蛋白,具有MyoD家族基因的典型性碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)结构,其氨基酸序列与斑马鱼、鲤鱼、虹鳟、大西洋鲑等的同源性较高(74%~97%),与哺乳动物和禽类如人、小鼠、大鼠、猪、牛和鸡的同源性较低(56%~60%);在草鱼红肌、白肌、肝胰脏、肾脏、脑和肠中均检测到Myf-5基因的表达,红肌、白肌和脑组织中Myf-5基因mRNA的表达量显著高于其他组织(P<0.05);草鱼Myf-5基因的表达随着其生长发育呈下降趋势,在较大规格试验鱼(500 g)中的表达显著低于其他2种规格(50~60 g、120~130 g)的试验鱼(P<0.05)。结论:获得了草鱼Myf-5基因序列,其在红肌、白肌和脑组织中的表达量显著高于其他组织,并随生长发育呈下降趋势,为研究Myf-5在草鱼肌肉发育过程中的作用提供了基础资料。     

非洲爪蟾肌肉决定基因Xmyf—5表达调控的研究

Ｘｍｙｆ－５是爪蟾胚胎肌细胞决定的关键基因之一,研究Ｘｍｙｆ－５的表达调控有助于揭示肌肉原基的形成和肌肉发育的分子机制。从爪蟾部分基因组文库筛选到Ｘｍｙｆ－５５‘上游４．９ｋｂ片段。该片段指导报告基因在爪蟾胚胎内的表达以及其缺失片段指导的报告基因活性分析结果显示,Ｘｍ６ｓｆ－５５’上游４．９ｋｂ片段内含有指导Ｘｎｙｆ－５在胚胎内的表达以及其缺失片段指导的报告基因活性分析结果显示,Ｘｍｙｆ－５５‘     

细胞凋亡及API5与糖尿病性勃起功能障碍的相关性研究

为探讨糖尿病(DM)大鼠阴茎海绵体凋亡情况,以及与API5表达的相关性,采用链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病大鼠模型,并使用APO阴茎勃起实验筛选DMED大鼠并检测各组大鼠阴茎海绵体压力(ICP).10周后取大鼠阴茎海绵体组织,通过原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学法分别检测阴茎海绵体细胞凋亡及API5的表达情况.在该实验中,动物模型血糖浓度:观察组显著高于对照组(P<0.05);体重变化:观察组明显低于对照组(P<0.05);观察组ICP和ICP/MAP均明显低于对照组(P<0.05);观察组大鼠阴茎海绵体组织的细胞凋亡较对照组显著升高(P<0.05);观察组大鼠阴茎海绵体组织中API5蛋白表达较对照组明显减少.通过实验,可了解DM大鼠阴茎海绵体细胞凋亡率增加,这可能是糖尿病性勃起功能障碍的发病机制之一,而API5可能参与了DM大鼠阴茎海绵体细胞凋亡的基因调控.     

5-氟尿嘧啶靶向衍生物的研究进展

5-氟尿嘧啶是目前临床上的一线抗肿瘤药物之一,其抗瘤谱广,为高效抗代谢药物,但其首过代谢明显,毒副作用大,治疗剂量与中毒剂量接近,且口服吸收不稳定,半衰期短。因此,时5-氟尿嘧啶进行有效的分子修饰,以克服其缺点,提高其靶向性,最大程度地发挥其活性作用和减轻毒副作用,已成为当今抗癌药物研究的热点。本文根据不同靶向载体,对近年来国内外各种分子修饰的5-氟尿嘧啶靶向衍生物及其抗肿瘤活性研究进行综述。     

Altered Dihydropyrimidine Dehydrogenase Activity Associated with Mild Toxicity in Patients Treated with 5-Fluorouracil Containing Chemotherapy

Dihydropyrimidine dehydrogenase (DPD) plays a pivotal role in the metabolism of 5-fluorouracil (5FU). In patients treated with capecitabine or 5FU combined with other chemotherapeutic drugs, DPD activity in peripheral blood mononuclear cells was increased in patients experiencing grade I/II neutropenia. In contrast, decreased DPD activity proved to be associated with grade I/II dermatological toxicity, including hand-foot syndrome. Thus, patients with a low-normal or high-normal DPD activity proved to be at risk of developing mild toxicity upon treatment with 5FU-based chemotherapy, demonstrating the important role of DPD in the etiology of toxicity associated with 5FU and the catabolites of 5FU.     

Expression pattern of 5'-nucleotidase in Dictyostelium.

In order to analyze the expression pattern of the 5′-nucleotidase (5nt) gene in Dictyostelium, we made a fusion construct in which the 5nt promoter directed the expression of β-galactosidase gene. The reporter gene was not active in vegetative amoebae but was expressed during the aggregation stage. At the slug stage, 5nt was highly expressed in pstAB cells. As the slug moved along the substratum, high activity of β-galactosidase was detected in cells that were left behind in the slime trail. In the completed fruiting body, 5nt was expressed in the lower cup, the anterior like cells (ALC) and the basal disc.     

丙型肝炎病毒NS5A基因在昆虫细胞中的表达及其分布研究

应用PCR方法从含有丙肝病毒全部非结构蛋白基因的质粒pBAC25中扩增出全长的NS5A基因DNA片段(约1.34kb),PCR扩增NS5A基因片段克隆到转移载体pBlueBacHisA中.重组转移质粒pBlueBacHis5A DNA与野生型杆状病毒(AcNPV)DNA共转染SF-9昆虫细胞,通过空斑纯化获得带有NS5A基因的重组病AcNS5A.对重组病毒基因组DNA进行酶切和PCR鉴定,证实HCV NS5A基因已插入重组病毒基因组中.AcNS5A感染SF-9细胞后,在细胞中表达出一条64kD的蛋白,用Western-blot分析,结果表明这种蛋白与抗HCV HS5A特异性抗体发生强烈反应,说明NS5A基因已在细胞中得到表达,应用免疫荧光技术与免疫组化技术进一步研究NS5A蛋白在昆虫细胞中不同时间的表达情况及其分布,结果表明,NS5A蛋白在AcNS5A重组病毒感染细胞24h后主要分布在细胞质膜上,而在48h后则同时分布于细胞质膜和细胞核内,在72h则完全布满整个细胞,我们认为NS5A蛋白定位于质膜和细胞核中,暗示着在病毒复制过程中NS5A蛋白可能参与病毒RNA在质膜上复制和细胞基因表达的调控.     

小麦HMW-GS1D×5基因时间特异性表达的研究

利用小麦高分子量谷蛋白１Ｄ×５亚基探针,研究ＨＭＷ－ＧＳ１Ｄ×５基因表达的规律。结果表明,ＨＭＷ－ＧＳ１Ｄ×５基因从开花初期开始表达。这为从生理、营养、施肥等诸多方面人为地对ＨＭＷ谷蛋白基因的表达加以调控,使之在特定时期能够充分表达该基因从而改善小麦品质打下基础。     

MEK5基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对MEK5的表达抑制

目的 构建人MEK5基因的小干扰RNA（siRNA）重组腺病毒表达载体,观察其在胃腺癌SGC7901细胞中对MEK5的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEK5基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,将得到的重组穿梭质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃希菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.将PacⅠ酶切鉴定正确的重组腺病毒质粒经乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌SGC7901细胞,Western印迹法检测其对MEK5表达的抑制.结果 经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误.Western印迹检测结果显示pAd-MEK5-siRNA2可抑制MEK5基因的表达,其有效抑制率达75.5 %.结论本研究成功地构建了针对人MEK5基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEK5基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础.